• 研究課題をさがす
  • 研究者をさがす
  • KAKENの使い方
  1. 前のページに戻る

細胞内侵入型抗狂犬病ウイルス中和モノクローナル抗体の探索と治療への応用

研究課題

研究課題/領域番号 21J13419
研究種目

特別研究員奨励費

配分区分補助金
応募区分国内
審査区分 小区分42020:獣医学関連
研究機関北海道大学

研究代表者

板倉 友香里  北海道大学, 国際感染症学院, 特別研究員(DC2)

研究期間 (年度) 2021-04-28 – 2023-03-31
研究課題ステータス 完了 (2022年度)
配分額 *注記
1,500千円 (直接経費: 1,500千円)
2022年度: 700千円 (直接経費: 700千円)
2021年度: 800千円 (直接経費: 800千円)
キーワード狂犬病ウイルス / 抗体 / 抗体療法 / 細胞膜透過性ペプチド
研究開始時の研究の概要

ウイルス感染症に対する抗体療法は、一般的にウイルス粒子表面上の膜蛋白質を標的とし、ウイルスの細胞内侵入過程を阻害する。しかし、狂犬病ウイルス(RABV)は一度脳に到達すると、その増殖を止めることは抗体療法を以てしても困難である。
本研究では、細胞内におけるウイルス増殖を直接的に阻害する抗RABV中和抗体の取得を目指す。RABVのゲノム複製機構を標的とし、その機能を阻害するモノクローナル抗体を取得する。さらに、細胞内移行ペプチドの付加により、細胞内に移行して機能する組換えモノクローナル抗体を作出する。作出した細胞内侵入型抗RABV抗体のRABV増殖抑制効果を評価し、治療応用への可能性を模索する。

研究実績の概要

当該年度は、組換えP蛋白質を免疫したマウス個体より、ハイブリドーマを取得した。ELISAにより、P蛋白質に対して高い結合性を示す96クローンを選抜し、ハイブリドーマがコードする抗体の重鎖、軽鎖の可変領域遺伝子のクローニングを試みた。しかしながら、ハイブリドーマ1クローンに対して、複数の遺伝子配列が存在し、且つストップコドンを有する配列が含まれることが明らかとなった。さらに、ハイブリドーマ取得に用いたミエローマが軽鎖遺伝子を有していた。これらの問題により、ハイブリドーマが実際に産生する抗体をコードする遺伝子配列の取得が困難であった。そこで、各クローンの抗体の可変領域遺伝子配列を次世代シークエンサーで解析し、30クローンを選抜した。
現在、選抜したクローンの抗体遺伝子のクローニング、及び組換え蛋白質としてモノクローナル抗体の作製を進めており、今後P蛋白質に対する結合性をELISAにより確認する。さらに、昨年度検討した細胞膜透過性ペプチド配列を付加し、組換え蛋白質として細胞内移行型のモノクローナル抗体を作出する。最終的に、細胞内移行型モノクローナル抗体のRABV感染細胞における中和能、RABV感染マウスにおける治療効果、及び異なるウイルス蛋白質を標的としたモノクローナル抗体とのカクテル剤としての治療効果の評価を計画している。
また、ウイルス感染症の治療法開発研究において、ウイルスの感染増殖機構に関する理解は必要不可欠である。当該年度は、宿主因子であるTSG101がRABVの出芽、及び粒子形成に重要な役割を果たすことを明らかにし、論文として報告した(Itakura Y et al., J Virol, 2023, in press)。本結果はRABVの増殖機構の一端を解明するものであり、狂犬病の治療法の開発に貢献することが期待される。

現在までの達成度 (段落)

令和4年度が最終年度であるため、記入しない。

今後の研究の推進方策

令和4年度が最終年度であるため、記入しない。

報告書

(2件)
  • 2022 実績報告書
  • 2021 実績報告書
  • 研究成果

    (12件)

すべて 2023 2022 2021 その他

すべて 国際共同研究 (1件) 雑誌論文 (5件) (うち国際共著 5件、 査読あり 5件、 オープンアクセス 5件) 学会発表 (6件) (うち国際学会 1件)

  • [国際共同研究] University College of Dublin(アイルランド)

    • 関連する報告書
      2022 実績報告書
  • [雑誌論文] Morphogenesis of bullet-shaped rabies virus particles regulated by TSG1012023

    • 著者名/発表者名
      Yukari Itakura, Koshiro Tabata, Takeshi Saito, Kittiya Intaruck, Nijiho Kawaguchi, Mail Kishimoto, Shiho Torii, Shintaro Kobayashi, Naoto Ito, Michiko, Harada, Satoshi Inoue, Ken Maeda, Ayato Takada, William W. Hall, Yasuko Orba, Hirofumi Sawa, Michihito Sasaki
    • 雑誌名

      Journal of Virology

      巻: - 号: 5

    • DOI

      10.1128/jvi.00438-23

    • 関連する報告書
      2022 実績報告書
    • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
  • [雑誌論文] Glu333 in rabies virus glycoprotein is involved in virus attenuation through astrocyte infection and interferon responses2022

    • 著者名/発表者名
      Itakura Yukari、Tabata Koshiro、Morimoto Kohei、Ito Naoto、Chambaro Herman M.、Eguchi Ryota、Otsuguro Ken-ichi、Hall William W.、Orba Yasuko、Sawa Hirofumi、Sasaki Michihito
    • 雑誌名

      iScience

      巻: 25 号: 4 ページ: 104122-104122

    • DOI

      10.1016/j.isci.2022.104122

    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
    • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
  • [雑誌論文] Air-liquid interphase culture confers SARS-CoV-2 susceptibility to A549 alveolar epithelial cells2021

    • 著者名/発表者名
      Sasaki Michihito、Kishimoto Mai、Itakura Yukari、Tabata Koshiro、Intaruck Kittiya、Uemura Kentaro、Toba Shinsuke、Sanaki Takao、Sato Akihiko、Hall William W.、Orba Yasuko、Sawa Hirofumi
    • 雑誌名

      Biochemical and Biophysical Research Communications

      巻: 577 ページ: 146-151

    • DOI

      10.1016/j.bbrc.2021.09.015

    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
    • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
  • [雑誌論文] A novel nairovirus associated with acute febrile illness in Hokkaido, Japan.2021

    • 著者名/発表者名
      Kodama F, Yamaguchi H, Park E, Tatemoto K, Sashika M, Nakao R, Terauchi Y, Mizuma K, Orba Y, Kariwa H, Hagiwara K, Okazaki K, Goto A, Komagome R, Miyoshi M, Ito T, Yamano K, Yoshii K, Funaki C, Ishizuka M, Shigeno A, Itakura Y, Bell-Sakyi L, Edagawa S, Nagasaka A, Sakoda Y, Sawa H, Maeda K, Saijo M, Matsuno K
    • 雑誌名

      Nat Commun

      巻: 12 号: 1 ページ: 5539-5539

    • DOI

      10.1038/s41467-021-25857-0

    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
    • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
  • [雑誌論文] SARS-CoV-2 Bearing a Mutation at the S1/S2 Cleavage Site Exhibits Attenuated Virulence and Confers Protective Immunity2021

    • 著者名/発表者名
      Sasaki Michihito、Toba Shinsuke、Itakura Yukari、Chambaro Herman M.、Kishimoto Mai、Tabata Koshiro、Intaruck Kittiya、Uemura Kentaro、Sanaki Takao、Sato Akihiko、Hall William W.、Orba Yasuko、Sawa Hirofumi
    • 雑誌名

      mBio

      巻: 12 号: 4

    • DOI

      10.1128/mbio.01415-21

    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
    • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
  • [学会発表] Budding and virion morphogenesis of Rabies virus regulated by ESCRT-1 component TSG101.2022

    • 著者名/発表者名
      Yukari Itakura, Koshiro Tabata, Takeshi Saito, Kittiya Intaruck, Nijiho Kawaguchi, Mai Kishimoto, Ayato Takada, Yasuko Orba, Hirofumi Sawa, Michihito Sasaki
    • 学会等名
      The 10th Sapporo Summer Seminar for One Health (SaSSOH)
    • 関連する報告書
      2022 実績報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] 狂犬病ウイルスの弾丸状粒子形成におけるM蛋白質とESCRT-1構成因子TSG101の相互作用の意義2022

    • 著者名/発表者名
      板倉友香里、田畑耕史郎、Kittiya Intaruck、岸本麻衣、伊藤直人、大場靖子、澤洋文、佐々木道仁
    • 学会等名
      第69回日本ウイルス学会学術集会
    • 関連する報告書
      2022 実績報告書
  • [学会発表] ESCRTタンパク質と狂犬病ウイルスの相互作用から考察する弾丸状ウイルス粒子形成機構2022

    • 著者名/発表者名
      板倉 友香里、田畑耕史郎、齋藤健、Intaruck Kittiya、川口虹穂、岸本麻衣、伊藤直人、高田礼人、大場靖子、澤洋文、佐々木道仁
    • 学会等名
      第45回日本分子生物学会年会
    • 関連する報告書
      2022 実績報告書
  • [学会発表] 細胞内侵入型抗ウイルス中和抗体作出に向けた細胞内移行ペプチドの有用性の検討2021

    • 著者名/発表者名
      板倉友香里、田畑耕史郎、大場靖子、澤洋文、佐々木道仁
    • 学会等名
      第44回日本分子生物学会年会
    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
  • [学会発表] G蛋白質333位のアミノ酸残基が規定する狂犬病ウイルスの病原性発現機構の解析2021

    • 著者名/発表者名
      板倉友香里、田畑耕史郎、伊藤直人、大場靖子、澤洋文、佐々木道仁
    • 学会等名
      第164回日本獣医学会学術集会
    • 関連する報告書
      2021 実績報告書
  • [学会発表] 狂犬病ウイルス感染増殖過程におけるESCRT-1構成因子TSG101の役割2021

    • 著者名/発表者名
      板倉友香里、伊藤直人、大場靖子、澤洋文、佐々木道仁
    • 学会等名
      第68回日本ウイルス学会学術集会
    • 関連する報告書
      2021 実績報告書

URL: 

公開日: 2021-05-27   更新日: 2024-03-26  

サービス概要 検索マニュアル よくある質問 お知らせ 利用規程 科研費による研究の帰属

Powered by NII kakenhi