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RNA検出用デグラトンプローブの開発とRNA制御機構の解析

研究課題

研究課題/領域番号 21657043
研究種目

挑戦的萌芽研究

配分区分補助金
研究分野 分子生物学
研究機関筑波大学

研究代表者

入江 賢児  筑波大学, 大学院・人間総合科学研究科, 教授 (90232628)

研究期間 (年度) 2009 – 2010
研究課題ステータス 完了 (2010年度)
配分額 *注記
3,000千円 (直接経費: 3,000千円)
2010年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
2009年度: 1,900千円 (直接経費: 1,900千円)
キーワードRNA結合タンパク質 / 出芽酵母 / Khd1 / mRNA / デグラトンプローブ / Pボディ / Stress Granule / hnRNP K / イメージング
研究概要

本研究では、『出芽酵母におけるRNA局在と局所的翻訳に働くRNP複合体Locasome』および『動物細胞のストレスに応答したRNAの局在、安定性、翻訳の制御に働くRNP複合体Stress Granule』の系におけるRNA局在・RNA安定性・翻訳の時間的・空間的な制御系を解析し、その基本原理を明らかにする。そのために必要な、(1)生きた細胞内でRNAを高感度に可視化・定量化する『RNA検出用デグラトンプローブ』、(2)2種類のRNAを同時に可視化する『2カラーRNAイメージング』、(3)RNA局在をタンパク質合成と同時に可視化する『RNA-タンパク質デュアルイメージング』、(4)時空間的なタンパク質合成を可視化・定量化する『翻訳モニター系』を開発し、RNAレベルの制御について生きた細胞での高度なイメージング解析、定量化解析を実現させる。明らかにした基本原理をもとに、遺伝子発現をRNAレベルで制御する技術の確立を目指す。
本年度の研究では、出芽酵母RNA結合タンパク質KhdlpによるMTL1 mRNA安定性制御に関わるシス領域の限定とMTL1 mRNA安定性制御に関わるトランス因子の同定を行った。その結果、MTL1(532-1032)領域は、khd1変異株においてmRNAを不安定化させるのに必要かつ十分な配列であること、khd1変異株におけるMTL1 mRNAの不安定化には、5'→3'方向のmRNA分解酵素Xrnlpとキャップ構造除去酵素コファクターDcplpが関与することを明らかにした(Mauchi et aL.,2010)。また、Khd1をin vivoでイメージングを行い、Khd1がRNA分解に関わるプロセッシングボディ(Pボディ)に局在することを明らかにした。

報告書

(2件)
  • 2010 実績報告書
  • 2009 実績報告書
  • 研究成果

    (10件)

すべて 2010 2009 その他

すべて 雑誌論文 (3件) (うち査読あり 2件) 学会発表 (6件) 備考 (1件)

  • [雑誌論文] Stability control of MTL1 mRNA by the RNA-binding protein Khdlp in yeast2010

    • 著者名/発表者名
      Mauchi, et. al.
    • 雑誌名

      Cell Structure and Function

      巻: 35 ページ: 95-105

    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] hnRNP K interacts with RNA binding motif protein 42 and functions in the maintenance of cellular ATP level during stress conditions.2009

    • 著者名/発表者名
      Fukuda, et al.
    • 雑誌名

      Genes to Cells 14

      ページ: 113-128

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] RNA局在の制御2009

    • 著者名/発表者名
      入江賢児
    • 雑誌名

      蛋白質核酸酵素増刊mRNAプログラム多様性と非対称性の獲得戦略 54

      ページ: 2133-2139

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [学会発表] RNA結合タンパク質Khdlpは細胞壁合成系においてCcr4p, Pop2p/Caflpとオーバーラップした機能をもつ2010

    • 著者名/発表者名
      伊藤渉
    • 学会等名
      BMB2010(第33回日本分子生物学会年会第83回日本生化学会大会合同大会)
    • 発表場所
      神戸ポートアイランド(兵庫県)
    • 年月日
      2010-12-09
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [学会発表] RNA結合タンパク質KhdlpによるmRNA安定性制御機構2010

    • 著者名/発表者名
      入江賢児
    • 学会等名
      第12回日本RNA学会年会
    • 発表場所
      一橋記念講堂(東京都)
    • 年月日
      2010-07-28
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [学会発表] RNA-binding protein Khdlp and Ccr4-Not complex play an overlapping role in a cell wall integrity pathway in yeast2010

    • 著者名/発表者名
      入江賢児
    • 学会等名
      EMBO Conference on Gene Transcription in Yeast 2010
    • 発表場所
      サンフェリウデギホルス(スペイン)
    • 年月日
      2010-06-20
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [学会発表] RNA-binding protein Khdlp and Ccr4-Not complex play an overlapping role in a cell wall integrity pathway in yeast2010

    • 著者名/発表者名
      入江賢児
    • 学会等名
      The 19^<th> CDB Meeting RNA Sciences in Cell and Deve lopmental Biology
    • 発表場所
      理研CDB(兵庫県)
    • 年月日
      2010-05-11
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [学会発表] Control of mRNA stability by RNA binding protein Khdlp, the yeast ortholog of mammalian hnRNP K2009

    • 著者名/発表者名
      入江賢児
    • 学会等名
      FASEB summer research conferences RNA localization and Local translation
    • 発表場所
      アメリカ・バーモント州
    • 年月日
      2009-07-14
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [学会発表] Control of mRNA stability by RNA binding protein Khdlp, the yeast ortholog of mammalian hnRNP K2009

    • 著者名/発表者名
      入江賢児
    • 学会等名
      第61回日本細胞生物学会大会
    • 発表場所
      名古屋国際会議場
    • 年月日
      2009-06-02
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [備考]

    • URL

      http://www.md.tsukuba.ac.jp/public/basic-med/molcellbiol/index.html

    • 関連する報告書
      2010 実績報告書

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公開日: 2009-04-01   更新日: 2016-04-21  

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