| 研究課題/領域番号 |
21H02679
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| 研究種目 |
基盤研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分48040:医化学関連
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| 研究機関 | 日本大学 |
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研究代表者 |
鍔田 武志 日本大学, 歯学部, 客員教授 (80197756)
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| 研究分担者 |
岩井 佳子 日本医科大学, 大学院医学研究科, 大学院教授 (90362467)
赤津 ちづる 東京医科歯科大学, 難治疾患研究所, 助教 (60735984)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
17,550千円 (直接経費: 13,500千円、間接経費: 4,050千円)
2023年度: 5,070千円 (直接経費: 3,900千円、間接経費: 1,170千円)
2022年度: 5,070千円 (直接経費: 3,900千円、間接経費: 1,170千円)
2021年度: 7,410千円 (直接経費: 5,700千円、間接経費: 1,710千円)
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| キーワード | CD22 / シアル酸 / レクチン / B細胞 / LFA-1 / シスリガンド / Siglec / 細胞接着 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
細胞表面には特定の糖鎖を認識する種々のレクチンが存在し、同じ細胞の表面に発現する糖鎖修飾された種々の膜分子（シスリガンド）と結合することで、レクチンを起点とする分子ネットワークを形成するものと想定されるが、その実体はほとんど不明である。我々は、Proximity labeling法により、Bリンパ球(B細胞)に主に発現し、α2,6シアル酸を特異的に認識するレクチンCD22のシスリガンドを網羅的に同定することに成功した。そこで、本研究では、CD22がこれら新規CD22シスリガンドを糖鎖依存的に制御するか、さらにこの制御が重要な生命機能を担うかを明らかにする。
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| 研究実績の概要 |
CD22は主にBリンパ球に発現する抑制性の受容体で、細胞外領域でα2,6シアル酸を特異的に認識するレクチンである。我々は、Proximity labeling法を用いてCD22のシスリガンドを網羅的に同定し、これまでにシスリガンドであることが示唆されていたIgM, CD45,CD22の他にLFA-1を新規のシスリガンドとして同定した。LFA-1は細胞の接着や移動に関わり、チロシンキナーゼであるFAKはLFA-1を介するシグナル伝達で重要な役割を果たす。CD22が新規シスリガンドであるLFA-1の機能を制御するか、さらにその制御が重要な生命機能を担うかを明らかにするため、本研究では、CD22がシアル酸を介してLFA-1と会合することで、LFA-1と会合するチロシンキナーゼFAKなどの分子のリン酸化を制御するか、さらに、FAKが関わる細胞の移動や伸展を制御するかの解析を行なった。その結果、CD22欠損B細胞ではB細胞抗原受容体（BCR）架橋の際のFAKのリン酸化が増強していること、さらに、CD22のリガンドであるα2,6シアル酸を欠損するST6GalI欠損B細胞でもBCR架橋の際のFAKのリン酸化が増強することを明らかにし、CD22がシアル酸認識を介してFAKのリン酸化を抑制することを示した。抗LFA-1抗体をコートしたプレート上でのB細胞の伸展も同様にCD22がシアル酸依存的に抑制していることが明らかになった。さらに、B細胞をLFA-1のリガンドであるICAM-1の組み換えタンパク質をコートしたプレート上で細胞の運動をビデオ解析したところ、CD22がシアル酸依存的にB細胞の移動を抑制していることが明らかとなった。これらの結果から、CD22がLFA-1をシスリガンドとして認識することで、LFA-1が関わるシグナル伝達を制御し、B細胞の伸展や移動を制御することが明らかとなった。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
本研究では、我々がCD22の新規のシスリガンドとして同定したLFA-1 の機能がCD22によってシアル酸依存的に制御されるか、制御される場合には、そのメカニズムやその生命機能を明らかにすることを目的とする。CD22はチロシンホスファターゼSHP-1を活性化することで、B細胞の活性化を負に制御するが、我々はLFA-1のシグナル伝達に関わるFAKのリン酸化がCD22によってシアル酸依存的に抑制されること、さらにFAKが関わる細胞の伸展や移動もCD22によってシアル酸依存的に抑制されることを明らかにし、CD22がLFA-1をシスリガンドとして認識することにより、LFA-1の機能に関わる分子FAKをSHP-1が脱リン酸化し、B細胞の機能を制御することを明らかにした。これまで、CD22のシスリガンドとして同定されたLFA-1の機能をCD22が制御するかは不明であったが。今回の我々の研究成果からCD22がLFA-1をシスリガンドとして認識し、同じ細胞上で会合することでLFA-1の機能を制御するという生命現象の存在が確実となった。したがって、本研究の進捗状況は概ね順調と判断される。
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| 今後の研究の推進方策 |
これまでの研究でCD22がLFA-1をシスリガンドとして認識し、同じ細胞上で会合することでLFA-1の機能を制御するという生命現象の存在が明らかになった。今後は、CD22によるLFA-1の制御がどのような生命機能の制御に関わるかを明らかにする。CD22はシアル酸依存的にB細胞の増殖を制御することが知られている。そこで、LFA-1のアゴニスト抗体やアンタゴニスト抗体、さらにLFA-1欠損マウスB細胞を用いてB細胞の増殖制御でのLFA-1の役割を明らかにし、CD22によるB細胞増殖制御にLFA-1がCD22のシスリガンドとして関わるかを明らかにする。さらに、CD22欠損B細胞やST6GalI欠損B細胞でのLFA-1を介するB細胞の接着をStatic adhesion assayなどで解析することで、B細胞でどのようにCD22がシアル酸依存的に LFA-1の機能を制御するかを明らかにする。CD22はチロシンホスファターゼSHP-1を活性化し、SHP-1が特定の細胞内基質を脱リン酸化することで細胞の機能を制御する。そこで、CD22がどのような分子メカニズムでLFA-1の機能を制御するかを解明するため、CD22によって活性化したSHP-1がどのような基質を脱リン酸化することでLFA-1の機能を制御するのかを明らかにする。
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