プロテインスプライシング反応を用いたコルチコステロイド受容体の可視化

• 研究課題/領域番号: 21659046
• 研究種目: 挑戦的萌芽研究
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 解剖学一般(含組織学・発生学)
• 研究機関: 奈良県立医科大学
• 研究代表者: 西 真弓 奈良県立医科大学, 医学部, 教授 (40295639)
• 研究期間 (年度): 2009 – 2010
• 研究課題ステータス: 完了 (2010年度)
• 配分額: 3,000千円 (直接経費: 3,000千円); 2010年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円); 2009年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
• キーワード: in vivoイメージング / プロテインスプライシング / GR / MR / 生物発光 / Intein / luciferase / GFP

研究概要

細胞外シグナルは、受容体などの活性化を経て細胞内シグナルに変換され、最終的なターゲットへと伝達される。これまでに多くのシグナル伝達分子が同定され、シグナル伝達カスケードの存在が発見され、またそれらのシグナル伝達カスケードの基本要素ならびに反応機構の大枠は明らかとなってきた。しかしながら、こうした知見のほとんどが培養細胞を用いたシャーレの中のものにすぎず、個体レベルで実際にこのようなシグナル伝達のカスケードがシャーレの中と同様に働いているかどうかについては、未だ解明されていない。本研究ではこうした疑問に答えるために、二分した生物発光あるいは蛍光タンパク質を再構成させるプロテインスプライシング反応を利用して、動物個体レベルでの機能タンパク質の動態をリアルタイムにかつ空間的・時間的・量的な要素を加味して可視化することを目的とする。平成22年度は、グルココルチコイドレセプター(GR)とミネラルコルチコイドレセプター(MR)の細胞内動態を個体レベルで可視化するために、Intein(DnaE)のN末側(DnaE-N)に生物発光タンパク質(luciferase ; Luc)または蛍光タンパク質(green fluorescent protein ; GFP)のN末側半分と核移行シグナル(nuclear localization signal ; NLS)を結合させたプローブと、LucまたはGFPのC末側半分にDnaEのC末側(DnaE-C)とGRあるいはMRのcDNAを結合させたプローブの作製し、初代培養神経細胞に発現させ、BRETを観察した。今後、in vivoイメージングに向け、研究を続けていく予定である。

研究成果

• [雑誌論文] Rapid signaling of steroid hormones in the vertebrate nervous system : a comparative insight from fish to mammals. (2011)
  • 著者名/発表者名: Sakamoto H, Takahashi H, Matsuda K-I, Nishi M, Takanami K, Ogoshi M, Sakamoto T, Kawata M
  • 雑誌名: Frontia Biosci. 巻: (in press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] In vivo assessment of peripheral nerve regeneration by diffusion tensor imaging. (2011)
  • 著者名/発表者名: Morisaki S, Kawai Y, Umeda M, Nishi M, Oda R, Fujiwara H, Yamada K, Higuchi T, Tanaka C, Kawata M, Kubo T
  • 雑誌名: J of Magn Res Imag. 巻: (Epub ahead)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Intranuclear Dynamics of Corticosteroid Receptors and Effects of Proteasomal Activity in Cultured Hippocampal Neural Cells. (2011)
  • 著者名/発表者名: Nishi M, Horii-Hayashi N, Kawata M
  • 雑誌名: Neurosci Lett. 巻: 494 ページ: 65-69
  • 査読あり
• [雑誌論文] Environmental stimulation changes tissue-type plasminogen activator activity in the adult mouse hippocampus. (2011)
  • 著者名/発表者名: Horii-Hayashi N, Yoshikawa M, Nishi M, Wanaka A
  • 雑誌名: Neurochem Int. 巻: 58 ページ: 1-4
  • 査読あり
• [雑誌論文] Dynamics of corticosteroid receptors : implications from live cell imaging. (2011)
  • 著者名/発表者名: Nishi M
  • 雑誌名: Acta Histochem Cytochem. 巻: 44 ページ: 1-7
  • 査読あり
• [雑誌論文] Endogenous glucocorticoids improve myelination via Schwann cells after peripheral nerve injury : An in vivo study using a crush injury model. (2010)
  • 著者名/発表者名: Morisaki S, Nishi M., Fujiwara H, Oda R, Kawata M, Kubo T
  • 雑誌名: Glia 巻: 58 ページ: 954-963
  • 査読あり
• [雑誌論文] Expression of G protein-coupled receptor 30 in the spinal somatosensory system. (2010)
  • 著者名/発表者名: Takanami K, Sakamoto H, Matsuda K-I, Hosokawa K, Nishi M, Prossnitz ER, Kawata M
  • 雑誌名: Brain Res. 巻: 1310 ページ: 17-28
  • 査読あり
• [雑誌論文] Chondroitin sulfate demarcates astrocytic territories in the mammalian cerebral cortex. (2010)
  • 著者名/発表者名: Horii-Hayashi N, Tatsumi K, Matsusue Y, Okuda H, Okuda A, Hayashi M, Yano H, Tsuboi A, Nishi M, Yoshikawa M, Wanaka A
  • 雑誌名: Neurosci Lett. 巻: 483 ページ: 67-72
  • 査読あり
• [雑誌論文] Dynamics of corticosteroid receptors : lessons from live cell imaging. (2010)
  • 著者名/発表者名: Nishi M
  • 雑誌名: Journal of Nara Medical Association. 巻: 61 ページ: 63-71
  • NAID: 130000395310
  • 査読あり
• [雑誌論文] Expression of G protein-coupled receptor 30 in the spinal somatosensory system (2010)
  • 著者名/発表者名: Takanami K, Sakamoto H, Matsuda K-I, Hosokawa K, Nishi M, Prossnitz ER, Kawata M
  • 雑誌名: Brain Res. 1310 ページ: 17-28
  • 査読あり
• [雑誌論文] Role of glucocorticoids and glucocorticoid receptor in the peripheral nerve regeneration (2010)
  • 著者名/発表者名: Morisaki S, Nishi M, Fujiwara F, Oda R, Kawata M, Kubo T
  • 雑誌名: Glia Epub ahead
  • 査読あり
• [学会発表] ステロイドホルモンレセプターダイナミクスの蛍光イメージング (2011)
  • 著者名/発表者名: 西真弓
  • 学会等名: 奈良女子大学ライフサイエンスセミナー
  • 発表場所: 奈良
  • 年月日: 2011-01-24
• [学会発表] Effects of early life adverse events on brain plasticity. (2011)
  • 著者名/発表者名: Mayumi Nishi, Noriko Horii-Hayashi, Yumiko Matsusue, Cho Azuma
  • 学会等名: 第88回日本生理学会大会、第116回日本解剖学会総会・全国学術集会合同大会
  • 発表場所: 横浜
• [学会発表] Effects of maternal separation on postnatal development in the amygdala of mouse brain. (2011)
  • 著者名/発表者名: Noriko Horii-Hayashi, Yumiko Matsusue, Cho Azuma, Mayumi Nishi
  • 学会等名: 第88回日本生理学会大会、第116回日本解剖学会総会・全国学術集会合同大会
  • 発表場所: 横浜
• [学会発表] Distribution of corticosteroid receptor in oligodendrocytes of mice. (2011)
  • 著者名/発表者名: Yumiko Matsusue, Noriko Horii, Katsuhiko Ono, Mayumi Nishi
  • 学会等名: 第88回日本生理学会大会、第116回日本解剖学会総会・全国学術集会合同大会
  • 発表場所: 横浜
• [学会発表] ステロイドホルモンレセプターの神経生物学-分子から行動へ- (2010)
  • 著者名/発表者名: 西真弓
  • 学会等名: 京都大学神経科学セミナー
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2010-07-05
• [学会発表] ステロイドの作用機序～ステロイド受容体のダイナミクス～ (2010)
  • 著者名/発表者名: 西真弓
  • 学会等名: 日本ペインクリニック学会 第44回大会 教育講演
  • 発表場所: 京都
  • 年月日: 2010-07-02
• [学会発表] ストレスホルモン・ステロイドホルモンの神経生物学-分子から行動へ- (2010)
  • 著者名/発表者名: 西真弓
  • 学会等名: 私立大学学術研究高度化推進事業・学術フロンテイア推進事業「虐待のメカニズムと防止の研究開発」成果報告会シンポジウム
  • 発表場所: 栃木
  • 年月日: 2010-05-01
• [学会発表] 顕微鏡で見る生きている細胞の世界:GFPを用いて受容体の動きを可視化する (2010)
  • 著者名/発表者名: 西真弓
  • 学会等名: 未来の科学者養成講座. フューチャーサイエンティスト育成プログラム 学び担えよ先端的生命医科学 平成21年度第2回セミナー
  • 発表場所: 福井
  • 年月日: 2010-02-13
• [学会発表] The relationship between early life adverse events and behavior and brain structure in adulthood. (2010)
  • 著者名/発表者名: Nishi M, Horii-Hayashi N, Kawata M, Shoji H.
  • 学会等名: 7^<th> International Congress Neuroendocrinology.
  • 発表場所: Rouen, France
• [学会発表] 脳科学の将来と新分野創成センター (2010)
  • 著者名/発表者名: 西真弓
  • 学会等名: パネルディスカッション 包括型脳科学研究推進支援ネットワーク 夏のワークショップ
  • 発表場所: 札幌
• [学会発表] 早生期母子分離ストレスが脳構築に及ぼす影響 (2010)
  • 著者名/発表者名: 堀井謹子、西真弓
  • 学会等名: 第33回日本神経科学大会
  • 発表場所: 神戸
• [学会発表] Dynamics of steroid hormone receptors : implications from live cell imaging. (2010)
  • 著者名/発表者名: Nishi M
  • 学会等名: 第51回日本組織細胞化学会総会・学術集会日米合同シンポジウム
  • 発表場所: 東京
• [学会発表] ステロイド受容体ダイナミクスの蛍光イメージング (2010)
  • 著者名/発表者名: 西真弓
  • 学会等名: 第115回日本解剖学会総会全国学術集会シンポジウム
  • 発表場所: 岩手
• [学会発表] Effects of maternal separation on behavioral disorders in adulthood (2009)
  • 著者名/発表者名: 西真弓, 八神美香, 河田光博
  • 学会等名: 第36回日本神経内分泌学会
  • 発表場所: 北九州
• [学会発表] The relationship between early life adverse events and behavioral disorders in adulthood (2009)
  • 著者名/発表者名: 西真弓, 小児尚子, 河田光博
  • 学会等名: 第32回日本神経科学会大会
  • 発表場所: 名古屋
• [学会発表] GFPを用いた分子イメージング. シンポジウム「分子から個体への機能分子の可視化」 (2009)
  • 著者名/発表者名: 西真弓, 河田光博
  • 学会等名: 第50回日本組織細胞化学会
  • 発表場所: 大津
• [図書] Transcription Factors : Methods and Protocols, Ed.Paul Higgins編集 (2010)
  • 著者名/発表者名: Nishi M
  • 総ページ数: 647
  • 出版者: Humana Press, USA, pp199-212
• [図書] Transcription Factors : Methods and Protocols, Ed.Paul Higgins 編集 (2010)
  • 著者名/発表者名: Nishi M
  • 出版者: Humana Press, USA(In Press)
• [備考]
  • URL: http://www.naramed-u.ac.jp/~1ana/