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アネキシンA5LacZノックインマウスを用いた歯周組織幹細胞の同定と機能解析

研究課題

研究課題/領域番号 21659425
研究種目

挑戦的萌芽研究

配分区分補助金
研究分野 形態系基礎歯科学
研究機関鶴見大学

研究代表者

二藤 彰  鶴見大学, 歯学部, 教授 (00240747)

研究分担者 島田 明美  鶴見大学, 歯学部, 助教 (00339813)
研究期間 (年度) 2009 – 2010
研究課題ステータス 完了 (2010年度)
配分額 *注記
3,000千円 (直接経費: 3,000千円)
2010年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
2009年度: 1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
キーワード歯根膜 / 組織幹細胞 / アネキシンA5 (Anxa5) / β-galactosidase / 幹細胞 / アネキシン / 歯周組織 / ペリサイト
研究概要

本研究は 歯周組織においてBrduラベル長期保持細胞が組織再生過程で機能し、annexin A5を発現するペリサイトpericyteの性格をもつ幹細胞である、という仮説をノックインマウスを用いて解析することを目的としている。困難であった、Brdu LacZの組織での共局在解析が本研究で開発した低温アセトン固定法により可能となった。この技術を用い、Brduラベル長期保持細胞(LRCs)の局在がannexin A5陽性細胞(LacZ発現細胞)と重なるかどうか解析したところ、LacZ陽性細胞の一部はBrduラベル長期保持細胞であり、静止型幹細胞の性質を保持することが示唆された。
annexin A5陽性の歯周組織細胞を回収するための実験として、FACS sortingを行う計画を立案したが、予備検討では10x 5乗オーダーの歯根膜細胞が必要であった。一方従来用いられてきた、コラゲナーゼ処理によって細胞を回収するアプローチだけでは、十分な細胞数を確保することが困難であることがわかった。そこで従来の方法を改良し、新たなコラーゲンゲル培養法を開発した。すなわち抜去した歯を歯根膜がついたままゲル上のコラーゲンに入れ、3次元培養でしばらく培養し、その上でコラゲナーゼ処理後細胞を回収した。さらに細胞を単層培養で増やした後に回収した。細胞のコロニー形成能と増殖能を調べたところ、ゲル内で培養することによってそれらの値が著明に増加し、回収できる細胞数も増加した。さまざまな遺伝子発現レベルでチェックしたところ、歯周組織や間葉系幹細胞のマーカーの発現が認められた。annexin A5-LacZノックインマウス由来の細胞についても同様に調べたところ、回収した幹細胞を含む細胞の中にLacZ陽性細胞が多数含まれていることがわかった。

報告書

(2件)
  • 2010 実績報告書
  • 2009 実績報告書
  • 研究成果

    (13件)

すべて 2010 2009

すべて 雑誌論文 (2件) (うち査読あり 2件) 学会発表 (11件)

  • [雑誌論文] Extracellular modulators regulate Bone Morphogenic Proteins in skeletal tissue2010

    • 著者名/発表者名
      Nifuji A, Ideno H, Takanabe R, Noda M
    • 雑誌名

      J Oral Biosciences

      巻: 52 ページ: 311-321

    • NAID

      10027625679

    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Protein related to DAN and cerberus (PRDC) inhibits osteoblastic differentiation and its suppression promotes osteogenesis in vitro.2009

    • 著者名/発表者名
      Ideno H, et al
    • 雑誌名

      Experimental Cell Research 315

      ページ: 474-484

    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
    • 査読あり
  • [学会発表] レトロトランスポゾンL1断片を持つ遺伝子群の骨格系細胞分化過程における統合的発現変動2010

    • 著者名/発表者名
      二藤彰、出野尚、荒木良子、安倍真澄
    • 学会等名
      第33回日本分子生物学会
    • 発表場所
      神戸ポートピア
    • 年月日
      2010-12-10
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [学会発表] 多能性間葉系細胞10T1/2をモデルとした筋肉細胞、脂肪細胞への選択的分化制御2010

    • 著者名/発表者名
      出野尚、荒木良子、今泉和彦、安倍真澄、二藤彰
    • 学会等名
      第65回日本体力医学会
    • 発表場所
      千葉商科大学
    • 年月日
      2010-09-17
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [学会発表] non-LTR型レトロトランスポゾンL1を持つ遺伝子群の骨格系分化過程における統合的発現制御2010

    • 著者名/発表者名
      二藤彰、出野尚、荒木良子、安倍真澄
    • 学会等名
      第28回日本骨代謝学会学術集会
    • 発表場所
      京王プラザホテル,東京
    • 年月日
      2010-07-23
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [学会発表] 硬組織におけるβ-Galactosidase(LacZ)レポーター遺伝子発現検出法の検討2010

    • 著者名/発表者名
      島日明美、小松浩一郎、二藤彰
    • 学会等名
      第28回日本骨代謝学会学術集会
    • 発表場所
      京王プラザホテル,東京
    • 年月日
      2010-07-23
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [学会発表] エンドサイトーシスを介した骨芽細胞の生存と分化に対するアレンドロネートの影響2010

    • 著者名/発表者名
      小松浩一郎、島田明美、出野尚、柴田達也、二藤彰
    • 学会等名
      第28回日本骨代謝学会学術集会
    • 発表場所
      京王プラザホテル,東京
    • 年月日
      2010-07-23
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [学会発表] Collagen Gel Culture Accelerates Proliferation of Mouse Periodontal Ligament Cells.2010

    • 著者名/発表者名
      Shimada A, Shibata T, Komatsu K, Nifuji A
    • 学会等名
      88th General Session & Exhibition of the IADR
    • 発表場所
      Centre Convencions Internacional Barcelona, Spain
    • 年月日
      2010-07-17
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [学会発表] 骨再生を目的としたプラスミドDNAによるin vivo遺伝子導入のためのキャリアーの検討2009

    • 著者名/発表者名
      柴田達也
    • 学会等名
      第27回日本骨代謝学会
    • 発表場所
      大阪
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [学会発表] 骨芽細胞分化の抑制・促進双方に働くBMP antagonist PRDCの機能2009

    • 著者名/発表者名
      出野尚
    • 学会等名
      第27回日本骨代謝学会
    • 発表場所
      大阪
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [学会発表] 骨芽細胞の生存と分化に及ぼすアレンドロネートの影響は分化段階により異なる2009

    • 著者名/発表者名
      小松浩一郎
    • 学会等名
      第27回日本骨代謝学会
    • 発表場所
      大阪
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [学会発表] BMP antagonist PRDCの発現抑制による骨形成の促進2009

    • 著者名/発表者名
      出野尚
    • 学会等名
      第64回体力医学会
    • 発表場所
      新潟
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書
  • [学会発表] Coordinate expression of multiple transcripts containing fragments of Line-1 retrotranposons during skeletal cell differentiation2009

    • 著者名/発表者名
      二藤彰
    • 学会等名
      第31回米国骨代謝学会 ASBMR
    • 発表場所
      デンバー
    • 関連する報告書
      2009 実績報告書

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公開日: 2009-04-01   更新日: 2016-04-21  

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