| 研究課題/領域番号 |
21K07980
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分53010:消化器内科学関連
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| 研究機関 | 神戸大学 |
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研究代表者 |
上田 佳秀 神戸大学, 医学研究科, 特命教授 (90378662)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2023年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2022年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
2021年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
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| キーワード | C型肝炎ウイルス / B型肝炎ウイルス / 遺伝子変異 / 遺伝子構造変化 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
本研究の目的は、C型肝炎ウイルス(HCV)ならびにB型肝炎ウイルス(HBV)の感染患者体内で生じている遺伝子変異バイアスを明らかにするとともに、遺伝子構造変化も含めた遺伝子変化と病態との関連を解明することである。本研究では、HCVならびにHBV感染患者の病態の変化に応じて経時的に採取した血清検体を用い、1分子リアルタイム・シーケンサーにてウイルス遺伝子解析を行う。各ウイルスの遺伝子変異バイアスを同定し、そのバイアスとは異なる変異を中心に各病態に関連する遺伝子変化を明らかにする。さらに、同定された遺伝子変化の意義をin vitro研究にて解明する。
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| 研究実績の概要 |
1. C型慢性肝炎患者の経過におけるC型肝炎ウイルス（HCV）遺伝子変異バイアスの特徴： C型慢性肝炎患者4例ならびに肝移植C型肝炎再発症例4例の抗HCV治療開始前ならびに治療終了後の血清におけるHCV遺伝子配列を1分子リアルタイム・シーケンサーならびに次世代シーケンサーを用いて同定した。HCV遺伝子配列の変化を経時的に比較して分子系統樹解析を行い、HCV遺伝子変異バイアスの特徴としてtransition変異が多く生じていること、中でもA→GとU→C変異の頻度が高いことを明らかにした。一方で、既知の薬物耐性変異はtransversion変異によっても生じており、変異が生じたHCVクローンが選択されて増殖していることを示した。以上の結果を論文発表した。
2. B型肝炎ウイルス（HBV）の遺伝子構造変化の意義： HCVで解析した方法と同様に、B型慢性肝炎患者10例の血清よりDNAを抽出し、HBV-DNAをPCRにて増幅し、1分子リアルタイム・シーケンサーならびに次世代シーケンサー解析を行った。その結果、大きな変化としてHBVのpreS/S領域ならびにC領域に欠失を認めるHBVの構造変化を多数例で認めた。このHBV構造変化と臨床経過の特徴との関連を解析し、HBe抗体陰性例や肝酵素高値例で多様な遺伝子欠失を認めていることを明らかにした。以上の結果を論文発表した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
おおむね計画どおりに進展している。
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| 今後の研究の推進方策 |
1. C型慢性肝炎の経過における遺伝子変化と病態との関連： 2021-2022年度の解析結果より明らかになった変異バイアスとは異なる変異パターンを示す遺伝子変異を中心に解析を行い、HCV感染、複製、増殖、治療抵抗性、治療後のウイルス増加の際に生じる遺伝子変化を明らかにする。さらに、免疫抑制状態である肝移植後と免疫能が正常な通常のC型慢性肝炎と比較検討し、免疫反応によって生じる変異バイアスの変化も明らかにする。
2. HCVレプリコンシステムを用いた遺伝子変化と病態との関連の解析： 上記研究にて同定されたHCV遺伝子変化の病態への関連をin vitroで明らかにするため、HCVレプリコンシステムを用いて解析を行う。遺伝子変異を導入したHCVクローンについて、Huh7.5細胞を用いたHCVレプリコン細胞の作成を行う。これらの細胞におけるHCV複製能や抗HCV薬の効果などの変化を解析する。
3. B型慢性肝炎患者の経過におけるHBV遺伝子変異バイアスの特徴： 1分子リアルタイム・シーケンサーならびに次世代シーケンサー解析結果を元に、分子系統樹解析を行い、HBV遺伝子変異バイアスを明らかにする。
4. B型慢性肝炎の経過におけるHBV遺伝子変化と病態との関連： 上記の解析結果より明らかになった変異バイアスとは異なる変異パターンを示す遺伝子変異を中心に解析を行い、HBV感染、複製、増殖、治療抵抗性、治療中や治療終了後に生じるHBV遺伝子変化を明らかにする。
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