C型肝炎ウイルスNS2蛋白質が感染性粒子形成に関与するメカニズムの解明

• 研究課題/領域番号: 21590519
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: ウイルス学
• 研究機関: 国立感染症研究所
• 研究代表者: 鈴木 亮介 国立感染症研究所, ウイルス第二部, 主任研究官 (50342902)
• 研究分担者: 鈴木 哲朗 浜松医科大学, 医学部, 教授 (00250184)
• 研究期間 (年度): 2009 – 2011
• 研究課題ステータス: 完了 (2011年度)
• 配分額: 4,420千円 (直接経費: 3,400千円、間接経費: 1,020千円); 2011年度: 780千円 (直接経費: 600千円、間接経費: 180千円); 2010年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円); 2009年度: 2,210千円 (直接経費: 1,700千円、間接経費: 510千円)
• キーワード: HCV / NS2 / 粒子形成 / 感染性粒子 / 宿主因子 / 感染性

研究概要

分割ユビキチン法を利用した酵母Two-Hybridスクリーニング系を用い、C型肝炎ウイルス(HCV)のNS2蛋白質と相互作用を示す宿主因子を探索し、ヒト肝臓ライブラリーより37種類の候補遺伝子を同定した。これらの宿主蛋白質の発現レベルの低下がHCV増殖に及ぼす影響を調べ、ウイルス産生を顕著に抑制する新規宿主因子を見いだした。この宿主因子のノックダウンはウイルスの感染およびゲノム複製には影響しない事から、粒子形成に関与すると考えられた。さらにこの宿主因子のノックダウンはHCVのNS2とE2の相互作用を減弱させる事を見いだし、HCV NS2が感染性粒子形成に関与するメカニズムの一端を明らかした。

研究成果

• [雑誌論文] Visualization and Measurement of ATP Levels in Living Cells Replicating Hepatitis C Virus Genome RNA (2012)
  • 著者名/発表者名: 安東友美
  • 雑誌名: PLoS Pathogens 巻: 8 号: 3 ページ: e1002561-e1002561
  • DOI: 10.1371/journal.ppat.1002561
  • 査読あり
• [雑誌論文] Role of the endoplasmic reticulum-associated degradation(ERAD) pathway in degradation of hepatitis C virus envelope proteins and production of virus particles (2011)
  • 著者名/発表者名: SaeedM, Suzuki R, Watanabe N, Masaki T, Tomonaga M, Muhammad A, Kato T, Matsuura Y, Watanabe H, Wakita T, Suzuki T
  • 雑誌名: J Biol Chem 巻: 286 ページ: 37264-73
• [雑誌論文] Analyses of mutations selected by passaging a chimeric flavivirus identify mutations that alter infectivity and reveal an interaction between the structural proteins and the nonstructural glycoprotein NS1 (2011)
  • 著者名/発表者名: Winkelmann ER, Widman DG, Suzuki R, Mason PW
  • 雑誌名: Virology 巻: 421(2) ページ: 96-104
• [雑誌論文] Analyses of mutations selected by passaging a chimeric flavivirus identify mutations that alter infectivity and reveal an interaction be tween the structural proteins and the nonstructural glycoprotein NS1 (2011)
  • 著者名/発表者名: Winkelmann ER, Widman DG, Suzuk R, Mason PW
  • 雑誌名: Virology 巻: 421 ページ: 96-104
  • 査読あり
• [雑誌論文] Role of the ERAD pathway in degradation of hepatitis C virus envelope proteins and production of virus particles (2011)
  • 著者名/発表者名: Saeed M, Suzuki R, Watanabe N, Masaki T, Tomonaga M, Muhammad A, Kato T, Matsuura Y, Watanabe H, Wakita T, Suzuki T
  • 雑誌名: J.Biol.Chem. 巻: 286 ページ: 37264-37273
  • 査読あり
• [雑誌論文] Production of infectious hepatitis C virus by using RNA polymerase I-mediated transcription (2010)
  • 著者名/発表者名: Masaki T, Suzuki R, Saeed M, Mori K, Matsuda M, Aizaki H, Ishii K, Maki N, Miyamura T, Matsuura Y, Wakita T, Suzuki T
  • 雑誌名: J Virol 巻: 84 号: 11 ページ: 5824-35
  • DOI: 10.1128/jvi.02397-09
• [雑誌論文] Involvement of PA28g in the propagation of hepatitis C virus (2010)
  • 著者名/発表者名: Moriishi K., Shoji I., Mori Y., Suzuki R., Suzuki T., Kataoka C., and Matsuura Y.
  • 雑誌名: Hepatology 巻: 52 号: 2 ページ: 411-420
  • DOI: 10.1002/hep.23680
  • 査読あり
• [雑誌論文] Production of infectious hepatitis C virus by using RNA polymerase I-mediated transcription (2010)
  • 著者名/発表者名: Masaki T, Suzuki R, Saeed M, Mori K, Matsuda M, Aizaki H, Ishii K, Maki N, Miyamura T, Matsuura Y, Wakita T, Suzuki T
  • 雑誌名: J.Virol. 84 ページ: 5824-5835
  • 査読あり
• [雑誌論文] Evaluation of hepatitis C virus core antigen assays in detecting recombinant viral antigens of various genotypes (2009)
  • 著者名/発表者名: Saeed M, Suzuki R, Kondo M, Aizaki H, Kato T, Mizuochi T, Wakita T, Watanabe H, Suzuki T
  • 雑誌名: J Clin Microbiol 巻: 47 号: 12 ページ: 4141-3
  • DOI: 10.1128/jcm.01437-09
• [雑誌論文] Evaluation of hepatitis C virus core antigen assays for detecting recombinant viral antigens derived from various genotypes (2009)
  • 著者名/発表者名: Saeed M, Suzuki R, Kondo M, Aizaki H, Kato T, Mizuochi T, Wakita T, Suzuki T.
  • 雑誌名: J Clin.Micro. 47 ページ: 4141-4143
  • 査読あり
• [雑誌論文] Involvement of PA28g in the propagation of hepatitis C virus
  • 著者名/発表者名: Moriishi K, Shoji I, Mori Y, Suzuki R, Suzuki T, Kataoka C, Matsuura Y.
  • 雑誌名: Hepatology (In press)
  • 査読あり
• [学会発表] Identification of lipid droplet? associated membrane proteins that are involved in HCV production (2011)
  • 著者名/発表者名: Aizaki H, Matsumoto Y, Goto K, Watashi K, Suzuki R, Fukasawa M, Hanada K, Sato S, Takahashi N, Matsuura Y, Motojima K, Miyamura T, Suzuki T, WakitaT
  • 学会等名: 18th International Meeting on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • 発表場所: Seattle, WA, USA
• [学会発表] Identification and functional analysis of small molecules inhibiting the late step of hepatitis C virus life cycle (2011)
  • 著者名/発表者名: Watashi K, Uchida N, Suzuki R, Aizaki H, Wakita T
  • 学会等名: 18th International Meeting on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • 発表場所: Seattle, WA, USA
• [学会発表] Small molecules that elicit strong anti? HCV activity through down? modulation of HCV entry receptor (2011)
  • 著者名/発表者名: Takebe Y, Uenishi R, Tani H, Suzuki R, Takagi M, Hase S, Liao H, Tsuchiura T, Shinya K, Wakita T, Matsuura Y, Patel A
  • 学会等名: 18th International Meeting on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • 発表場所: Seattle, WA, USA
• [学会発表] Isolation of a highly infectious hepatitis C virus with adaptive mutations (2011)
  • 著者名/発表者名: Fukasawa M, Shirasago Y, Saito K, Murakami Y, Fukasawa H, Suzuki T, Suzuki R, Wakita T, Hanada K, Chiba J
  • 学会等名: 18th International Meeting on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • 発表場所: Seattle, WA, USA
• [学会発表] Identification of novel NS5A? associated proteins in the host? cell membrane fraction and their role in HCV life cycle (2011)
  • 著者名/発表者名: Goto K, Kimura T, Watashi K, Suzuki R, Yamagoe S, Miyamura T, Moriya K, Yotsuyanagi H, Koike K, Suzuki T, Wakita T, Aizaki H
  • 学会等名: 18th International Meeting on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • 発表場所: Seattle, WA, USA
• [学会発表] Halopemide inhibited a post? assembly step in hepatitis C virus life cycle (2011)
  • 著者名/発表者名: Uchida N, Watashi K, Suzuki R, Aizaki H, Chiba J, Wakita T
  • 学会等名: 18th International Meeting on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • 発表場所: Seattle, WA, USA
• [学会発表] Signal peptidase complex 1 participates in the assembly of hepatitis C virus through an interaction with NS2 (2011)
  • 著者名/発表者名: Suzuki R, Suzuki T, Saito K, Matsuda M, Watashi K, Matsuura Y, Wakita T, Aizaki H
  • 学会等名: 18th International Meeting on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • 発表場所: Seattle, WA, USA
• [学会発表] Identification of host factor that interacts with hepatitis C virus NS2protein and is involved in the viral assembly (2011)
  • 著者名/発表者名: Suzuki R, Suzuki T, Saito K, Matsuda M, Watashi K, Matsuura Y, Wakita K, Aizaki H
  • 学会等名: XV International Congress of Virology
  • 発表場所: Sapporo, Japan
• [学会発表] Identification of small molecules affecting late steps of hepatitis C virus life cycle (2011)
  • 著者名/発表者名: Watashi K, Uchida N, Suzuki R, Aizaki H, Wakita T
  • 学会等名: XV International Congress of Virology
  • 発表場所: Sapporo, Japan
• [学会発表] Antiviral activity of glycyrrhizin against hepatitis C virus in vitro (2011)
  • 著者名/発表者名: Matsumoto Y, Watashi K, Suzuki R, Matsuura Y, Suzuki T, Miyamura T, Wake K, Wakita T, Aizaki H
  • 学会等名: XV International Congress of Virology
  • 発表場所: Sapporo, Japan
• [学会発表] Identification of lipid droplet-associated membrane proteins that are involved in HCV production (2011)
  • 著者名/発表者名: Aizaki H, Matsumoto Y, Goto K, Watashi K, Suzuki R, Fukasawa M, Hanada K, Sato S, Takahashi N, Matsuura Y, Motojima K, Miyamura T, Suzuki T, Wakita T
  • 学会等名: 第18回C型肝炎ウイルス及び関連ウイルスに関する国際研究集会
  • 発表場所: アメリカ、シアトル
• [学会発表] Identification and functional analysis of small molecules in hibiting the late step of hepatitis C virus life cycle (2011)
  • 著者名/発表者名: Watashi K, Uchida N, Suzuki R, Aizaki H, Wakita T
  • 学会等名: 第18回C型肝炎ウイルス及び関連ウイルスに関する国際研究集会
  • 発表場所: アメリカ、シアトル
• [学会発表] Small molecules that elicit strong anti-HCV activity through down-modulation of HCV entry receptor (2011)
  • 著者名/発表者名: Takebe Y, Uenishi R, Tani H, Suzuki R, Takagi M, Hase S, Liao H, Tsuchiura T, Shinya K, Wakita T, Matsuura Y, Patel A
  • 学会等名: 第18回C型肝炎ウイルス及び関連ウイルスに関する国際研究集会
  • 発表場所: アメリカ、シアトル
• [学会発表] Isolation of a highly infectious hepatitis C virus with adaptive mutations (2011)
  • 著者名/発表者名: Fukasawa M, Shirasago Y, Saito K, Murakami Y, Fukazawa H, Suzuki T, Suzuki R, Wakita T, Hanada K, Chiba J
  • 学会等名: 第18回C型肝炎ウイルス及び関連ウイルスに関する国際研究集会
  • 発表場所: アメリカ、シアトル
• [学会発表] Identification of novel NS5A-associated proteins in the host-cell membrane fraction and their role in HCV life cycle (2011)
  • 著者名/発表者名: Goto K, Kimura T, Watashi K, Suzuki R, Yamagoe S, Miyamura T, Moriya K, Yotsuyanagi H, Koike K, Suzuki T, Wakita T, Aizaki H
  • 学会等名: 第18回C型肝炎ウイルス及び関連ウイルスに関する国際研究集会
  • 発表場所: アメリカ、シアトル
• [学会発表] Halopemide inhibited a post-assembly step in hepatitis C virus life cycle (2011)
  • 著者名/発表者名: Uchida N, Watashi K, Suzuki R, Aizaki H, Chiba J, Wakita T
  • 学会等名: 第18回C型肝炎ウイルス及び関連ウイルスに関する国際研究集会
  • 発表場所: アメリカ、シアトル
• [学会発表] Signal peptidase complex 1 participates in the assembly of hepatitis C virus through an interaction with NS2 (2011)
  • 著者名/発表者名: Suzuki R, Suzuki T, Saito K, Matsuda M, Watashi K, Matsuura Y, Wakita T, Aizaki H
  • 学会等名: 第18回C型肝炎ウイルス及び関連ウイルスに関する国際研究集会
  • 発表場所: アメリカ、シアトル
• [学会発表] Identification of host factor that interacts with hepatitis C virus NS2 protein and is involved in the viral assembly (2011)
  • 著者名/発表者名: Suzuki R, Suzuki T, Saito K, Matsuda M, Watashi K, Matsuura Y, Wakita T, Aizaki H
  • 学会等名: 第15回国際ウイルス学会
  • 発表場所: 札幌
• [学会発表] Identification of small molecules affecting late steps of he patitis C virus life cycle (2011)
  • 著者名/発表者名: Watashi K, Uchida N, Suzuki R, Aizaki H, Wakita T
  • 学会等名: 第15回国際ウイルス学会
  • 発表場所: 札幌
• [学会発表] Antiviral activity of glycyrrhizin against hepatitis C virus in vitro (2011)
  • 著者名/発表者名: Matsumoto Y, Watashi K, Suzuki R, Matsuura Y, Suzuki T, Miyamura T, Wake K, Wakita T, Aizaki H
  • 学会等名: 第15回国際ウイルス学会
  • 発表場所: 札幌
• [学会発表] Entry mechanisms of hepatitis C virus examined by trans-complemented particles (2010)
  • 著者名/発表者名: Suzuki R, Alazawa D, Ishii K, Matsuura Y, Wakita T, Suzuki T
  • 学会等名: 9th International Symposium on Positive-Strand RNA Viruses
  • 発表場所: Atlanta, GA, USA
• [学会発表] Efficient production of trans-complemented hepatitis C virus particles : Use for study of viral entry process (2010)
  • 著者名/発表者名: Suzuki R, Alazawa D, Ishii K, Matsuura Y, Wakita T, Suzuki T
  • 学会等名: 17th International Meeting on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • 発表場所: Yokohama, Japan
• [学会発表] C型肝炎ウイルスのtrans-packaging型粒子を用いた感染機構の解析 (2010)
  • 著者名/発表者名: 鈴木亮介、斎藤憲司、赤澤大輔、石井孝司、松浦善治、脇田隆字、鈴木哲朗
  • 学会等名: 日本ウイルス学会第58回学術集会
  • 発表場所: 徳島
• [学会発表] 分割ユビキチン法を利用したHCV NS2と結合する宿主因子の探索およびウイルス粒子形成への関与 (2010)
  • 著者名/発表者名: 鈴木亮介、相崎英樹、脇田隆字、鈴木哲朗
  • 学会等名: 第33回日本分子生物学会年会
  • 発表場所: 神戸市
• [学会発表] Entry mechanisms of hepatitis C virus examined by trans-complemented particles (2010)
  • 著者名/発表者名: Ryosuke Suzuki, Daisuke Akazawa, Koji Ishii, Yoshiharu Matsuura, Takaji Wakita, Tetsuro Suzuki
  • 学会等名: 第9回プラス鎖RNAウイルスに関する国際研究集会
  • 発表場所: アメリカ、アトランタ
• [学会発表] Efficient production of traps-complemented hepatitis C virus particles : Use for study of viral entry process (2010)
  • 著者名/発表者名: Ryosuke Suzuki, Daisuke Akazawa, Koji Ishii, Yoshiharu Matsuura, Takaji Wakita, Tetsuro Suzuki
  • 学会等名: 第17回C型肝炎ウイルス及び関連ウイルスに関する国際研究集会
  • 発表場所: 横浜市
• [学会発表] C型肝炎ウイルスのtrans-packaging型粒子を用いた感染機構の解析 (2010)
  • 著者名/発表者名: 鈴木亮介、斎藤憲司、赤澤大輔、石井孝司、松浦善治、脇田隆字、鈴木哲朗
  • 学会等名: 第58回日本ウイルス学会学術集会
  • 発表場所: 徳島市
• [学会発表] Involvement of PA28gamma and E6AP in the degradation of HCV core protein and the viral production (2009)
  • 著者名/発表者名: Moriishi K, Shoji I, Suzuki R, Suzuki T, Matsuura Y
  • 学会等名: 16th International Meeting on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • 発表場所: Nice, France
• [学会発表] Plasmid-based production of trans-complemented HCV particles : its use for functional analysis of NS2 (2009)
  • 著者名/発表者名: Suzuki R, Saito K, Ando T, Ishii K, Matsuura Y, Miyamura T, Wakita T, Suzuki T
  • 学会等名: 16th International Meeting on Hepatitis C Virus and Related Viruses
  • 発表場所: Nice, France
• [学会発表] HCVコア蛋白質のプロテアソームによる分解とウイルス産生制御 (2009)
  • 著者名/発表者名: 森石恒司、勝二郁夫、鈴木亮介、鈴木哲朗、松浦善治
  • 学会等名: 日本ウイルス学会第57回学術集会
  • 発表場所: 東京
• [学会発表] C型肝炎ウイルスのtrans-packaging系を用いたNS2蛋白質の感染性粒子形成における機能解析 (2009)
  • 著者名/発表者名: 鈴木亮介、斎藤憲司、安東友美、石井孝司、松浦善治、宮村達男、脇田隆字、鈴木哲朗
  • 学会等名: 日本ウイルス学会第57回学術集会
  • 発表場所: 東京
• [学会発表] Prohibitin2はC型肝炎ウイルス(HCV) NS5A蛋白と相互作用しHCV複製調節に働く (2009)
  • 著者名/発表者名: 木村敬郎、鈴木亮介、山越智、鈴木健裕、堂前直、勝二郁夫、松浦善治、千葉丈、脇田隆字、鈴木哲朗
  • 学会等名: 日本ウイルス学会第57回学術集会
• [学会発表] Plasmid-based production of trans-complemented HCV particles : its use for functional analysis of NS2 (2009)
  • 著者名/発表者名: 鈴木亮介, 斎藤憲司, 安東友美, 石井孝司, 松浦善治, 宮村達男, 脇田隆字, 鈴木哲朗
  • 学会等名: 第16回C型肝炎ウイルス及び関連ウイルスに関する国際研究集会
  • 発表場所: フランス、ニース
• [学会発表] C型肝炎ウイルスNS2蛋白質が感染性粒子形成に関与するメカニズムの解明 (2009)
  • 著者名/発表者名: 鈴木亮介、斎藤憲司、安東友美、石井孝司、松浦善治、宮村達男、脇田隆字、鈴木哲朗
  • 学会等名: 第57回日本ウイルス学会学術集会
  • 発表場所: 東京
• [産業財産権] C型肝炎ウイルス粒子高生産系
  • 発明者名: 脇田隆字、石井孝司、鈴木哲朗、鈴木亮介、宮村達男、田邉純一、曽根三郎
  • 外国
• [産業財産権] 新規組換え型ヒトC型肝炎ウイルス様粒子とその産生方法
  • 発明者名: 脇田隆字、石井孝司、鈴木哲朗、鈴木亮介、宮村達男、田邉純一、曽根三郎
  • 外国