研究課題/領域番号 |
21K08665
|
研究種目 |
基盤研究(C)
|
配分区分 | 基金 |
応募区分 | 一般 |
審査区分 |
小区分55010:外科学一般および小児外科学関連
|
研究機関 | 大阪大学 |
研究代表者 |
正畠 和典 大阪大学, 大学院医学系研究科, 助教 (40588381)
|
研究分担者 |
前田 晃 大阪大学, 大学院医学系研究科, 招へい教員 (00319708)
|
研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
|
研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
|
配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2023年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2022年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2021年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
|
キーワード | Xenotransplantation / 糖鎖認識部位 / SP-A / ブタ血管内皮細胞 / 細胞障害率 / 自然免疫系細胞 / 膜型レクチン / 異種移植 / Transgenicブタ / バイオ人工臓器 |
研究開始時の研究の概要 |
ヒトGalectin-3、-9及び 肺胞サーファクタントSP-AのCDR(糖鎖認識部位)部分を膜型レクチンの一つCL-1のCDRに置き換え、ブタ血管内皮細胞(SEC)に遺伝子発現させることにより、主にブタ細胞上でのMonocyte/Macrophageの制御、MonocyteのM2-Macrophageへ分化誘導、及び免疫寛容誘導の可能性、同時に好中球に対する反応を検討する。なお、比較に、ヒト組織適合性抗原のclass IbであるHLA-G群を用いる。
|
研究実績の概要 |
肺胞サーファクタントSP-Aに目をつけ、そのCRD(糖鎖認識部位)部分を膜型レクチンの一つであるCL-1のCRDに置き換え、pCXN2-Vectorのcloning siteに挿入、pCXN2/CL-SP-Aを作成し、FACSでその発現を確認した。前回はヒトmonocyte/macrophageのcell lineであるTHP-1を使い、ブタ血管内皮細胞(SEC)に対する障害率を検討した。 今回はヒト抹消血からの顆粒球(PBMC)を取り出し、M-CSF(100ng/mL)を加え5日間培養しmacrophageに誘導した後、FACSにてCD14の発現を確認し、同時にSIRPaの発現を検証した。CL-SP-Aによるphagocytosis(貪食)に対する抑制効果を検討した。SECに対するヒトmacrophageの貪食率は約75%であったのに対し、SEC/CL-SP-Aに対しては約30%以下の値を示した。また、続いてROS産性能を検討した、SECの場合を100%とすると、SEC/CL-SP-Aでは約75%程度に落ちていた。さらに、反応の際のmacrophageでのサイトカイン産性能についてはmRNAを取りrt-PCR法で測定した、SEC/CL-SP-Aに対する場合は、SECに対する場合と比べて、IL-1bの産生に変化は示さなかったが、TNF-aやiNOS/Arg1は有意に下がっていた。一方、IL-10は有意に上昇していた。加えて、THP-1 Lucia NFkB細胞を用いて細胞障害を測定したが、SEC/CL-SP-AではSECに比してやはり有意にNF-kB遺伝子発現がおさえられていた。 これらの事から、hybrid分子CL-SP-AがmacrophageのSECに対する攻撃の際、その抑制に有効であることが証明された。
|
現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
CL-SP-Aのdeta が出だした。
|
今後の研究の推進方策 |
CL-SP-Aに関して、今度はヒトneutrophilでのphagocytosis等に対する制御効果を検討していく。 また、Galectin3の検討を行う
|