| 研究課題/領域番号 |
21K08480
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分54020:膠原病およびアレルギー内科学関連
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| 研究機関 | 帝京大学 |
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研究代表者 |
河野 肇 帝京大学, 医学部, 教授 (60585074)
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| 研究分担者 |
本田 浩章 東京女子医科大学, 医学部, 教授 (40245064)
本田 善一郎 お茶の水女子大学, 保健管理センター, 特任教授 (70238814)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2023年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2022年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2021年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
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| キーワード | ヒドロキシクロロキン / NETs / ミトコンドリア / 好中球 / SLE |
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| 研究開始時の研究の概要 |
全身性エリテマトーデス（SLE）は全身性自己免疫疾患のプロトタイプであり、その病態における獲得免疫の関与に関し精力的な研究がなされてきたが、自然免疫の関与についてはその解明は端緒についたところである。本申請では、SLEにおける自然免疫の関与を解明することを目標とする。1）ヒドロキシクロロキンの作用メカニズムとして同定されたミトコンドリア機能分子が関与する好中球NETosis亢進の分子機序の解明、2）NETsならびに細胞死がI型インターフェロンならびにインフラマソームのその関与を細胞死(danger signal)に対する炎症から解明すること、である。
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| 研究実績の概要 |
(1) 細胞死による炎症反応の分子機構、特にインフラマソーム形成の分子機構の解明。 細胞死、特にネクローシスはインフラマソーム活性化をもたらす。インフラマソーム活性化、もしくは抑制制機構を発見するために、今回2種類の方法でライブ ラリースクリーニングを行うこととし、アッセイに必用な系を構築済した。a) レトロウイルスライブラリー法 安定的にASC-Cerulean発現するマクロファージ セルラインRAW264.7細胞を樹立した。この細胞は、LPS+ATPなどの刺激によりインフラマソーム活性化をきたし、細胞質に一様に存在していた分子が一ヶ所に集 まりspeckleを形成する。 さらに、ecotropic retrovirus receptorを遺伝子導入してあり、通常難しいレトロウイルスによるマクロファージへの遺伝子導入が ほぼ100%容易にできる。マクロファージより採取したmRNAを用いてレトロウイルスライブラリーを作成し、ASC-Cerulean発現RAW264.7細胞に感染させた後、イン フラマソーム活性化刺激を行う。インフラマソーム活性化はパイロプトーシスという細胞死を導くため、刺激後に生存し、増殖してくる細胞を分離して、そこに 発現しているレトロウイルスライブラリー由来の分子を同定することにより、インフラマソーム抑制性分子が同定される。またその逆に、リアルタイムでインフ ラマソーム活性化を観察できる利点を生かして、インフラマソーム活性化因子の同定を行う。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
NETsを形成するセルラインについて、NETsの定量的検討がうまく行かない部分があるため。
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| 今後の研究の推進方策 |
これまでの研究方針を継続する。NETsを形成するセルラインについて方策を変えて検討をしている。
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