プラークアッセイ法を応用した細胞障害性HCV株のクローン化と機能解析

• 研究課題/領域番号: 21590832
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 消化器内科学
• 研究機関: 東京医科歯科大学
• 研究代表者: 大岡 真也 東京医科歯科大学, 医学部・附属病院, 講師 (90361691)
• 研究分担者: 坂本 直哉 東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 寄付講座教員 (10334418) ; 東 正新 東京医科歯科大学, 医学部附属病院, 助教 (10376783) ; 渡辺 守 東京医科歯科大学, 大学院・医歯学総合研究科, 教授 (10175127)
• 研究期間 (年度): 2009 – 2011
• 研究課題ステータス: 完了 (2011年度)
• 配分額: 4,550千円 (直接経費: 3,500千円、間接経費: 1,050千円); 2011年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円); 2010年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円); 2009年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円)
• キーワード: HCVレプリコン / HCV-JFH1培養系 / プラークアッセイ / 細胞障害効果 / ヒト肝臓キメラマウス / 小胞体ストレス / RNAポリメラーゼ

研究概要

本研究では、プラークアッセイ法により得た増殖力・細胞障害性の強いウイルスクローンの解析を遂行し以下の結果を得た。(1)感染レセプター欠損Huh7細胞を用いた解析より、変異クローンは細胞内増殖が亢進しておりウイルス粒子形成・分泌能は野生型と同等であった。(3)変異HCVクローンをヒト肝臓移植キメラマウスに接種したところ変異ウイルスは感染早期は高度に増殖するが安定期においては野生型と同等のレベルになり変異が消失した野生ウイルスが増加した

研究成果

• [雑誌論文] Inhibition of hepatitis C virus NS5B polymerase by S-trityl-L-cysteine derivatives (2012)
  • 著者名/発表者名: Kaushik-Basu N, Sakamoto N
  • 雑誌名: Eur J Med Chem 巻: 49 ページ: 191-199
  • DOI: 10.1016/j.ejmech.2012.01.010
  • 査読あり
• [雑誌論文] Age and total ribavirin dose are independent predictors of relapse after interferon therapy in chronic hepatitis C revealed by data mining analysis (2012)
  • 著者名/発表者名: Kurosaki M, Sakamoto N, et al
  • 雑誌名: Antivir Ther 巻: 17(1) ページ: 35-43
  • 査読あり
• [雑誌論文] Identification of novel N-(morpholine-4-carbonyloxy) amidine compounds as potent inhibitors against hepatitis C virus replication (2012)
  • 著者名/発表者名: Kusano-Kitazume A, Sakamoto N, Okuno Y, Sekine-Osajima Y, Nakagawa M, Kakinuma S, Kiyonashi K, Nitta S, Murakawa M, Azuma S, Nishimura-Sakurai Y, Hagiwara M, Watanabe M
  • 雑誌名: Antimicrob Agent Chemother 巻: 56(3) 号: 3 ページ: 1315-23
  • DOI: 10.1128/aac.05764-11
  • 査読あり / オープンアクセス
• [雑誌論文] Data mining model using simple and readily available factors could identify patients at high risk for hepatocellular carcinoma in chronic hepatitis C (2012)
  • 著者名/発表者名: Kurosaki M, Sakamoto N, Nakagawa M, et al.
  • 雑誌名: J Hepatol 巻: 56(3) 号: 3 ページ: 602-608
  • DOI: 10.1016/j.jhep.2011.09.011
  • 査読あり
• [雑誌論文] The inhibitory effect on hepatitis C virus infection of a triterpenoid compound, with or without interferon-alpha (2011)
  • 著者名/発表者名: Watanabe T, Sakamoto N, Nakagawa M, Kakinuma S, Itsui Y, Nishimura-Sakurai Y, Ueyama M, Funaoka Y, Kitazume A, Nitta S, Kiyohashi K, Murakawa M, Azuma S, Tsuchiya K, Oooka S, Watanabe M
  • 雑誌名: Antimicrob Agents Chemother 巻: 55(6) ページ: 2537-2545
• [雑誌論文] Association of gene expression involving innate immunity and genetic variation in IL28B with antiviral response (2011)
  • 著者名/発表者名: Asahina Y, Sakamoto N, et al
  • 雑誌名: Hepatology 巻: 55(1) 号: 1 ページ: 20-29
  • DOI: 10.1002/hep.24623
  • 査読あり
• [雑誌論文] Analysis of the complete open reading frame of hepatitis C virus in genotype 2a infection reveals critical sites influencing the response to peginterferon and ribavirin therapy (2011)
  • 著者名/発表者名: Kadokura M, Nakagawa M, Sakamoto N, Watanabe M, et al.
  • 雑誌名: Hepatol Int 巻: 5(3) 号: 3 ページ: 789-799
  • DOI: 10.1007/s12072-011-9267-x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Use of human hepatocyte-like cells derived from induced pluripotent stem cells as a model for hepatocytes in hepatitis C virus infection (2011)
  • 著者名/発表者名: Yoshida T, Sakamoto N, et al
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun 巻: 416(1-2) 号: 1-2 ページ: 119-124
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2011.11.007
  • 査読あり
• [雑誌論文] A new method for induced fit docking (GENIUS) and its application to virtual screening of novel HCV NS3-4A protease inhibitors (2011)
  • 著者名/発表者名: Takaya D, Sakamoto N, et al.
  • 雑誌名: Bioorganic & Medicinal Chemistry 巻: 19(22) 号: 22 ページ: 6892-6905
  • DOI: 10.1016/j.bmc.2011.09.023
  • 査読あり
• [雑誌論文] Serum interleukin-6 levels correlate with resistance to treatment of chronic hepatitis C infection with pegylated-interferon-alpha2b plus ribavirin (2011)
  • 著者名/発表者名: Ueyama M, Sakamoto N, et al
  • 雑誌名: Antivir Ther 巻: 16 ページ: 1081-1091
  • 査読あり
• [雑誌論文] Genome-wide association study identified ITPA/DDRGK1 variants reflecting thrombocytopenia in pegylated interferon and ribavirin therapy for chronic hepatitis C (2011)
  • 著者名/発表者名: Tanaka Y, Sakamoto N, et al.
  • 雑誌名: Human Molecular Genetics 巻: 20(17) 号: 17 ページ: 3507-3516
  • DOI: 10.1093/hmg/ddr249
  • 査読あり
• [雑誌論文] Pretreatment Prediction of Anemia Progression by Peginterferon Plus Ribavirin Therapy in Chronic Hepatitis C : Decision-Tree Analysis (2011)
  • 著者名/発表者名: Hiramatsu N, Sakamoto N, et al.
  • 雑誌名: J Gastroenterol 巻: 46(9) 号: 9 ページ: 1111-1119
  • DOI: 10.1007/s00535-011-0412-z
  • 査読あり
• [雑誌論文] Analysis of the complete open reading frame of genotype 2b hepatitis C virus in association with the response to peginterferon and ribavirin therapy (2011)
  • 著者名/発表者名: Kadokura M, Nakagawa M, Sakamoto N, Watanabe M, et al.
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 6(9) 号: 9 ページ: e24514-e24514
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0024514
  • 査読あり
• [雑誌論文] Pretreatment prediction of response to peginterferon plus ribavirin therapy in genotype 1 chronic hepatitis C using data mining analysis (2011)
  • 著者名/発表者名: Kurosaki M, Sakamoto N, et al.
  • 雑誌名: J Gastroenterol 巻: 46(3) 号: 3 ページ: 401-409
  • DOI: 10.1007/s00535-010-0322-5
  • NAID: 10029028096
  • 査読あり
• [雑誌論文] Adenovirus vector-mediated assay system for hepatitis C virus replication (2011)
  • 著者名/発表者名: Yoshida T, Sakamoto N, et al
  • 雑誌名: Nucleic Acids Res 巻: 39(10) 号: 10 ページ: e64-e64
  • DOI: 10.1093/nar/gkr047
  • 査読あり
• [雑誌論文] Analysis of interferon signaling by infectious hepatitis C virus clones with substitutions of core amino acids 70 and 91 (2011)
  • 著者名/発表者名: Funaoka Y, Sakamoto N, Suda G, Itsui Y, Nakagawa M, Kakinuma S, Watanabe T, Nitta S, Kitazume A, Kiyohashi K, Murakawa M, Azuma S, Tsuchiya K,Watanabe M
  • 雑誌名: J Virol 巻: 85 号: 12 ページ: 5986-94
  • DOI: 10.1128/jvi.02583-10
  • 査読あり
• [雑誌論文] Inhibitory effect of a triterpenoid compound, with or without alpha interferon, on hepatitis C virus infection (2011)
  • 著者名/発表者名: Watanabe T, Sakamoto N, Nakagawa M, Azuma S, Watanabe M, et al.
  • 雑誌名: Antimicrob Agents Chemother 巻: 55(6) 号: 6 ページ: 2537-2545
  • DOI: 10.1128/aac.01780-10
  • 査読あり
• [雑誌論文] Studies on virus kinetics using infectious fluorescence-tagged hepatitis C virus cell culture (2011)
  • 著者名/発表者名: Yamamoto M, Sakamoto N, Nakamura T, Itsui Y, Nakagawa M, Nishimura-Sakurai Y, Kakinuma S, Azuma S, Kato T, Wakita T, Watanabe M
  • 雑誌名: Hepatol Res 巻: 41 号: 3 ページ: 258-269
  • DOI: 10.1111/j.1872-034x.2010.00771.x
  • 査読あり
• [雑誌論文] Association between lipid accumulation and the cannabinoid system in Huh7 cells expressing HCV genes (2011)
  • 著者名/発表者名: Toyoda M, Sakamoto N, et al
  • 雑誌名: Int J Mol Med 巻: 27 号: 5 ページ: 619-624
  • DOI: 10.3892/ijmm.2011.622
  • 査読あり
• [雑誌論文] Association of IL28B variants with response to pegylated-interferon alpha plus ribavirin combination therapy reveals intersubgenotypic differences between genotypes 2a and 2b (2011)
  • 著者名/発表者名: Sakamoto N, Nakagawa M, Azuma S, Watanabe M, et al.
  • 雑誌名: J Med Virol 巻: 83 号: 5 ページ: 871-878
  • DOI: 10.1002/jmv.22038
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cholestatic liver fibrosis and toxin-induced fibrosis are exacerbated in matrix metalloproteinase-2 deficient mice (2011)
  • 著者名/発表者名: Onozuka I, Sakamoto N, Nakagawa M, Watanabe M, et al.
  • 雑誌名: Biochem Biophys Res Commun 巻: 406 号: 1 ページ: 134-140
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2011.02.012
  • 査読あり
• [雑誌論文] Pre-treatment prediction of response to pegylated-interferon plus ribavirin for chronic hepatitis C using genetic polymorphism in IL28B and viral factors (2011)
  • 著者名/発表者名: Kurosaki M, Sakamoto N, Nakagawa M, Watanabe M, et al.
  • 雑誌名: J Hepatol 巻: 54 号: 3 ページ: 439-448
  • DOI: 10.1016/j.jhep.2010.07.037
  • 査読あり
• [雑誌論文] Sequences in the interferon sensitivity-determining region and core region of hepatitis C virus impact pretreatment prediction of response to PEG-interferon plus ribavirin : data mining analysis (2011)
  • 著者名/発表者名: Kurosaki M, Sakamoto N, Nakagawa M, et al.
  • 雑誌名: J Med Virol 巻: 83 号: 3 ページ: 445-452
  • DOI: 10.1002/jmv.22005
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cell culture and in vivo analyses of cytopathic hepatitis C virus mutants (2010)
  • 著者名/発表者名: Mishima K, Sakamoto N, Sekine-Osajima Y, Nakagawa M, Itsui Y, Azuma S, Kakinuma S, Kiyohashi K, Kitazume A, Tsuchiya K, Imamura M, Hiraga N, Chayama K, Wakita T, Watanabe M
  • 雑誌名: Virology 巻: 405 ページ: 361-369
• [雑誌論文] SR蛋白リン酸化酵素阻害剤によるHCV増殖抑制効果の解析 (2010)
  • 著者名/発表者名: 唐鎌優子、坂本直哉、井津井康浩、中川美奈、藤田めぐみ、櫻井幸、柿沼晴、大岡真也、東正新、土屋輝一郎、小野木博、萩原正敏、渡辺守
  • 雑誌名: 消化器内科 巻: 51(6) ページ: 632-635
• [雑誌論文] Inhibition of HCV replication by a specific inhibitor of serin-arginine-rich protein kinase. (2010)
  • 著者名/発表者名: Yuko Karakama, Naoya Sakamoto, Shinva Oooka, et al.
  • 雑誌名: Antimicrobial Agent and Chemotherapy 巻: 54 ページ: 3179-31869
  • 査読あり
• [雑誌論文] Mutations in the Interferon Sensitivity Determining Region and virological response to combination therapy with Pegylated-interferon alpha 2b plus ribavirin in patients with chronic hepatitis C-1b infection. (2010)
  • 著者名/発表者名: Nakagawa M, Sakamoto N(equal contribution), et al.
  • 雑誌名: J Gastroenterol (in press)
  • NAID: 10027216778
  • 査読あり
• [雑誌論文] Two flavonoids extracts from Glycyrrhizae radix inhibit in vitro hepatitis C virus replication (2009)
  • 著者名/発表者名: Sekine-Osajima Y, Sakamoto N, Nakagawa M, Itsui Y, Tasaka M, Nishimura-Sakurai Y, Chen CH, Suda G, Mishima K, Onuki Y, Yamamoto M, Maekawa S, Enomoto N, Kanai T, Tsuchiya K, Watanabe M
  • 雑誌名: Hepatol Res 巻: 39 ページ: 60-69
  • NAID: 10025324061
• [雑誌論文] Comparison of HCV-associated gene expression and cell signaling pathways in cells with or without HCV replicon and in replicon-cured cells. (2009)
  • 著者名/発表者名: Nishimura-Sakurai Y, Sakamoto N, et al
  • 雑誌名: J Gastroentorol
  • NAID: 10027216127
  • 査読あり
• [雑誌論文] Antiviral effects of the interferon-induced protein GBP-1 and its interaction with the hepatitis C virus NS5B protein. (2009)
  • 著者名/発表者名: Itsui Y, Sakamoto N(equal contribution)
  • 雑誌名: Hepatology 50 ページ: 1727-1737
  • 査読あり
• [学会発表] ITPA gene variant protects against treatment-induced anemia and improves viral clearance by pegylated interferon-alfa and ribavirin therapy in chronic hepatitis C patients (2011)
  • 著者名/発表者名: Sakamoto N, Azuma S, Watanabe M, et al
  • 学会等名: 62th. Annual Meeting of American Association for the Study of Liver Diseases
  • 発表場所: San Francisco
  • 年月日: 2011-11-04
• [学会発表] MMP-2 and MMP-14 derived from donor cells enhance therapeutic efficacy of liver cell transplantation in mice (2011)
  • 著者名/発表者名: Kakinuma S, Sakamoto N, Watanabe M, et al
  • 学会等名: 62th. Annual Meeting of American Association for the Study of Liver Diseases
  • 発表場所: San Francisco
  • 年月日: 2011-11-04
• [学会発表] A high-content screening assay using infectious fluorescence-tagged hepatitis C virus reveals candidates for small molecule inhibitors of viral entry (2011)
  • 著者名/発表者名: Kusano-Kitazume A, Sakamoto N, Watanabe M, et al
  • 学会等名: 62th. Annual Meeting of American Association for the Study of Liver Diseases
  • 発表場所: San Francisco
  • 年月日: 2011-11-04
• [学会発表] Loww of Wnt5A promotes biliary differentiation of murine hepatic stem/progenitor cells (2011)
  • 著者名/発表者名: Kiyohashi K, Sakamoto N, Watanabe M, et al
  • 学会等名: 62th. Annual Meeting of American Association for the Study of Liver Diseases
  • 発表場所: San Francisco
  • 年月日: 2011-11-04
• [学会発表] Antiviral effect of a novel interferon-inducible protein, IFI-27, against hepatitis C virus replication (2011)
  • 著者名/発表者名: Itsuil Y, Sakamoto N, Watanabe M, et al
  • 学会等名: 62th. Annual Meeting of American Association for the Study of Liver Diseases
  • 発表場所: San Francisco
  • 年月日: 2011-11-04
• [学会発表] IL-6-mediated intersubgenotypic variation of interferon sensitivity in hepatitis C virus genotype 2a/2b chimeric clones (2011)
  • 著者名/発表者名: Suda G, Sakamoto N, Azuma S, Watanabe M, et al
  • 学会等名: 62th. Annual Meeting of American Association for the study of Liver Diseases
  • 発表場所: San Francisco
  • 年月日: 2011-11-04
• [学会発表] Prediction model of ribavirin-induced anemia incorporating ITPA genotype could identify chronic hepatitis C patients at high risk of relapse among virological responders to pegylated-interferon and ribavirin (2011)
  • 著者名/発表者名: Kurosaki M, Sakamoto N, et al
  • 学会等名: 62th. Annual Meeting of American Association for the Study of Liver Diseases
  • 発表場所: San Francisco
  • 年月日: 2011-11-04
• [学会発表] IL28B and ITPA gene variants correlate with treatment efficacy in pegylated-interferon plus ribavirin therapy for chronic hepatitis C (2011)
  • 著者名/発表者名: Matsuura K, Sakamoto N, et al
  • 学会等名: 62th. Annual Meeting of American Association for the Study of Liver Diseases
  • 発表場所: San Francisco
  • 年月日: 2011-11-04
• [学会発表] Mutations in the interferon sensitivity determining region of HCV, age and total ribavirin dose is an independent predictor of relapse among early virological responders to peg-interferon plus ribavirin therapy (2011)
  • 著者名/発表者名: Kurosaki M, Sakamoto N, et al
  • 学会等名: 62th. Annual Meeting of American Association for the study of Liver Diseases
  • 発表場所: San Francisco
  • 年月日: 2011-11-04
• [学会発表] Development of an RNA polymerase I-driven adenoviral vector and its application in an HCV replication assay (2011)
  • 著者名/発表者名: Yoshida T, Sakamoto N, et al
  • 学会等名: 18th. International Meeting on Hepatitis C Virus & Related Viruses
  • 発表場所: Seattle
  • 年月日: 2011-09-08
• [学会発表] Analysis of interferon signaling by infectious hepatitis C virus clones with substitutions of core amino acids 70 and 91 (2011)
  • 著者名/発表者名: Sakamoto N, Watanabe M, et al
  • 学会等名: 18th. International Meeting on Hepatitis C Virus & Related Viruses
  • 発表場所: Seattle
  • 年月日: 2011-09-08
• [学会発表] HCV-NS4B targets STING and abrogates RIG-I-mediated type-I interferon- dependent innate immune response (2011)
  • 著者名/発表者名: Nitta S, Sakamoto N, Watanabe M, et al
  • 学会等名: 18th. International Meeting on Hepatitis C Virus & Related Viruses
  • 発表場所: Seattle
  • 年月日: 2011-09-08
• [学会発表] Development of RNA pol-driven adenovirus vector expressing hepatitis C virus replicon (2011)
  • 著者名/発表者名: Yamagishi Y, Sakamoto N, et al
  • 学会等名: Experimental Biology 2011
  • 発表場所: Washington
  • 年月日: 2011-04-13
• [学会発表] 細胞障害性HCV-JFH1における遺伝子変異の機能解析とin vivo感染動態の検討 (2010)
  • 著者名/発表者名: 三島果子、坂本直哉、筬島裕子、中川美奈、柿沼晴、陳正新、脇田隆字、今村道雄、茶山一彰、渡辺守
  • 学会等名: (一般口演)第46回日本肝臓学会総会
  • 発表場所: 山形
  • 年月日: 2010-05-27
• [学会発表] Establishment and genetic analyses of cytopathogenic HCV-JFH1 mutants by plaque-forming assay (2009)
  • 著者名/発表者名: Kako Mishima, Naoya Sakamoto, Yuko Sekine-Osajima, Mina Nakagawa, Megumi Tasaka, Yuki Nishimura-Sakurai, Yasuhiro Itsui, Takaji Wakita, and Mamoru Watanabe
  • 学会等名: 16th. International Meeting on Hepatitis C Virus & Related Viruses
  • 発表場所: Nice, France
  • 年月日: 2009-10-03
• [学会発表] 細胞傷害性HCV-JFH1subcloneの単離と機能解析.(ワークショップ3) (2009)
  • 著者名/発表者名: 三島果子坂本直哉中川美奈井津井康浩筬島裕子田坂めぐみ櫻井幸須田剛生山本満千植山真由美渡辺貴子船岡祐介渡辺守
  • 学会等名: 第45回日本肝臓学会総会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2009-06-04
• [学会発表] 細胞障害性HCV-JFH1subcloneの単離と機能解析
  • 著者名/発表者名: 三島果子、坂本直哉、筬島裕子、中川美奈、藤田めぐみ、櫻井幸、須田剛生、唐鎌優子、山本満千、渡辺貴子、植山真由美、船岡祐介、幾世橋佳、新田沙由梨、北詰晶子、井津井康浩、柿沼晴、陳正新、脇田隆字、渡辺守
  • 学会等名: 京都(ポスター)
• [産業財産権] C型肝炎ウイルスの増殖を抑制する医薬組成物 (2011)
  • 発明者名: 坂本直哉、渡辺守、北詰晶子、萩原正敏、奥野友紀子
  • 権利者名: 東京医科歯科大学
  • 産業財産権番号: 2011-194082
  • 出願年月日: 2011-09-06