研究課題
基盤研究(B)
HBVは感染宿主域が非常に狭く感染せず、マウス肝臓細胞には全く感染しない。そのため、in vivoでの動物実験がヒト肝臓細胞を移植した免疫不全キメラマウスなどに限られている。しかし、免疫不全マウスのため、免疫系の研究やワクチン開発を行うためには制限がある。本研究では、HBVがマウス肝臓細胞に感染するためどのようなヒト宿主因子が必要かを同定し、HBV感染のマウスモデル開発に向けた基礎研究を行うことを目的とする。
昨年度までにHBV Coreタンパク質と結合する因子として、FIP1L1、RBMX、PARP1を同定し、siRNAを用いてHBV感染への影響を確認し、RBMXがHBV複製に重要な宿主因子であることを見出した。本年度はさらにこれらの因子のノックアウト(KO)細胞を作製し、HBV感染への影響を確認した。その結果、FIP1L1-KOおよびRBMX-KO細胞にHBVを感染させた結果、野生型細胞と比べてHBs抗原、HBe抗原量の減少が確認できた。しかしPARP1-KOはHBV感染に全く影響を及ぼさなかった。次にこれらの因子がHBV複製サイクルのどのステップに影響しているかの検討を行うため、cccDNA、HBV RNAの定量を行った。FIP1L1-KO細胞にHBVを感染させると野生型細胞と比較して、HBVのcccDNA、HBV RNA量の減少が確認できた。RBMX-KO細胞ではcccDNA量には顕著な差は見られなかったが、HBV RNA量の減少が見られた。これらの結果から、FIP1L1はHBV感染前期過程に影響し、RBMXはHBVの感染後期過程に影響していることが示唆された。したがって、今回はFIP1L1に着目し、さらなる実験を行った。FIP1L1の発現ベクターを作製し、マウスHepa1-6細胞にヒトNTCP発現細胞へFIP1L1を導入した細胞(Hepa1-6-hNTCP-FIP1L1)を樹立した。この細胞にHBVを感染させた結果、HBV感染は全く成立しなかった。そこで現在FIP1L1の結合因子を同定するため、HA-FIP1L1を作製し、HepG2細胞に導入しHA抗体で免疫沈降を行い、結合因子の同定を試みている。
令和5年度が最終年度であるため、記入しない。
