| 研究課題/領域番号 |
21890167
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| 研究種目 |
研究活動スタート支援
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
精神神経科学
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| 研究機関 | 山口大学 |
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研究代表者 |
山形 弘隆 山口大学, 医学部附属病院, その他 (10549934)
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| 研究期間 (年度) |
2009 – 2010
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| 研究課題ステータス |
完了 (2010年度)
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| 配分額 *注記 |
2,600千円 (直接経費: 2,000千円、間接経費: 600千円)
2010年度: 1,235千円 (直接経費: 950千円、間接経費: 285千円)
2009年度: 1,365千円 (直接経費: 1,050千円、間接経費: 315千円)
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| キーワード | 神経可塑性 / うつ病 |
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| 研究概要 |
神経分化誘導物質であるレチノイ酸存在下で低血清培養すると、神経由来細胞であるNeuro2Aは神経突起を伸ばすことが知られている。Neuro2AにGFPを発現させ、レチノイン酸で分化を誘導させ、蛍光顕微鏡でランダムに写真を撮り、樹状突起の長さを画像解析ソフトで測定・定量した。定量の方法にはSholl plot法を用いた。レチノイン酸刺激で神経突起伸長が定量できることが確認でき、定量法を確立することが出来た。次に、siRNAを用いてBubR1を特異的に減少させ、低血清で培養した。Neuro2Aはレチノイン酸などの神経分化誘導物質無しで突起を伸展させた。GFPとsiRNAを同時に細胞内に導入し、突起伸展後に蛍光顕微鏡で樹状突起の長さを測定・定量したところ、神経突起伸長が著明に亢進していることが明らかとなった。外在性にBubR1を高発現させた状態で、Neuro2Aの突起伸展を観察するため、BubR1のサブクローニングを行った。また、キナーゼ活性部位のDeietion Mutantをはじめ、BubR1の複数ミュータントを作成した。しかし、これらのタンパク発現をウェスタンブロットで確認したところ、発現が十分確認できなかったため、Flagタグを付けたBubR1も同時に作成した。その他、Morpholino oligoを用いて、siRNAとは異なる手法でBubR1のノックダウンを行った。神経突起伸展に伴ってBubR1が切断される可能性を考え、レチノイン酸やバルプロ酸刺激後にBubR1のウェスタンブロットを行ったが、BubR1切断フラグメントは検出できなかった。
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