研究課題/領域番号 |
21K07736
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研究種目 |
基盤研究(C)
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配分区分 | 基金 |
応募区分 | 一般 |
審査区分 |
小区分52040:放射線科学関連
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研究機関 | 奈良県立医科大学 |
研究代表者 |
菓子野 元郎 奈良県立医科大学, 医学部, 准教授 (00437287)
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研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2023年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円)
2022年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2021年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円)
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キーワード | 活性酸素 / マイクロビーム / LET / ATM / oxidative stress / microbeam |
研究開始時の研究の概要 |
本研究では、「照射後の核外シグナルによる遅発性活性酸素の生成とATM活性化が、核内p53活性維持を介した老化誘導に関わる」という仮説を立て、その検証を行う。実験では、マイクロビームによる細胞内領域限定照射を利用し、核外における遅発性活性酸素生成とそれに伴うATM活性化を調べ、そのシグナルが核内p53-老化誘導経路に影響することを調べる。この研究により、放射線生物学で未解明な核外シグナルが細胞障害に関わる機構を解き明かし、p53-老化誘導経路に依存性の高い正常細胞に特異的な防護策を提案できる。
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研究実績の概要 |
2022年度においては、遅発性活性酸素による細胞障害性とその機構の解明のための実験を計画通りに実施できた。 高エネルギー加速器研究機構(KEK)の放射光マイクロビームによる実験では、細胞全体照射(40x40umの範囲)と細胞質照射(26um径の核遮へいで40x40umの範囲)による細胞生存への影響を調べる実験を実施し、遅発性活性酸素が生存率へ及ぼす影響を調べた。両照射条件で3Gy照射した結果、細胞全体照射後の生存率は約10%であったが、核遮へい細胞質照射後の生存率は約80%であった。線量については6Gyでも検討したが、約200個照射するのに1時間以上の時間を要するため、照射時の環境による細胞影響が大きくなるため妥当ではないと判断し、3Gyで評価することにした。マイクロビーム照射後のコロニー形成時に2.5mM AA2G(アスコルビン酸2グルコシド)処理により遅発性活性酸素が照射後の生存率へ及ぼす影響を調べた結果、細胞全体照射ではAA2G処理により有意な生存率上昇が認められたのに対し、細胞質照射ではAA2Gによる生存率上昇は認められなかった。この結果は、遅発性活性酸素の起源は細胞質(ミトコンドリアを含む)の領域ではなく、核におけるDNA損傷が関与していることを示唆している。 HIMACにおける炭素線照射実験により、遅発性活性酸素は高LET放射線ほど多く生成することが分かっていることから、マイクロビームによる結果と合わせて考えると、修復しにくいDNA損傷が生じることでDNA damage responseが強く発現するため、そのプロセスを介して遅発性活性酸素が誘導される可能性が示唆される。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
「遅発性活性酸素の起源はどこか?」という問いに対する答えが分かりつつあるが、当初の仮説とは異なる結果になったため、当初の計画を一部修正しながら進めている。 KEKの放射光マイクロビーム実験は、実験条件の確立に時間を要したが、遅発性活性酸素の生成起源が細胞質(ミトコンドリアを含む)であるのか否かを明らかにする系を確立し、結果的には細胞質ではなく核におけるヒットがその後の遅発性活性酸素誘導に関わることを明らかにすることができた。マイクロビーム実験では照射する細胞数が限定されるため、遅発性活性酸素を直接評価する手法がまだ確立できていないが、2023年度において達成出来る見込みである。 HIMACにおけるLETの違いによる遅発性活性酸素の生成量の比較は、当初の計画ではなかったが、ATM-p53経路の活性化と遅発性活性酸素が関わるというX線照射後の結果をさらに高LET放射線でも確認することができたため、DNA損傷の質の違いがあっても遅発性活性酸素の関与する細胞障害誘発が存在することが確認できた。
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今後の研究の推進方策 |
2023年度は最終年度であるため、これまで得られた結果をまとめることも意識しながら進めて行く予定である。 特にマイクロビーム実験はKEKの使用制限もあるため効率的に残されている課題を実施できるよう計画していきたい。実験系の見直しが必要な実験手法もあるため、効率の良い計画で進めて行きたい。
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