| 研究課題/領域番号 |
21K07531
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分52030:精神神経科学関連
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| 研究機関 | 日本医科大学 (2023)
愛知医科大学 (2021-2022) |
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研究代表者 |
岡田 尚志郎 日本医科大学, 大学院医学研究科, 研究生 (40203989)
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| 研究分担者 |
山口 奈緒子 愛知医科大学, 医学部, 准教授 (50380324)
呉 ユー秋 愛知医科大学, 医学部, 助教 (40717154)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2025-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2023年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2022年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
2021年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
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| キーワード | 室傍核 / 血中カテコールアミン / 拘束ストレス / AAV / トロンボキサンA2 / トロンボキサン受容体 / ノックダウン / カテコールアミン / AAV ベクター / ミノサイクリン / SU薬 / ATP感受性K+チャネル / GABA神経細胞 / 視床下部室傍核 / プロスタグランジンE2 / 脳内ノルアドレナリン神経系 / ホスホリパーゼC / アドレナリン受容体 / うつ病 / 2型糖尿病 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
うつ病の2型糖尿病発症リスクは高く、うつ病患者では脳での糖取り込み能が低下し、ストレスによる交感神経系の活性化を介した血糖値増加によるインスリン分泌亢進が糖尿病発症の契機になるのではないかと推測されている。しかし、ストレスに起因する血糖値増加の脳内機構についての詳細な機序は明らかではない。最近申請者らは、細胞内糖枯渇を惹起する2-デオキシグルコースによる血中アドレナリン増加が、視床下部室傍核おけるトロンボキサンA2産生を介して引き起こされることを見いだした。本研究では、 ストレスに起因する血糖値増加反応における視床下部室傍核のトロンボキサンA2産生を介した脳内機序を解明することを目的とする。
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| 研究実績の概要 |
当初トロンボキサン合成酵素をノックダウンしたラットを作製する予定であったが、ノックダウン効率の再検討の結果トロンボキサン受容体 (TP) ノックダウンラット作製に変更した。3種類（＃1、＃5および＃7）のTPノックダウンAAVおよびコントロールAAVを生理研のサポートで作成し、ラットの両側PVNに微量注入して、4種類のTPノックダウンラットを作成した。ノックダウン効率の検討は、TPノックダウンラット脳室内に投与したCRFによる血中アドレナリン増加の抑制を指標として行った。#1および#5 AAVノックダウンラットではCRF投与によるアドレナリン増加が抑制される実験結果をえた。この結果はPVNにおけるトロンボキサン受容体ノックダウンがCRFによるアドレナリン分泌を抑制することを示しており、我々がこれまでに薬理学的な解析で報告した結果に一致した。一方、#7ノックダウンラットではCRFによる血中アドレナリン増加を抑制しなかった。また、コントロールAAV 処置ラットにおいてもRFによる血中アドレナリン増加を抑制されなかった。以上の結果から、#1および＃5TPノックダウンAAVがノックダウンラット作成に有効なツールであることがわかった。
さらに、これら4種類のAAV処置ラットの収縮期血圧を非観血的に測定したところ、＃1、＃5 AAVラットでは平均120mmHg~125mmHg、一方、#7では平均135mmHg、コントロールAAVでは平均135mmHgであった。この結果は、PVNにおけるTPノックダウンによるアドレナリン分泌低下が安静時血圧の低下を示唆するものであり、大変興味深い。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
2種類（＃1、＃5）のTPノックダウンではCRF投与によるアドレナリン増加が抑制される実験結果をえた。この結果はPVNにおけるトロンボキサン受容体ノックダウンがCRFによるアドレナリン分泌を抑制することを示しており、我々がこれまでに薬理学的な解析で報告した結果に一致した。一方、#7ノックダウンラットおよびではコントロールAAV 処置ラットはCRFによる血中アドレナリン増加を抑制しなかった。以上の結果から、#1および＃5TPノックダウンAAVがノックダウンラット作成に有効なツールであることがわかった。
また、拘束ストレス負荷したラットからパンチアウトにより調製したPVNを用いて、qPCRによってCOX1および2、TxS、IKKの発現の時間経過を調べる実験系を立ち上げたところである。
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| 今後の研究の推進方策 |
2023年度は室傍核におけるトロンボキサン受容体発現のリアルタイムPCR 法およびウエス
タンブロッティング法による解析の予定である。パンチアウトにより調製したPVNを用いてqPCR測定系は立ち上がったところであるが、時間を要してしまい、2024年度に1年間延長を申請したところである。
さらに、ノックダウンラットの非観血的血圧測定から、安静時血中アドレナリンが血圧に
どのような影響を及ぼすのか、この点について知見を深めたい。
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