研究課題
基盤研究(C)
(1) ex-vivoにおける活性化血小板上のphosphatidylserine(PS)露出調節機構の解明と組織因子(Tissue Factor : TF)発現micro-particle集積の解析検討in-vivoにおける血小板血栓形成の解析において血小板血栓の中央部の血小板のみにPS発現が認められた事実より、活性化血小板上へのphosphatidylserine(PS)の露出に及ぼすfibrin network形成の影響を共焦点顕微鏡を用いて検討した。血小板数を調節した多血小板血漿に蛍光標識fibrinogen(fbg)を加え、TF+カルシウムイオン、あるいはトロンビンで刺激することにより、フィブリン網形成とPS発現を時空間的に解析した。いずれの刺激でもPSの発現とフィブリン網の形成が観察できた。フィブリン網に結合した血小板の細胞内Ca^(++)濃度は、PS露出に先行して増加した。血小板とフィブリン網の結合を阻害するGPIIB/IIIa拮抗薬、フィブリン重合を阻害するGly-Pro-Arg-Proペプチド、更には血小板骨格の再構築を抑制するcytochalasin BによりPS発現は減弱した。PS発現には血小板がフィブリン骨格に結合し、結合血小板の骨格変化に伴う血餅退縮による機械的刺激が必須である事実が明らかになった。(論文投稿中)U937単球系培養細胞をCalcium ionophoreで刺激しTF発現microparticleを得た。上記と同様の系にmicroparticleを添加後フィブリン網が形成される事実が明らかになり、凝固系活性化の起点になると考えられた。TF、FVIIaとPS発現血小板の局在を解析中である。(2) in-vivoにおける活性化血小板上へのTF-FVIIa集積の解析in-vivoにおいてレーザー照射による血管内皮傷害部に形成された血栓中に、蛍光標識FVIIaと蛍光標識可溶性TFが集積する事実を認めた。PS発現の局在との一致性を確認中である。
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