| 研究課題/領域番号 |
21K05991
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分42040:実験動物学関連
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| 研究機関 | 東海大学 |
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研究代表者 |
阿部 幸一郎 東海大学, 医学部, 准教授 (90294123)
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| 研究分担者 |
吉川 正信 東海大学, 医学部, 准教授 (90276791)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2025-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2023年度: 780千円 (直接経費: 600千円、間接経費: 180千円)
2022年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2021年度: 2,340千円 (直接経費: 1,800千円、間接経費: 540千円)
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| キーワード | 慢性再発性多発性骨髄炎 / 自己炎症 / Srcファミリーキナーゼ / 疾患モデル / カルシトニン関連遺伝子ペプチド / 慢性再発性多発性骨髄炎（CRMO） / 骨痛モデル / 骨破壊 / Fgr / 慢性疼痛 / ダサチニブ |
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| 研究開始時の研究の概要 |
慢性再発性多発性骨髄炎（CRMO）は、自己炎症によって発症する、無菌性・非腫瘍性の骨・骨髄炎であり、骨痛や骨破壊の病変によって診断される。しかし、CRMO患者は「痛み」を主症状として訴えるが、骨痛や骨破壊のメカニズムはわかっていない。本研究では種々の疼痛評価を行って、CRMOモデルのAli18マウスの骨痛を解析し、新たな治療薬探索ツールとして確立することを目指す。また、組織学的手法で疼痛に関与する感覚神経マーカーの発現を解析して形態的指標を得る。最終的に既存のCRMOの治療薬や新たな分子標的薬候補の投与実験により、この系での鎮痛効果を検証する。
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| 研究実績の概要 |
現在までに、希少難病疾患のひとつである慢性再発性多発性骨髄炎（CRMOと略す）のモデルとなるAli18変異マウスを同定し、その原因遺伝子がSrcファミリーキナーゼ（SFK）のFgrであることを報告した。CRMO患者は自己炎症によって組織が損傷するために、「痛み」を主症状として訴えるが、骨痛や骨破壊のメカニズムは未知な点が多い。Ali18マウスを用いて疼痛試験を行ったところ、機械性非侵害刺激反応を検出するvon Freyフィラメント試験において、野生型マウスより過敏となっていることからアロディニア（異痛症）となっていることが考えられた。本研究課題において、体外受精により多くのAli18マウス個体を得て同試験を再度行ったところ、野生型に比較して統計的に有意に刺激に対して過敏となっていることが明らかになった。また、SFKの阻害剤でもあるダサチニブを投与すると、Ali18マウスの異痛症は正常へと変化することがわかった。Ali18マウスにダサチニブを投与すると、自己炎症が抑制されるとともに骨密度が増加して正常に近くなることが報告されている。これらより、Ali18マウスでは自己炎症により骨を含む組織損傷や骨密度低下が起こっており、これらが原因となって異痛症的な表現型を示していることが明らかとなった。さらにCRMOのより一般的な標的を模索するため、Ali18マウスをモデルとしてカルシトニン関連遺伝子ペプチド（CGRP)を候補として解析を行っている。まず、Ali18マウスにおけるCGRPの局在を知るために、抗CGRP抗体を用いて免疫組織学的解析を行うための条件設定を行っている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
疼痛試験によるAli18マウスの表現型解析とともに、新たな標的としてカルシトニン関連遺伝子ペプチド（CGRP)を候補として解析を行っている。この解析にはFgrをレポーター遺伝子と置き換えた遺伝子改変マウスを使用する予定である。このマウス系統は既に樹立されているが、Ali18マウスの遺伝的背景と異なる。Ali18の表現型を示すには元となるC3HeB/FeJの遺伝的背景が重要である。そこでAli18との戻し交配を繰り返した結果、ヘテロマウスでも表現型を示すようになった。このマウスを用いて、CGRPの局在を免疫組織染色で解析するとともに、レポーター発現により原因遺伝子の発現と比較を行う予定である。
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| 今後の研究の推進方策 |
現在までにCGRPの免疫組織学的解析の条件設定を行って、骨周辺の神経においてシグナルが検出されてきている。一方で、Fgrレポーターマウスの戻し交配も進んできているので、自己炎症による骨破壊も検出されている。今後、抗CGRP抗体を用いた免疫組織学的解析を、Fgrレポーターマウスの組織切片を用いて行い、CGRPの局在とレポーター発現を同時に検出する予定である。
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