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RNA干渉技術を駆使してアポトーシス誘導シグナルを増強した遺伝子治療法の開発

研究課題

研究課題/領域番号 21659323
研究種目

挑戦的萌芽研究

配分区分補助金
研究分野 消化器外科学
研究機関札幌医科大学

研究代表者

時野 隆至  札幌医科大学, 医学部, 教授 (40202197)

研究分担者 古畑 智久  札幌医科大学, 医学部, 准教授 (80359992)
研究期間 (年度) 2009 – 2010
研究課題ステータス 完了 (2010年度)
配分額 *注記
3,000千円 (直接経費: 3,000千円)
2010年度: 1,200千円 (直接経費: 1,200千円)
2009年度: 1,800千円 (直接経費: 1,800千円)
キーワードがん / 遺伝子治療 / トランスレーショナルリサーチ / RNA干渉 / p53 / アポトーシス / 癌 / 遺伝子 / トランスレーションリサーチ
研究概要

癌抑制遺伝子p53の導入による遺伝子治療が有効であると考えられるが、必ずしも著効するとは限らず、さらなる工夫が必要である。これまでに、我々はp21発現抑制miRNA/p53共発現アデノウイルスベクター(Ad-p53/miR-p21)を開発することで癌治療効果を増強することに成功した。そこで、更に別の標的遺伝子のひとつであるMDM2を特異的に発現抑制する人工miRNAの設計を行った。この設計配列を元に4種類のDNAオリゴを合成し発現プラスミドベクターに組み込んだ。このベクターをp53発現ベクターと共に大腸癌細胞HCT116にトランスフェクションしたところ、p53が強発現しているにもかかわらずMDM2の蛋白発現誘導の抑制が認められた。次に、相同組み換えを用いて、このベクターをアデノウイルスベクターAd-miR-MDM2を作成した。このアデノウイルスベクターをAd-p53/miR-p21と共に大腸癌細胞DLD-1に感染させたところ、MDM2の発現抑制によりp53の発現上昇と、それに伴うアポトーシスの増強効果が認められた。肝癌細胞Hep3Bおよび大腸癌細胞SW480にアドリアマイシンを併用した場合においても、miR-MDM2はAd-p53/miR-p21によるアポトーシス誘導を増強した。
本研究において、p53発現ベクターにp21抑制miRNAおよびMDM2抑制miRNAベクターを併用することでアポトーシス増強効果を得ることに成功した。miRNA発現ベクターは、他のmiRNAをタンデムに接続することで複数の標的遺伝子の発現を抑制することが可能である。このため、他のアポトーシス阻害的な遺伝子に対するmiRNA設計し、複数を組み合わせることで相乗効果を得ることができる。この研究成果により、更なるp53遺伝子治療効果の増強および治療耐性の回避が期待できる。

報告書

(2件)
  • 2010 実績報告書
  • 2009 実績報告書
  • 研究成果

    (26件)

すべて 2010 2009 その他

すべて 雑誌論文 (15件) (うち査読あり 15件) 学会発表 (9件) 備考 (2件)

  • [雑誌論文] IGFBP7 is a p53 responsive gene specifically silenced in colorectal cancer with CpG island methylator phenotype.2010

    • 著者名/発表者名
      Suzuki, Hiromu, et al
    • 雑誌名

      Carcinogenesis

      巻: VOL.31 ページ: 342-349

    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Genomic screening for genes upregulated by demethylation revealed novel target of epigenetic silencing in breast cancer.2010

    • 著者名/発表者名
      Fujikane, Tomoko, et al
    • 雑誌名

      Breast Cancer Res Treat

      巻: VOL.122 ページ: 699-710

    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] DNA methylation of interferon regulatory factors in gastric cancer and noncancerous gastric mucosae.2010

    • 著者名/発表者名
      Yamashita, Masaki, et al
    • 雑誌名

      Cancer Science

      巻: VOL.101 ページ: 1708-1716

    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Identification and characterization of early growth response 2, a zinc-finger transcription factor, as a p53-regulated proapoptotic gene.2010

    • 著者名/発表者名
      Yokota, Ikuko, et al
    • 雑誌名

      Int J Oncology

      巻: VOL.37 ページ: 1407-1416

    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] A novel correlation between LINE-1 hypomethylation and the malignancy of gastrointesrinal stromal tumors.2010

    • 著者名/発表者名
      Igarashi, Shinichi, et al
    • 雑誌名

      Clin Cancer Res

      巻: VOL.16 ページ: 5114-5123

    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Genomic screening for genes upregulated by demethylation revealed novel targets of epigenetic silencing in breast cancer2010

    • 著者名/発表者名
      Fujikane, Tomoko, et al
    • 雑誌名

      Breast Cancer Res Treat (in press)

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] IGFBP7 is a p53 responsive gene specifically silenced in colorectal cancer with CpG island methylator phenotype2010

    • 著者名/発表者名
      Suzuki, Hiromu, et al
    • 雑誌名

      Carcinigenesis VOL.31

      ページ: 342-349

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] p53 family members regulate the expression of the apolipoprotein D gene2009

    • 著者名/発表者名
      Sasaki, Yasushi, et al
    • 雑誌名

      J Biological Chemistry VOL.284

      ページ: 872-883

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] A single recombinant adenovirus expressing p53 and p21-targeting artificial microRNAs efficiently induces apoptosis in human cancer cells2009

    • 著者名/発表者名
      Idogawa, Masashi, et al
    • 雑誌名

      Clinical Cancer Res VOL.15

      ページ: 3725-3732

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] CHFR, a potential tumor suppressor, downregulates interleukin-8 via inhibition of NF-kB2009

    • 著者名/発表者名
      Kashima, Lisa, et al
    • 雑誌名

      Oncogene VOL.28

      ページ: 2643-2653

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] A novel method, digital genome scanning detects KRAS gene amplification in gastric cancers : involvement of overexpressed wild-type KRAS in downstream signaling and cancer cell growth2009

    • 著者名/発表者名
      Mita, Hiroaki, et al
    • 雑誌名

      BMC Cancer VOL.9

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] A novel biomarker for cervical cancer2009

    • 著者名/発表者名
      Tokino, Takashi
    • 雑誌名

      Cancer Biology Therapy VOL.8

      ページ: 1154-1155

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Genomic Screening for genes silenced by DNA methylation revealed an association between RASD1 inactivation and dexamethasone resistence in multiple myeloma2009

    • 著者名/発表者名
      Nojima, Masanori, et al
    • 雑誌名

      Clinical Cancer Res VOL.15

      ページ: 4356-4364

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Cancer epigenomics : Implications of DNA methylation in personalized cancer therapy2009

    • 著者名/発表者名
      Toyota, Minoru, et al
    • 雑誌名

      Cancer Science VOL.100

      ページ: 787-791

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Overexpression of Aurora A by loss of CHFR gene expression increases the growth and survival of HTLV-1-infected T cells through enhanced NF-kappaB activity2009

    • 著者名/発表者名
      Tomita, Mariko, et al
    • 雑誌名

      Int J Cancer VOL.124

      ページ: 2607-2615

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
    • 査読あり
  • [学会発表] Epigenetic silencing of microRNA-34b/c in human gastric cancer.2010

    • 著者名/発表者名
      Suzuki, Hiromu, et al
    • 学会等名
      米国癌学会年会
    • 発表場所
      Convention Center, Wasgington, DC(米国)
    • 年月日
      2010-04-21
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [学会発表] CHFR, a potential tumor suppressor, downregulates interleukin-8 via inhibition of NF-kB.2010

    • 著者名/発表者名
      Takino, Takashi, et al
    • 学会等名
      米国癌学会年会
    • 発表場所
      Convention Center, Wasgington, DC(米国)
    • 年月日
      2010-04-20
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [学会発表] Single adenovirus-mediated simultaneous expression of p53 and the artificial microRNAs targeting anti-apoptotic p53 target genes.2010

    • 著者名/発表者名
      Idogawa, Masashi, et al
    • 学会等名
      米国癌学会年会
    • 発表場所
      Convention Center, Wasgington, DC(米国)
    • 年月日
      2010-04-18
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [学会発表] A single adenovirus expressing p53 protein and p21-targeting artificial microRNAs improves therapeutic outcome in cancer2010

    • 著者名/発表者名
      Tokino, Takashi
    • 学会等名
      8th Joint Conference of AACR and JCA
    • 発表場所
      Hilton Waikoloa Village(米国)
    • 年月日
      2010-02-09
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [学会発表] CHFR, a potential tumor suppressor, downregulates interleukin-8 via inhibition of NF-kB2010

    • 著者名/発表者名
      Kashima, Lisa, et al
    • 学会等名
      8th Joint Conference of AACR and JCA
    • 発表場所
      Hilton Waikoloa Village(米国)
    • 年月日
      2010-02-08
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [学会発表] hCLCA2, a p53 inducible transmembrane protein, regulates cancer cell migration and adhesion2010

    • 著者名/発表者名
      Sasaki, Yasushi, et al
    • 学会等名
      8th Joint Conference of AACR and JCA
    • 発表場所
      Hilton Waikoloa Village(米国)
    • 年月日
      2010-02-07
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [学会発表] Identification and characterization of early growth response gene-2 as a p53-regulated proapoptotic gene2010

    • 著者名/発表者名
      Yokota, Ikuko, et al
    • 学会等名
      8th Joint Conference of AACR and JCA
    • 発表場所
      Hilton Waikoloa Village(米国)
    • 年月日
      2010-02-07
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [学会発表] p53 family members regulate the expression of the apolipoprotein D gene2009

    • 著者名/発表者名
      Sasaki, Yasushi, et al
    • 学会等名
      米国癌学会年会
    • 発表場所
      Colorado Convention Center(米国)
    • 年月日
      2009-04-21
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [学会発表] A single recombinant adenovirus expressing p53 and p21-targeting artificial microRNAs efficiently induces apoptosis in human cancer cells2009

    • 著者名/発表者名
      Idogawa Masashi, et al
    • 学会等名
      米国癌学会年会
    • 発表場所
      Colorado Convention Center(米国)
    • 年月日
      2009-04-21
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [備考]

    • URL

      http://web.sapmed.ac.jp/canmol/

    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [備考]

    • URL

      http://web.sapmed.ac.jp/canmol/index.html

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書

URL: 

公開日: 2009-04-01   更新日: 2016-04-21  

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