| 研究課題/領域番号 |
21K07430
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分52020:神経内科学関連
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| 研究機関 | 長崎総合科学大学 |
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研究代表者 |
本村 政勝 長崎総合科学大学, 工学研究科, 教授 (70244093)
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| 研究分担者 |
松尾 秀徳 独立行政法人国立病院機構長崎川棚医療センター(臨床研究部), 医歯(薬)学総合研究科, 教授(移行) (20380975)
吉村 俊祐 長崎大学, 病院(医学系), 助教 (70746635)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2023年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円)
2022年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2021年度: 2,210千円 (直接経費: 1,700千円、間接経費: 510千円)
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| キーワード | アミノ酸固定化 カラム / 病原性自己抗体 / 神経筋接合部 / 重症筋無力症 / ランバート・イートン筋無力症候群 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
アミノ酸を固定化したアガロース担体カラムと神経筋接合部に対する病原性自己抗体を用いたIn vitro・基礎的研究を行い、アミノ酸固定化カラムがどのようにして病原性自己抗体を除去するかを解明する。本邦では、L-トリプトファン(Trp)固定化カラムである選択的血漿成分吸着器が、重症筋無力症患者の血漿交換治療に臨床応用されているが、ガイドラインでの評価は低い。その作用機序は、Trpが有する疎水性が重要であると推測されてきた。本研究では、20種類のアミノ酸固定化カラムを作成し、高力価のAChR抗体を有する精製免疫グロブリン検体を用いて、アフィニティークロマトグラフィー法で抗体の吸着・除去実験を行う。
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| 研究実績の概要 |
本研究の目的は、アミノ酸を固定化したアガロース担体カラムを作成し、アミノ酸固定化カラムがどのような機序で免疫グロブリン（Ig）を吸着するかを解明する。 方法は、20種類のアミノ酸をアガロース担体カラムに固定化し、健常者の血清を用いて、アフィニティークロマトグラフィー法でIgの吸着・溶出実験を行った。その結果、トリプトファン固定化(Trp)カラムのIgG吸着量(mg)の平均±標準偏差は6.90±1.01 mg、残りすべてアミノ酸固定化カラムのIgG吸着量(mg)の平均は2.00mg以下であった。対応のある分散分析とANOVA後の事後検定で、Trpカラムと他のアミノ酸カラムとのペアの多くでp <0.0001の統計的有意性が示された。次に，グリシン(Gly)、フェニルアラニ(Phe)、Trp、及び、Protein Aで固定化1mlカラムを作成して，健常者の血清(n=3)で溶出実験を行った。その結果、血清5ml（IgG総量約50ｍｇ)から、Protein Aカラムの溶出量の平均±標準偏差は24.17±0.70mg，Trpカラムでは18.31±0.50mgの順で、IgGが溶出された。免疫電気泳動法(n=3)では，Trp溶出液でProein A溶出液より薄いIgG, IgA, IgMが検出され，他の夾雑タンパク質は検出されなかった。これらの結果より、Trp固定化カラムは、Protein A固定化カラムが血清から精製できる最大結合IgG量の約75%の収率で，IgGを精製できることが示された。考察では、これら結果は、これまでの臨床で使用されているTrp固定化カラム（イムソーバTR）の有用性を強く支持する結果と思われる。以上より、Trp固定化カラムの吸着機序は、Protein A／Gカラムと類似で、免疫グロブリンの吸着によることが強く示唆された。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
現在、上記の実験結果をまとめて、論文作成中である。この論文は、基礎医学の分野の雑誌に投稿予定である。
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| 今後の研究の推進方策 |
今年は，本研究の最終年である。予定では、重症筋無力症の病原性自己抗体であるアセチルコリン受容体（AChR）抗体と筋特異性受容体型チロシンキナーゼ(MuSK)抗体、及び、ランバート・イートン筋無力症候群（LEMS）のP/Q型電位依存性カルシウムチャネル（VGCC）抗体などの各種病原性自己抗体を有する検体を用いて、今回のアミノ酸固定化カラムの吸着能を評価する。さらに実際の臨床現場で使用されているポリビニールアルコール担体のTrp固定化カラム、イムソーバTRと患者検体を用いた実験を予定している。昨年度に，長崎大学病院の倫理委員会にこの研究を承認して戴き，旭化成メディカル株式会社からイムソーバTR(TR-350)とイムソーバ(PH-350)を提供して戴いた。これからの1年間で，TR-350と病原性自己抗体の実験を行い，それらの結果で論文にしたいと考えている。
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