研究課題
基盤研究(C)
我々は腎生検症例コホートで尿レクチンアレイ解析による糖鎖の網羅的解析を行い、特定の尿レクチン結合シグナルがIgA腎症診断マーカーとして有用であることを新たに見出した。レクチンは修飾糖鎖を認識しているため、IgA腎症の病態形成に関与する糖蛋白はいまだ特定されていない。本研究では糖鎖プロファイルの変化の原因となる尿中糖蛋白を、患者尿検体を用い、アフィニティークロマトグラフィー及びショットガン法による質量解析によって明らかにする。併行してIgA腎症モデルマウスを用いて解析する。本研究は尿中糖鎖のIgA腎症におけるバイオマーカーとしてのメカニズム、および新規治療ターゲットとしての意義を明らかにする。
本研究はIgA腎症における尿中糖鎖プロファイルの変化について、レクチンカラムを用いたアフィニティークロマトグラフィー・質量解析により網羅的に解析し、新たな病態機序を解明することを目的としている。当院で腎生検を行った493例を対象に、45種類の異なる性質のレクチンを固定化したアレイにより尿中糖鎖を定量し、IgA腎症の診断能を評価した。血尿の有無、尿蛋白、血清IgAによる診断モデルに3種のレクチン(ACA, ABA, MAH)による尿中糖鎖シグナルを加えた場合、有意な判別能の改善を認めた。これらのレクチン、およびC1GALT1およびCOSMCを用いてヒト腎組織を蛍光染色したところ近位尿細管での陽性を認め、尿中糖鎖排泄量の変化は近位尿細管細胞から分泌される、あるいは切断された糖タンパク質を反映している可能性が示唆された。糖鎖の変化はO型糖鎖のガラクトース修飾不全を示唆しているが、レクチンは修飾糖鎖を認識しているため、IgA腎症の病態形成に関与する糖蛋白はいまだ特定されておらず、最も診断能が良好かつ腎機能で補正・層別化しても結果が変わらないACAを用いて、糖鎖プロファイルの変化の原因となる尿中糖蛋白をアフィニティークロマトグラフィー及びショットガン法による質量解析によって明らかにする。予備実験としてアフィニティークロマトグラフィー後に抽出試料をSDSPAGE、One-step Ruby染色を行ったところ、腎疾患ごとに泳動パターンの変化を認めた。腎疾患患者・腎移植ドナー尿検体は39例収集できており、本年度中に解析を行う予定である。
3: やや遅れている
最も診断能が良好、かつ腎機能で補正・層別化しても結果が変わらないACAを用いて、腎疾患患者・腎移植ドナー尿検体のアフィニティークロマトグラフィー・質量解析による解析を行う予定である。検体収集については39例得られたが、物流の影響もあり予備実験済みのレクチンカラムが得られなかった。このため昨年度後期から新規レクチンカラムを購入し予備実験を行い、ほぼ完了した。このため進捗区分を「(3)やや遅れている」とした。
患者検体採取は完了しているが、物流の影響もありアフィニティークロマトグラフィーに必要なレクチンカラムが当初予定した企業から調達できず、別途レクチンカラムを調達し予備実験を行った。本年度中に解析をすすめる予定である。
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