研究課題/領域番号 |
21K08146
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研究種目 |
基盤研究(C)
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配分区分 | 基金 |
応募区分 | 一般 |
審査区分 |
小区分53030:呼吸器内科学関連
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研究機関 | 旭川医科大学 |
研究代表者 |
奥村 俊介 旭川医科大学, 医学部, 助教 (10516339)
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研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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研究課題ステータス |
中途終了 (2022年度)
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配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2023年度: 780千円 (直接経費: 600千円、間接経費: 180千円)
2022年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2021年度: 2,210千円 (直接経費: 1,700千円、間接経費: 510千円)
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キーワード | ミトコンドリアDNA / 肺炎 / 間質性肺炎 / 肺線維症 |
研究開始時の研究の概要 |
ヒト肺細胞株、マウス肺炎・肺線維症モデルを用いて、ミトコンドリアDNAにおけるダメージ関連分子パターンの機能を評価する。遺伝子発現解析、質量分析・タンパク発現解析を行い、ミトコンドリアDNAが作用するシグナル経路を特定する。薬剤スクリーニングパネルを用いて、ミトコンドリアDNAによる肺傷害を阻止するような薬剤を評価する。 臨床観察研究を行って、肺炎・肺線維症患者から血液と呼気を採取してDNAを抽出し、遺伝子発現解析により、ミトコンドリアDNAの発現レベルを評価する。
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研究実績の概要 |
臨床研究では、間質性肺炎および肺線維症の患者における血中ミトコンドリアDNAのコピー数の比較を行った。ミトコンドリアDNAコピー数を測定する際、高感度にミトコンドリアDNAの定量を行えるようDigital PCR法による測定法を開発した。間質性肺炎については、患者を慢性進行性の間質性肺炎・肺線維症と、非進行性の間質性肺炎・肺線維症の患者に分けて解析を行った。慢性進行性の間質性肺炎患者と非進行性の間質性肺炎の患者で血中ミトコンドリアDNAのコピー数の比較を行ったが、両群で明らかな差を認めなかった。さらに全間質性肺炎・肺線維症患者の血中ミトコンドリアDNAコピー数を、血中SP-D、血中KL-6、%FVC、%DLCOの各所見と比較したところ、いずれの所見についても血中ミトコンドリアDNAコピー数との相関を認めなかった。これら結果について、血液中のミトコンドリアDNAコピー数が、慢性期の間質性肺炎・肺線維症の病態以外の影響を受け、疾患特異性や臓器特異性に問題があると考察した。我々は疾患特異性や臓器特異性の問題を解決するため、患者の血液サンプルではなく、呼気凝縮液のサンプルを採取し、呼気凝縮液中のミトコンドリアDNAのコピー数を検証する実験を行うこととした。このため、呼気凝縮液サンプルからDNAを抽出してミトコンドリアDNAをDigital PCR法で測定する新たな測定法を開発した。この測定法により、健常者から採取した呼気凝縮液中のミトコンドリアDNAコピー数を高感度に測定できることができるようになった。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
新たに呼気凝縮液のサンプルを用いたミトコンドリアDNA測定を実施するにあたり、測定法の開発に時間を要した。
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今後の研究の推進方策 |
臨床研究では、呼気凝縮液を用いた新たなミトコンドリアDNA測定法を用いて、患者サンプルの解析を行う。また、ミトコンドリアDNAの作用機序を検証すべく、基礎研究を継続していく。
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