CLIP-RNAi法の開発と応用

• 研究課題/領域番号: 21686078
• 研究種目: 若手研究(A)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 生物機能・バイオプロセス
• 研究機関: 岡山大学
• 研究代表者: 大槻 高史 岡山大学, 大学院・自然科学研究科, 教授 (80321735)
• 研究期間 (年度): 2009 – 2011
• 研究課題ステータス: 完了 (2011年度)
• 配分額: 26,910千円 (直接経費: 20,700千円、間接経費: 6,210千円); 2011年度: 9,230千円 (直接経費: 7,100千円、間接経費: 2,130千円); 2010年度: 10,400千円 (直接経費: 8,000千円、間接経費: 2,400千円); 2009年度: 7,280千円 (直接経費: 5,600千円、間接経費: 1,680千円)
• キーワード: RNAi / 光誘導 / shRNA / siRNA / CLIP-RNAi / 遺伝子発現抑制 / RNA結合蛋白質 / 細胞膜透過性ペプチド

研究概要

最近,筆者ら培養プレート上の動物細胞に対して光照射領域特異的にRNAi(RNA配列特異的な遺伝子発現抑制)を誘導する技術(CLIP-RNAi法)を開発した。本課題では, CLIP-RNAi法で用いるキャリア蛋白質の改良により本技術を改良し、多様な波長の光に対応するように本技術を拡張した。また、CLIP-RNAi法を光照射領域特異的な細胞の分化誘導や、In vivoでのRNAiなどに応用することに取り組んだ。

研究成果

• [雑誌論文] Photoinduced RNA Interference (2012)
  • 著者名/発表者名: Matsushita-Ishiodori, Y., Ohtsuki, T
  • 雑誌名: Accounts of Chemical Research 巻: (in press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Photoinduced RNA Interference (2012)
  • 著者名/発表者名: Matsushita-Ishiodori Y, Ohtsuki T
  • 雑誌名: Accounts of Chemical Research 巻: (Epub ahead of print) 号: 7 ページ: 1039-1047
  • DOI: 10.1021/ar200227n
  • 査読あり
• [雑誌論文] Photosensitizing carrier proteins for photoinducible RNA interference (2011)
  • 著者名/発表者名: Matsushita-Ishiodori, Y., Kuwabara, R., Sakakoshi, H., Endoh, T., Ohtsuki, T
  • 雑誌名: Bioconjugate Chemistry 巻: Vol.22 ページ: 2222-2226
  • 査読あり
• [雑誌論文] Photosensitizing carrier proteins for photoinducible RNA interference (2011)
  • 著者名/発表者名: Matsushita-Ishiodori, Y., Kuwabara, R., Sakakoshi, H., Endoh, T., Ohtsuki, T.
  • 雑誌名: Bioconjugate Chemistry 巻: 22 号: 11 ページ: 2222-2226
  • DOI: 10.1021/bc200095a
  • 査読あり
• [雑誌論文] Site-specific incorporation of arginine analogs into proteins using arginyl-tRNA synthetase (2011)
  • 著者名/発表者名: Akahoshi, A., Suzue, Y., Kitamatsu, M., Sisido, M., Ohtsuki, T.
  • 雑誌名: Biochem.Biophys.Res.Commun. 巻: 414 号: 3 ページ: 625-630
  • DOI: 10.1016/j.bbrc.2011.09.137
  • 査読あり
• [雑誌論文] Synthesis and in situ insertion of a site-specific fluorescently labeled membrane protein into cell-sized liposomes (2011)
  • 著者名/発表者名: T. Ohtsuka, S. Neki, T. Kanai, K. Akiyoshi, S. M. Nomura, T. Ohtsuki
  • 雑誌名: Analytical Biochemistry 巻: 418 号: 1 ページ: 97-101
  • DOI: 10.1016/j.ab.2011.06.026
  • 査読あり
• [雑誌論文] 可視光照射によるRNAiの時空間的制御法(CLIP-RNAi法) (2011)
  • 著者名/発表者名: 石躍由佳, 遠藤玉樹, 大槻高史
  • 雑誌名: 実験医学 巻: 29 ページ: 1297-1302
• [雑誌論文] Cellular siRNA delivery using TatU1A and photo-induced RNA interference (2010)
  • 著者名/発表者名: Endoh, T. and Ohtsuki, T
  • 雑誌名: Methods in Molecular Biology 巻: Vol.623 ページ: 271-281
  • 査読あり
• [雑誌論文] Improvement of CPP-RBD for siRNA delivery (2010)
  • 著者名/発表者名: Kuwabara, R., Endoh, T., Sisido, M. and Ohtsuki, T
  • 雑誌名: Animal Cell Technology : Basic & Applied Aspects 巻: Vol.16 ページ: 191-196
• [雑誌論文] Synthesis of pyrrolidine-based oxy-peptide nucleic acids carrying four types of nucleobases and their transport into cytoplasm. (2010)
  • 著者名/発表者名: Kitamatsu, M.
  • 雑誌名: Tetrahedron 巻: 66 ページ: 9659-9666
  • 査読あり
• [雑誌論文] Improvement of CPP-RBD for siRNA delivery (2010)
  • 著者名/発表者名: Kuwabara, R.
  • 雑誌名: Animal Cell Technology : Basic & Applied Aspects 巻: 16 ページ: 191-196
• [雑誌論文] Lactobacillus-mediated RNA interference in nematode. (2010)
  • 著者名/発表者名: Kuwahara, A.
  • 雑誌名: Journal of Bioscience and Bioengineering 109 ページ: 189192-189192
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cellular siRNA delivery using cell-penetrating peptides modified for endosomal escape. (2010)
  • 著者名/発表者名: Endoh, T.
  • 雑誌名: Advanced Drug Delivery Reviews 61 ページ: 704709-704709
  • 査読あり
• [雑誌論文] Carrier PNA for shRNA delivery into cells (2009)
  • 著者名/発表者名: Kitamatsu, M., Kubo, T., Matsuzaki, R., Endoh, T., Ohtsuki, T. and Sisido, M
  • 雑誌名: Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 巻: Vol.19 ページ: 3410-3413
  • NAID: 120003386546
  • 査読あり
• [雑誌論文] Cellular siRNA delivery using cell-penetrating peptides modified for endosomal escape (2009)
  • 著者名/発表者名: Endoh, T. and Ohtsuki, T
  • 雑誌名: Advanced Drug Delivery Reviews 巻: Vol.61 ページ: 704-709
  • 査読あり
• [雑誌論文] Spatial regulation of specific gene expression through photoactivation of RNAi (2009)
  • 著者名/発表者名: Endoh, T., Sisido M. and Ohtsuki, T
  • 雑誌名: Journal of Controlled Release 巻: Vol.137 ページ: 241-245
  • 査読あり
• [雑誌論文] Spatial regulation of specific gene expression through photoactivation of RNAi (2009)
  • 著者名/発表者名: Endoh, T.
  • 雑誌名: Journal of Controlled Release 137 ページ: 241245-241245
  • 査読あり
• [雑誌論文] Carrier PNA for shRNA delivery into cells. (2009)
  • 著者名/発表者名: Kitamatsu, M.
  • 雑誌名: Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 19 ページ: 34103413-34103413
  • 査読あり
• [雑誌論文] A protease inhibitor discovery method using fluorescence correlation spectroscopy with position-specific labeled protein substrates. (2009)
  • 著者名/発表者名: Nakata, H.
  • 雑誌名: Anal.Biochem. 390 ページ: 121125-121125
  • 査読あり
• [雑誌論文] Detection of Bioactive Small Molecules by Fluorescent Resonance Energy Transfer in RNA-Protein Conjugate. (2009)
  • 著者名/発表者名: Endoh, T.
  • 雑誌名: Bioconjugate Chemistry 20 ページ: 22422246-22422246
  • 査読あり
• [学会発表] CLIP-RNAi法における新規RNAキャリアタンパク質の開発 (2011)
  • 著者名/発表者名: 石躍由佳, 桑原里奈, 遠藤玉樹, 大槻高史
  • 学会等名: 第52回日本生化学会,中国・四国支部例会
  • 発表場所: 広島
  • 年月日: 2011-05-13
• [学会発表] CLIP・RNAi法における新規RNAキャリアタンパク質の開発 (2011)
  • 著者名/発表者名: 石躍由佳、桑原里奈、遠藤玉樹、大槻高史
  • 学会等名: 第52回日本生化学会中国・四国支部例会
  • 発表場所: 広島
  • 年月日: 2011-05-13
• [学会発表] Design of RNA carrier molecules for photoinduced RNA interference (2011)
  • 著者名/発表者名: Matsushita-Ishiodori Y, Kuwabara R, Sakakoshi H, Endoh T and Ohtsuki T
  • 学会等名: 38th International Symposium on Nucleic Acid Chemistry
  • 発表場所: Sapporo
• [学会発表] 光により物質を細胞質内に送達するためのキャリア分子 (2011)
  • 著者名/発表者名: 大槻高史
  • 学会等名: Bio Japan 2011
  • 発表場所: 横浜
• [学会発表] 近赤外光による照射領域特異的RNAi誘導法の開発 (2011)
  • 著者名/発表者名: 石躍由佳, 森長美香, 大槻高史
  • 学会等名: 第84回日本生化学会大会
  • 発表場所: 京都
• [学会発表] 光応答性キャリア蛋白質を用いたRNAデリバリー (2011)
  • 著者名/発表者名: 大槻高史, 松本祥, 遠藤玉樹, 石躍由佳
  • 学会等名: アンチセンス・遺伝子・デリバリーシンポジウム
  • 発表場所: 大阪
• [学会発表] CLIP-RNAi法によるRNAiの光誘導 (2011)
  • 著者名/発表者名: 大槻高史, 米澤政樹, 松本祥, 遠藤玉樹, 石躍由佳
  • 学会等名: 第33回日本光医学・光生物学会
  • 発表場所: 大阪
• [学会発表] Design of RNA carrier molecules for photoinduced RNA interference (2011)
  • 著者名/発表者名: Yuka Matsushita-Ishiodori, Rina Kuwabara, Hiroyuki Sakakoshi, Tamaki Endoh, Takashi Ohtsuki
  • 学会等名: 38th International Symposium on Nucleic Acid Chemistry
  • 発表場所: 札幌
• [学会発表] Spatial regulation of specific gene expression through photoactivation of RNAi (2010)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuki, T
  • 学会等名: 第4回国立台湾大学と岡山大学の大学間交流シンポジウム
  • 発表場所: 岡山
  • 年月日: 2010-09-09
• [学会発表] Spatial regulation of specific gene expression through photoactivation of RNAi. (2010)
  • 著者名/発表者名: 大槻高史
  • 学会等名: 第4回 国立台湾大学と岡山大学の大学間交流シンポジウム
  • 発表場所: 岡山
  • 年月日: 2010-09-09
• [学会発表] Development of nucleic acid delivery system for intestinal therapy using lactic acid bacteria (2010)
  • 著者名/発表者名: Ryo Shintani
  • 学会等名: 第3回高度医療都市を創出する未来技術国際シンポジウム
  • 発表場所: 岡山
  • 年月日: 2010-02-03
• [学会発表] Photoinduced amber suppressor tRNA delivery into cytosol and amber suppression in mammalian cells (2010)
  • 著者名/発表者名: Yoshio Doi
  • 学会等名: 23rd tRNA workshop
  • 発表場所: Aveiro, Portugal
  • 年月日: 2010-02-01
• [学会発表] 光照射領域特異的RNAi誘導技術の開発 (2010)
  • 著者名/発表者名: 石躍由佳, 桑原里奈, 米澤政樹, 遠藤玉樹, 大槻高史
  • 学会等名: 第20回アンチセンスシンポジウム
  • 発表場所: 神戸
• [学会発表] CLIP-RNAi法による遺伝子発現抑制の光誘導 (2010)
  • 著者名/発表者名: 大槻高史, 石躍由佳, 遠藤玉樹, 宍戸昌彦
  • 学会等名: 第4回バイオ関連化学シンポジウム
  • 発表場所: 大阪
• [学会発表] 細胞質内RNA導入の光誘導とCLIP-RNAi (2010)
  • 著者名/発表者名: 大槻高史, 石躍由佳, 遠藤玉樹, 宍戸昌彦
  • 学会等名: 第12回日本RNA学会年会
  • 発表場所: 東京
• [学会発表] siRNAデリバリーのためのCPP-RBP型RNAキャリアの開発 (2009)
  • 著者名/発表者名: 桑原里奈, 遠藤玉樹, 宍戸昌彦, 大槻高史
  • 学会等名: 第32回分子生物学会年会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2009-12-12
• [学会発表] 乳酸菌をキャリアとする核酸デリバリーシステムの開発 (2009)
  • 著者名/発表者名: 新谷諒, 宍戸昌彦, 大槻高史
  • 学会等名: 第32回分子生物学会年会
  • 発表場所: 横浜
  • 年月日: 2009-12-12
• [学会発表] CLIP-RNAi法による光照射領域特異的な遺伝子発現抑制 (2009)
  • 著者名/発表者名: 大槻高史, 遠藤玉樹, 宍戸昌彦
  • 学会等名: 第82回日本生化学会大会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2009-10-23
• [学会発表] CLIP-RNAi法による光照射領城特異的な遺伝子発現抑制 (2009)
  • 著者名/発表者名: 大槻高史
  • 学会等名: 第82回日本生化学会大会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2009-10-23
• [学会発表] Applications of peptide nucleic acids for RNA purification, RNA detection, and intracellular RNA delivery (2009)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuki, T., Kitamatsu, M., Endoh, T., Sisido, M
  • 学会等名: The 6' th International Forum On Post-Genome Technologies
  • 発表場所: 北京
  • 年月日: 2009-09-17
• [学会発表] Applications of peptide nucleic acids for RNA purification, RNA detection, and intracellular RNA delivery (2009)
  • 著者名/発表者名: Takashi Ohtsuki
  • 学会等名: The 6'th International Forum On Post-Genome Technologies
  • 発表場所: 北京
  • 年月日: 2009-09-17
• [学会発表] CLIP-RNAi法による1細胞RNAiの経時的観察 (2009)
  • 著者名/発表者名: 大槻高史, 遠藤玉樹, 宍戸昌彦
  • 学会等名: 第18回日本バイオイメージング学会
  • 発表場所: 岡山
  • 年月日: 2009-09-04
• [図書] 「クローズアップ実験法」可視光照射によるRNAiの時空間的制御法(CLIP-RNAi法) (2011)
  • 著者名/発表者名: 石躍由佳, 遠藤玉樹, 大槻高史
  • 出版者: 羊土社
• [図書] Cellular siRNA delivery using TatU1A and photo-induced RNA interference. In "Methods Mol.Biol.vol.623, RNA Interference : From Biology to Clinical ADDlications" (2010)
  • 著者名/発表者名: Endoh, T.
  • 出版者: Springer
• [図書] 人工核酸によるRNAの検出と精製。In「シングルセル解析の最前線」 (2010)
  • 著者名/発表者名: 大槻高史
  • 出版者: シーエムシー出版
• [図書] The central dogma : from DNA to RNA, and to protein. In "Automation in Proteomics and Genomics" (2009)
  • 著者名/発表者名: Ohtsuki, T.
  • 出版者: Wiley
• [備考] 日経産業新聞に記事掲載、"「RNA干渉」細胞傷めず"H22年1月15日
• [産業財産権] 近赤外光によりRNAを細胞質内に送達するための新規なキャリア分子ならびに方法 (2011)
  • 発明者名: 大槻高史,石躍由佳
  • 権利者名: 岡山大学
  • 産業財産権番号: 2011-063953
  • 出願年月日: 2011-03-23
• [産業財産権] 近赤外光によりRNAを細胞質内に送達するための新規なキャリア分子ならびに方法 (2011)
  • 発明者名: 大槻高史,石躍由佳
  • 権利者名: 岡山大学
  • 出願年月日: 2011-11-24
  • 外国
• [産業財産権] 細胞内へ核酸を導入する為の新規な分子並びに細胞内へ導入する核酸および細胞内へ核酸を導入する為の新規な方法 (2011)
  • 発明者名: 川井淳,川上文清,大槻高史,宍戸昌彦
  • 権利者名: 東洋紡績株式会社、岡山大学
  • 取得年月日: 2011-04-01
• [産業財産権] 近赤外光によりRNAを細胞質内に送達するための新規なキャリア分子ならびに方法 (2011)
  • 発明者名: 大槻高史、石躍由佳
  • 権利者名: 岡山大学
  • 産業財産権番号: 2011-063953
  • 出願年月日: 2011-03-23
• [産業財産権] 乳酸菌により二本鎖RNAを生成するキット及びその利用 (2009)
  • 発明者名: 大槻高史、宍戸昌彦、公文裕巳、柏倉祐司、落合和彦
  • 権利者名: 岡山大学
  • 出願年月日: 2009-09-09
  • 外国