| 研究課題/領域番号 |
21K06035
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分43020:構造生物化学関連
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| 研究機関 | 横浜市立大学 |
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研究代表者 |
奥田 昌彦 横浜市立大学, 生命医科学研究科, 特任准教授 (60448686)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2023年度: 390千円 (直接経費: 300千円、間接経費: 90千円)
2022年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2021年度: 2,340千円 (直接経費: 1,800千円、間接経費: 540千円)
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| キーワード | RNAポリメラーゼ / 基本転写因子 / タンパク複合体 / NMR / 立体構造 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
本研究では最初に、RNAPサブユニットの構造をNMR法で決定し、X線や電顕構造で見えていない領域を含むRNAPの完全構造モデルを構築する。次に、RNAPとTFIIHの相互作用領域の複合体構造を解く。最後に、得られた構造と前研究で構築したTFIIHの全体構造モデルから、RNAPとTFIIHの複合体の構造モデルを完成させ、RNAPとTFIIHの新規相互作用の分子認識機構を解明する。
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| 研究実績の概要 |
RNAポリメラーゼ(RNAP)と基本転写因子TFIIHはどちらも10個以上のサブユニットから成る超分子複合体であり、構造の大部分はX線結晶回折法(X線)やクライオ電子顕微鏡(電顕)によって解かれている。しかし、外に突き出たテールやドメイン等は運動性が高い為に見えない。申請者らは、既知のRNAPとTFIIHのX 線構造解析や電顕構造解析で見えていない領域間の新たな相互作用を見出した。本研究では、見えている領域を含んだ相互作用領域の複合体構造を核磁気共鳴 (NMR)法で決定し、見えていない領域を含むRNAPとTFIIHとの複合体の構造モデルを構築する。本年度は、RNAPサブユニットとTFIIH p62サブユニットの複合体のNMR構造を決定した。13C,15N標識 RNAP サブユニットと非標識 TFIIH p62 サブユニットの複合体と13C,15N 標識 TFIIH p62 サブユニットと非標識 RNAP サブユニットの複合体を調製し、多次元NMR 測定、及び解析を行った。距離、及び二面角制限情報を収集後構造計算し初期構造を得た。精密化を繰り返し、最終構造を決定した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
1: 当初の計画以上に進展している
理由
複合体試料の溶解度はあまり高くなかったものの、950MHz NMR分光器を使用したことにより、高分解能の構造決定に必要十分な分子間NOEシグナルを観測することが出来た。
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| 今後の研究の推進方策 |
RNAPとTFIIHとの複合体の構造モデルの構築を行う。TFIIHの全体構造モデル、RNAPの全体構造モデル、およびRNAPサブユニットとTFIIH p62サブユニットの複合体の構造から、RNAPとTFIIHとの複合体の構造モデルを完成させる。
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