RNAiコレクションによるエストロゲン応答性G蛋白結合型受容体の網羅的解析

• 研究課題/領域番号: 21590256
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 環境生理学(含体力医学・栄養生理学)
• 研究機関: 山口大学
• 研究代表者: 水上 洋一 山口大学, 総合科学実験センター, 教授 (80274158)
• 研究分担者: 横溝 岳彦 九州大学, 医学研究院, 教授 (60302840) ; 岡本 まり子 山口大学, 総合科学実験センター, 助教 (30415111)
• 研究期間 (年度): 2009 – 2011
• 研究課題ステータス: 完了 (2011年度)
• 配分額: 4,680千円 (直接経費: 3,600千円、間接経費: 1,080千円); 2011年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円); 2010年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円); 2009年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円)
• キーワード: 女性ホルモン / 細胞膜受容体 / G蛋白結合型受容体 / RNAi / スクリーニング / エストロゲン / エストエゲン / GPCR / シグナル伝達 / 受容体 / 生殖器

研究概要

女性ホルモンであるエストロゲンは転写活性を有しているが、細胞内カルシウムの上昇など数分以内での活性も有している。この急性期の反応は細胞膜に作用しているが、そのメカニズムは不明であった。そこで急性期の作用を解明するため細胞膜受容体であるG蛋白結合型受容体(GPCR)に対するRNAiを合成した。しかし、エストロゲンの作用は予想外に弱く、内因性受容体では明確な細胞応答が観察されず、アッセイ系の再検討が必要であった。

研究成果

• [雑誌論文] Optimizing high-resolution melting analysis for the detection of mutations of GPR30/ GPER-1 in breast cancer (2012)
  • 著者名/発表者名: Aihara, M., Yamamoto, S., Nishioka, H., Hamano, K., Oka, M., and Mizukami, Y.
  • 雑誌名: Gene 巻: (in press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] A high-affinity monoclonal antibody against the FLAG tag useful for G-protein coupled receptor study (2012)
  • 著者名/発表者名: Sasaki, F., Okuno, T., Saeki, K., Min, L., Onohara, N., Kato, H., Shimizu, T. and Yokomizo, T.
  • 雑誌名: Anal. Biochem 巻: (in press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] 細胞膜エストロゲン受容体GPER/ GPR30は,なぜ小胞体で見つかったのか (2012)
  • 著者名/発表者名: 水上洋一
  • 雑誌名: 日本薬理学会誌
  • NAID: 10029604194
• [雑誌論文] 細胞膜エストロゲン受容体GPER/GPR30は,なぜ小胞体で見つかったのか! (2012)
  • 著者名/発表者名: 水上洋一
  • 雑誌名: 日本薬理学会誌 巻: (印刷中)
  • NAID: 10029604194
  • 査読あり
• [雑誌論文] Optimizing high-resolution melting analysis for the detection of mutations of GPR30/GPER-1 in breast cancer (2012)
  • 著者名/発表者名: Aihara, M., Yamamoto, S., Nishioka, H., Hamano, K., Oka, M., Mizukami, Y.
  • 雑誌名: Gene 巻: (in press) 号: 2 ページ: 95-105
  • DOI: 10.1016/j.gene.2012.04.029
  • 査読あり
• [雑誌論文] A high-affinity monoclonal antibody against the FLAG tag useful for G-protein coupled receptor study (2012)
  • 著者名/発表者名: F.Sasaki
  • 雑誌名: Analytical Biochemistry 巻: (掲載決定) 号: 2 ページ: 157-165
  • DOI: 10.1016/j.ab.2012.03.014
  • 査読あり
• [雑誌論文] Gタンパク質共役型受容体と生理活性脂質 (2012)
  • 著者名/発表者名: 横溝岳彦
  • 雑誌名: 臨床検査 巻: 63 ページ: 117-124
• [雑誌論文] IL-27 inhibits pathophysiological intraocular neovascularization due to laser burn (2012)
  • 著者名/発表者名: Hasegawa E, Oshima Y, Takeda A, Saeki K, Yoshida H, Sonoda KH, Ishibashi T
  • 雑誌名: J.Leukoc.Biol. 巻: 91 号: 2 ページ: 267-273
  • DOI: 10.1189/jlb.1110603
  • 査読あり
• [雑誌論文] International Union of Basic and Clinical Pharmacology. LXXXIV : Leukotriene Receptor Nomenclature, Distribution, and Pathophysiological Functions (2011)
  • 著者名/発表者名: Back, M., Dahlen, S. E., Drazen, J. M., Evans, J. F., Serhan, C. N., Shimizu, T., Yokomizo, T. and Rovati, G. E.
  • 雑誌名: Pharmacol 巻: 63 ページ: 539-584
  • 査読あり
• [雑誌論文] Alterations in adhesion junction precede gap junction remodeling during the development of heart failure in cardiomyopathic hamster. (2011)
  • 著者名/発表者名: Yoshida M, Ohkusa T, Nakashima T, Takanari H, Yano M, Takemura G, Honjo H, Kodama I, Mizukami Y, Matsuzaki. M.
  • 雑誌名: Cardiovasc 巻: 92(1) ページ: 95-105
  • 査読あり
• [雑誌論文] Operative injury accelerates tumor growth by inducing mobilization and recruitment of bone marrow-derived stem cells. (2011)
  • 著者名/発表者名: Takemoto Y, Li TS, Kubo M, Ohshima M, Ueda K, Harada E, Enoki T, Okamoto M, Mizukami Y, Murata T, Hamano K.
  • 雑誌名: Surgery 巻: 149(6) ページ: 792-800
  • 査読あり
• [雑誌論文] Operative injury accelerates tumor growth by inducing mobilization and recruitment of bone marrow-derived stem cells (2011)
  • 著者名/発表者名: Takemoto Y, Li TS, Kubo M, Ohshima H, Ueda K, Harada E, Enoki T, Okamoto M, Mizukami Y, Murata T, Hamano K
  • 雑誌名: Surgery 巻: Jun;149(6) 号: 6 ページ: 792-800
  • DOI: 10.1016/j.surg.2011.02.005
  • 査読あり
• [雑誌論文] Alterations in adhesion junction precede gap junction remodeling during the development of heart failure in cardiomyopathic hamster (2011)
  • 著者名/発表者名: Yoshida M, Ohkusa T, Nakashima T, Takanari H, Yano M, Takemura G, Honjo H, Kodama I, Mizukami Y, Matsuzaki, M
  • 雑誌名: Cardiovasc.Res 巻: Oct 1;92(1) 号: 1 ページ: 95-105
  • DOI: 10.1093/cvr/cvr182
  • 査読あり
• [雑誌論文] Leukotriene B_4 receptors : Novel roles in immunological regulations (2011)
  • 著者名/発表者名: Yokomizo T
  • 雑誌名: Adv.Enzyme Regul. 巻: 51 号: 1 ページ: 59-64
  • DOI: 10.1016/j.advenzreg.2010.08.002
  • 査読あり
• [雑誌論文] What is the natural ligand of GPR55? (2011)
  • 著者名/発表者名: Okuno T, Yokomizo T
  • 雑誌名: J.Biochem.(Tokyo) 巻: 149 号: 5 ページ: 495-497
  • DOI: 10.1093/jb/mvr022
  • NAID: 10030584968
  • 査読あり
• [雑誌論文] Proteomic Analysis of Proteins Expressing in Regions of Rat Brain by Combination of SDS-PAGE with Nano-Liquid Chromatography-Quadrupole Tandem Mass spectrometry (2010)
  • 著者名/発表者名: Katagiri, T., Hatano, N., Aihara, M., Kawano, H., Okamoto, M., Xing, L., Izumi, T., Maekawa, T., Nakamura, S., Ishihara, T., Shirai, M., Mizukami, Y.
  • 雑誌名: Proteome Science 巻: 8(1): 41
  • 査読あり
• [雑誌論文] In vivo functions of GPR30/ GPER-1, a membrane receptor for estrogen-From discovery to functions in vivo- (2010)
  • 著者名/発表者名: Mizukami, Y.
  • 雑誌名: Endocrine J. 巻: 57(2) ページ: 101-107
  • NAID: 10029583542
  • 査読あり
• [雑誌論文] Proteomic Analysis of Proteins Expressing in Regions of Rat Brain by Combination of SDS-PAGE with Nano-Liquid Chromatography-Quadrupole Tandem Mass spectrometry (2010)
  • 著者名/発表者名: Katagiri, T., et al
  • 雑誌名: Proteome Science 巻: 8(1):41(Epub ahead of print)
  • 査読あり
• [雑誌論文] In vivo functions of GPR30/GPER-1, a membrane receptor forestrogen-From discovery to functions in vivo- (2010)
  • 著者名/発表者名: Mizukami, Y.
  • 雑誌名: Endocrine J. 巻: 57(2) ページ: 101-107
  • NAID: 10029583542
  • 査読あり
• [雑誌論文] In vivo functions of GPR30/GPER-1, a membrane receptor for estrogen-From discovery to functions in vivo- (2010)
  • 著者名/発表者名: Mizukami, Y.
  • 雑誌名: Endocrine J (In press)
  • NAID: 10029583542
  • 査読あり
• [雑誌論文] Neurtrophil elastase inhibitor, ONO-5046, attenuates hippocampal neuronal damage after transient forebrain ischemia in rats (2009)
  • 著者名/発表者名: Matayoshi, H., Hirata, T., Yamashita S., Ishida, K., Mizukami, Y., Gondo, T., Matsumoto, M., Sakabe, T.
  • 雑誌名: Brain Res 巻: 1259 ページ: 98-106
  • 査読あり
• [雑誌論文] Repeated preconditioning with hyperbaric oxygen induces neuroprotection against forebrain ischemia via suppression of p38 mitogen activated protein kinase (2009)
  • 著者名/発表者名: Yamashita, S., Hirata, T., Mizukami, Y. Cui, Y. J., Fukuda, S., Ishida, K., Matsumoto, M., Sakabe, T.
  • 雑誌名: Brain Res. 巻: 1301 ページ: 171-179
  • 査読あり
• [雑誌論文] 性ステロイドホルモンとGPCR (2009)
  • 著者名/発表者名: 水上洋一
  • 雑誌名: 実験医学 巻: 8 ページ: 2080-2086
• [雑誌論文] Neurtrophil elastase inhibitor, ONO-5046, attenuates hippocampal neuronal damage after transient forebrain ischemia in rats (2009)
  • 著者名/発表者名: Matayoshi, H., et al
  • 雑誌名: Brain Res. 1259 ページ: 98-106
  • 査読あり
• [雑誌論文] Repeated preconditioning with hyperbaric oxygen induces neuroprotection against forebrain ischemia via suppression of p38 mitogen activated protein kinase (2009)
  • 著者名/発表者名: Yamashita, S., et al
  • 雑誌名: Brain Res. 1301 ページ: 171-179
  • 査読あり
• [雑誌論文] 性ステロイドホルモンとGPCR (2009)
  • 著者名/発表者名: 水上洋一
  • 雑誌名: 実験医学 8 ページ: 2080-2086
  • 査読あり
• [学会発表] Generation of a novel anti-FLAG monoclonal antibody (2012)
  • 著者名/発表者名: Yokomizo T.
  • 学会等名: The 7th Korea-Japan Conference on Cellular Signaling for Young Scientists
  • 発表場所: Ulsan, Korea
• [学会発表] Generation of a novel anti-FLAG monoclonal antibody (2012)
  • 著者名/発表者名: Yokomizo, T
  • 学会等名: The 7th Korea-Japan Conference on Cellular Signaling for Young Scientists
  • 発表場所: 韓国(Ulsan)(招待講演)
• [学会発表] 生理活性脂質受容体の同定と生体内機能の解析・高親和性FLAG抗体の樹立と応用 (2011)
  • 著者名/発表者名: 横溝岳彦
  • 学会等名: 第2回九州エリア薬理・生理学若手研究会
  • 発表場所: 九州大学馬出病院地区コラボステーション1視聴覚室福岡(招待講演)
  • 年月日: 2011-12-26
• [学会発表] Crucial role of the leukotriene B4 receptor 2, BLT2 in epidermal wound healing.(Oralaward) (2011)
  • 著者名/発表者名: Liu M., Saeki K., Yokomizo T.
  • 学会等名: The 10th Global COE International Symposium & 7th Young Investigators Forum
  • 発表場所: Singapore Singapore
  • 年月日: 2011-12-23
• [学会発表] Two distinct leukotriene B4 receptors : BLT1 and BLT2 (2011)
  • 著者名/発表者名: Yokomizo, T, Liu, M, Saeki, K, Okuno
  • 学会等名: The 10th JBS Biofrontier Symposium : New aspects of phospholipid biology and medicine
  • 発表場所: ホテル・ルイガンス福岡(招待講演)
• [学会発表] Crucial role of the leukotriene B4 receptor BLT2 in epidermal wound healing (2011)
  • 著者名/発表者名: Liu M., Saeki K., Abe Y., Yokomizo T.
  • 学会等名: Experimental Biology (Annual Meeting of American Society for Biochemistry and Molecular Biology)
  • 発表場所: Washington DC (USA)
• [学会発表] Roles of 12-HHT/LTB4 receptor, BLT2 in murine inflammatory colitis (2011)
  • 著者名/発表者名: Okuno T., Iizuka Y., Saeki K., Yokomizo T.
  • 学会等名: Experimental Biology (Annual Meeting of American Society for Biochemistry and Molecular Biology)
  • 発表場所: Washington DC (USA)
• [学会発表] Leukotriene B4 augments and restores FcgRs-dependent phagocytosis in macrophages (2011)
  • 著者名/発表者名: Saeki K., Okamoto F., Yamasaki S., Yokomizo T
  • 学会等名: Experimental Biology (Annual Meeting of American Society for Biochemistry and Molecular Biology)
  • 発表場所: Washington DC (USA)
• [学会発表] Generation of monoclonal antibodies specific for mouse leukotriene B4 receptor 1 and N-terminal FLAG sequence (2011)
  • 著者名/発表者名: Sasaki F., Saeki K., Okuno T., Yokomizo T.
  • 学会等名: Experimental Biology (Annual Meeting of American Society for Biochemistry and Molecular Biology)
  • 発表場所: Washington DC (USA)
• [学会発表] BLT1 as a potential marker of mouse dendritic cell subsets (2011)
  • 著者名/発表者名: Koga T., Sasaki F., Saeki K., Okuno T., Yokomizo T.
  • 学会等名: The 10th JBS Biofrontier Symposium : New aspects of phospholipid biology and medicine
  • 発表場所: ホテル・ルイガンス福岡
• [学会発表] Two distinct pathway for biosynthesis of 12-HHT, a ligand for BLT2 (2011)
  • 著者名/発表者名: Matsunobu T., Okuno T., Yokomizo T.
  • 学会等名: The 10th JBS Biofrontier Symposium : New aspects of phospholipid biology and medicine
  • 発表場所: ホテル・ルイガンス福岡
• [学会発表] 12-HHT is a natural ligand for BLT2 (2011)
  • 著者名/発表者名: Okuno T., Yokomizo T.
  • 学会等名: The 10th JBS Biofrontier Symposium : New aspects of phospholipid biology and medicine
  • 発表場所: ホテル・ルイガンス福岡
• [学会発表] Leukotriene B4 augments and restores FcgRs-dependent phagocytosis in macrophages (2011)
  • 著者名/発表者名: Saeki K., Okamoto F., Yokomizo T
  • 学会等名: The 10th JBS Biofrontier Symposium : New aspects of phospholipid biology and medicine
  • 発表場所: ホテル・ルイガンス福岡
• [学会発表] Expression of an LTB4 receptor BLT1 in M2 macrophages (2011)
  • 著者名/発表者名: Sasaki F., Koga T., Saeki K., Okuno T., Yokomizo T.
  • 学会等名: The 10th JBS Biofrontier Symposium : New aspects of phospholipid biology and medicine
  • 発表場所: ホテル・ルイガンス福岡
• [学会発表] ロイコトリエンB4第二受容体BLT2の新しいリガンド12-HHTの生合成機構の解明 (2011)
  • 著者名/発表者名: 松延武彦, 奥野利明, 横溝岳彦
  • 学会等名: 第53回日本脂質生化学会
  • 発表場所: 東京ガーデンパレス東京
• [学会発表] 二つのロイコトリエンB4受容体(BLT1,BLT2)のシグナルと病態生理機能 (2011)
  • 著者名/発表者名: 佐伯和子, 劉〓, 岡元冬樹, 奥野利明, 横溝岳彦
  • 学会等名: 第84回日本生化学会大会シンポジウム
  • 発表場所: 国立京都国際会館京都
• [学会発表] Crucial role of the leukotriene B4 receptor BLT2 in epidermal wound healing (2011)
  • 著者名/発表者名: Liu M., 佐伯和子, 奥野利明, 横溝岳彦
  • 学会等名: 第84回日本生化学会大会
  • 発表場所: 国立京都国際会館京都
• [学会発表] GPCRの免疫沈降に有用な新規抗FLAG抗体の樹立と本抗体を用いた新規GPCR結合タンパク質の探索 (2011)
  • 著者名/発表者名: 佐々木文之, 奥野利明, 佐伯和子, 横溝岳彦
  • 学会等名: 第84回日本生化学会大会
  • 発表場所: 国立京都国際会館京都
• [学会発表] 結晶化のためのロイコトリエンB4受容体(BLT1)の熱安定化と抗BLT1モノクローナル抗体の作製 (2011)
  • 著者名/発表者名: 堀哲哉, 菅原光明, 中材元直, 横溝岳彦, 清水孝雄, 宮野雅司
  • 学会等名: 第84回日本生化学会大会
  • 発表場所: 国立京都国際会館京都
• [学会発表] Helix 8 of the leukotriene B4 receptor type 1 inhibits ligand-induced internalization (2011)
  • 著者名/発表者名: 荒武良総, 奥野利明, 横溝岳彦
  • 学会等名: 第84回日本生化学会大会
  • 発表場所: 国立京都国際会館京都
• [学会発表] ゼブラフィッシュのロイコトリエンB4/12-HHT受容体の同定 (2011)
  • 著者名/発表者名: 奥野利明, 石谷太, 横溝岳彦
  • 学会等名: 第84回日本生化学会大会
  • 発表場所: 国立京都国際会館京都
• [学会発表] Two distinct pathways for biosynthesis of 12-HHT, a ligand for BLT2 (2011)
  • 著者名/発表者名: 松延武彦, 奥野利明, 横溝岳彦
  • 学会等名: 第84回日本生化学会大会
  • 発表場所: 国立京都国際会館京都
• [学会発表] 新規細胞膜エストロゲン受容体GPR30遺伝子の未知変異検出法の確立 (2010)
  • 著者名/発表者名: 相原正宗, 山本滋, 西岡弘子, 岡本まり子, 岡正朗, 水上洋一
  • 学会等名: 日本生化学会
  • 発表場所: 神戸市神戸市民会館
  • 年月日: 2010-12-07
• [学会発表] 新規細胞膜エストロゲン受容体GPR30遺伝子の未知変異検出法の確立 (2010)
  • 著者名/発表者名: 相原正宗
  • 学会等名: 日本生化学会
  • 発表場所: 神戸, 神戸市民会館
  • 年月日: 2010-12-07
• [学会発表] 乳がん組織における細胞膜女性ホルモン受容体GPR30の遺伝子変異の検出 (2010)
  • 著者名/発表者名: 相原正宗, 山本滋, 西岡弘子, 岡本まり子, 岡正朗, 水上洋一
  • 学会等名: 第111回山口大学医学会学術講演会
  • 発表場所: 宇部市山口大学霜仁会館
  • 年月日: 2010-07-18
• [学会発表] 乳がん組織における細胞膜女性ホルモン受容体GPR30の速未知変異遺伝子変異の検出法の確立と疾患への応用 (2010)
  • 著者名/発表者名: 相原正宗
  • 学会等名: 第114回山口大学医学会学術講演会
  • 発表場所: 山口, 山口大学医学部霜仁会館
  • 年月日: 2010-07-17
• [学会発表] 細胞膜女性ホルモン受容体GPR30の高速未知変異遺伝子検出法の確立と疾患への応用 (2010)
  • 著者名/発表者名: 相原正宗, 山本滋, 西岡弘子, 岡本まり子, 岡正朗, 水上洋一
  • 学会等名: 日本生化学会中四国地方会
  • 発表場所: 山口市山口大学大学会館
  • 年月日: 2010-05-15
• [学会発表] TNFαシグナル伝達経路における新規細胞膜受容体GPR30の関与について (2010)
  • 著者名/発表者名: 岡本まり子, 相原正宗, 水上洋一
  • 学会等名: 日本生化学会中四国地方会
  • 発表場所: 山口市山口大学大学会館
  • 年月日: 2010-05-15
• [学会発表] 細胞膜女性ホルモン受容体GPR30の高速未知変異遺伝子検出法の確立と疾患への応用 (2010)
  • 著者名/発表者名: 相原正宗
  • 学会等名: 日本生化学会中四国地方会
  • 発表場所: 山口,山口大学会館
  • 年月日: 2010-05-15
• [学会発表] TNFαシグナル伝達経路における新規細胞膜受容体GPR30の関与について (2010)
  • 著者名/発表者名: 岡本まり子
  • 学会等名: 日本生化学会中四国地方会
  • 発表場所: 山口,山口大学会館
  • 年月日: 2010-05-15
• [学会発表] Impact of a 3-linked galactose-containing oligosaccharides of a recombinant mouse/ human chimeric IgG mutant on its Fc effector functions (2010)
  • 著者名/発表者名: Yusuke Mimura, Ronan Kelly, Yoichi Mizukami, Margaret Goodall, Roy Jefferis, Pauline M Rudd
  • 学会等名: 14^<th> International Congress of Immunology
  • 発表場所: Kobe, Japan Portpia Hall
• [学会発表] Arrest of spermatogenesis at round spermatids in PLCZ1-deficient mice. (2010)
  • 著者名/発表者名: Masahiko Ito, Kentaro Nagaoka, Keiji Kuroda, Natsuko Kawano, Keiichi, Yoshida, Yuichirou Harada, Tomohide Shikano, Mami Miyado, Shoji Oda, Kiyotaka Toshimori, Youichi Mizukami, Tomoaki Murata, Akihiro Umezawa, Shunichi Miyazaki, Kenji Miyado.
  • 学会等名: 11th International Symposium on Spermatology
  • 発表場所: Okinawa, Japan conbention center
• [学会発表] Impact of α1,3-linked galactose-containing oligosaccharides of a recombinant mouse/human chimeric IgG mutant on its Fc effector functions (2010)
  • 著者名/発表者名: Yusuke Mimura
  • 学会等名: 14^<th> International Congress of Immunology
  • 発表場所: Kobe, Japan, Kobe Portpia Hall
• [学会発表] Arrest of spermatogenesis at round spermatids in PLCZ1-deficient mice. (2010)
  • 著者名/発表者名: Masahiko Ito
  • 学会等名: 11th International Symposium on Spermatology.
  • 発表場所: Okinawa, Japan, Okinawa convention center
• [図書] イラストレイテッドハーパー、生化学原書 (2011)
  • 著者名/発表者名: 横溝岳彦
  • 出版者: 丸善
• [図書] 生化学実践問題基礎と臨床をつなぐ420題 (2011)
  • 著者名/発表者名: 横溝岳彦
  • 総ページ数: 214
  • 出版者: 南江堂
• [備考]
  • URL: http://gene.yamaguchi-u.ac.jp/
• [産業財産権] 新規虚血マーカー及びこれを用いた虚血状態の検出方法 (2011)
  • 発明者名: 水上洋一
  • 権利者名: 山口大学
  • 公開番号: 2011-257419
  • 出願年月日: 2011-08-03
  • 取得年月日: 2011-12-22
• [産業財産権] エストロゲン疾患の判別方法 (2010)
  • 発明者名: 水上洋一
  • 権利者名: 山口大学
  • 公開番号: 2012-034633
  • 出願年月日: 2010-08-06