| 研究課題/領域番号 |
21K06021
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分43010:分子生物学関連
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| 研究機関 | 大阪大学 (2022-2023)
横浜市立大学 (2021) |
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研究代表者 |
津中 康央 (津中康央) 大阪大学, 大学院工学研究科, 特任助教(常勤) (40551552)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2025-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円)
2023年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2022年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2021年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
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| キーワード | FACT / ヒストンバリアント / ヌクレオソーム / ヒストン交換 / ヒストンテイル / 構造生物学 / クロマチンリモデリング |
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| 研究開始時の研究の概要 |
クロマチンを構成する標準的なヒストンのヒストンバリアントへの交換反応は、ユークロマチンやヘテロクロマチンなどの特徴的なクロマチン構造の構築に寄与する。ヒストンシャペロンFACTはこのヒストン交換反応を促すことがわかっている。そこで本研究ではFACTがどのようにして標準的なヒストンとバリアントを識別し、ヌクレオソーム構造を変化させているのかを立体構造の観点から明らかにする。具体的にはX線結晶構造解析、電子顕微鏡解析、核磁気共鳴 (NMR) 解析などの手法を駆使し、FACTとヒストンの結合部位で各種ヒストンを明確に識別する部位を立体構造で可視化する。
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| 研究実績の概要 |
本研究では、FACTがどのように標準的なヒストンとヒストンバリアントを識別し、ヌクレオソーム構造を変化させているのかを明らかにしたい。そのために昨年度は、これまで見つかっていないヒストン側のFACT相互作用部位を同定した。今年度は、昨年度に同定された結合部位のうち、FACTと関連するヒストンバリアントで保存されていない領域のアミノ酸残基をバリアント型に変異させたものを遺伝子構築し、発現、精製を試みた。しかしながら、発現量が少なく、ヌクレオソームを再構成できる量を得ることができていない。変異体のコドンなどを改良して、発現量を多くする工夫を現在試みている。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
FACTと関連するヒストンバリアントで保存されていない領域のアミノ酸残基をバリアント型に変異させたものの発現、精製が遅れているため。
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| 今後の研究の推進方策 |
FACTと関連するヒストンバリアントで保存されていない領域のアミノ酸残基をバリアント型に変異させたものを遺伝子構築し、変異体の発現精製を行う。発現量の少ないものに関しては、コドンなどを改良し、発現量を向上させる。うまく発現精製できたものに関してヌクレオソームを再構成し、ヒストン交換反応が変化するかどうかを調べる予定。さらに、ヒストンバリアントの標準的ヒストンへの変異の効果も同様に調べる予定である。これらの生化学的解析により、この部位が本当にFACTによるヒストン識別部位か否か、さらに ヒストン交換反応にどのような効果があるのかを明らかにする。
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