| 研究課題/領域番号 |
21K08851
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分55030:心臓血管外科学関連
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| 研究機関 | 久留米大学 |
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研究代表者 |
橋本 洋平 久留米大学, 医学部, 助教 (10811086)
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| 研究分担者 |
西田 憲史 久留米大学, 医学部, 助教 (50624508)
青木 浩樹 久留米大学, 付置研究所, 教授 (60322244)
田山 栄基 久留米大学, 医学部, 教授 (90281542)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2023年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2022年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2021年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
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| キーワード | 大動脈解離 / 炎症細胞 / 平滑筋細胞 / Syk / T reg / Treg |
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| 研究開始時の研究の概要 |
本研究は解離病態におけるTreg細胞の役割を明らかにし,Treg細胞の制御メカニズムをSykに着目して解明することである。近年の研究で、解離病態における組織破壊メカニズムは解明されつつある。しかし炎症応答の恒常性破綻メカニズムは未開拓の分野である。Treg細胞は、過度な炎症を抑制して生体の恒常性を保っている。本研究では、免疫制御分子SykがTreg細胞活性を維持し解離を抑制するとの独自の知見に基づき着想された。研究成果を解離病態に位置付けることで、Treg細胞を中心とした生体恒常性の破綻機構が解明される。さらにSykとTreg細胞の関連が明らかになることで生命現象に新たな視点が得られる。
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| 研究実績の概要 |
大動脈解離は突然発症し大動脈壁の破壊が急速に進行する致死的な疾患である。大動脈壁破壊には炎症応答が関与するが、その制御メカニズムは不明である。ヒト解離組織において炎症細胞マーカーの免疫染色により各種免疫細胞の相関関係を検討したところ、２つの炎症細胞クラスターを認めた。１つのクラスターは好中球とマクロファージからなっており、もう１つのクラスターはB細胞と各種ヘルパーT細胞サブセットからなっていた。制御性T細胞は好中球やマクロファージとの関連は低く、B細胞を含む細胞クラスターと密接に関連していた。大動脈解離マウスモデルにおいて炎症制御分子Sykを抑制すると全身の炎症応答は抑制されるが大動脈局所の炎症応答は亢進することを見出した。Sykを抑制により大動脈組織のFOXP3発現が低下しており、制御性T細胞の減少を反映すると思われた。マウス解離モデルにおけるトランスクリプトーム解析およびネットワーク解析では、SykはT細胞およびB細胞応答に関連する発現サブネットワークを制御することが示された。マウス解離モデルではマクロファージ特異的なSyk阻害は解離病態に大きな影響を与えなかった。組織間質細胞が炎症を制御する可能性を検討するために平滑筋細胞特異的Sykノックアウト・マウスを作成し検討を進めている。平滑筋細胞特異的Sykノックアウトについては、発生・成長段階での影響を回避するために薬物誘導性ノックアウトを用いている。大動脈組織の血管平滑筋細胞においてSyk遺伝子を除去するためのノックアウト誘導薬の濃度および投与スケジュールなどの条件最適化をin situ hybridizationにより検討している。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
ヒト大動脈解離の手術標本から組織マイクロアレイを作成し、各種炎症細胞マーカーの染色により炎症細胞相互の関連を検討した。マウス解離モデルにおいて、Syk阻害薬による全身Sykの抑制、マクロファージ特異的なSykノックアウトによる検討、平滑筋細胞特異的なSykノックアウトによる検討を進めている。ヒト解離組織の解析およびマクロファージ特異的Sykノックアウトの解析をほぼ完了した。平滑筋細胞特異的Sykノックアウトについては、発生・成長段階での影響を回避するために薬物誘導性ノックアウトを用いている。大動脈組織の血管平滑筋細胞においてSyk遺伝子を除去する条件の最適化を進めている。
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| 今後の研究の推進方策 |
平滑筋細胞特異的Sykノックアウトマウスを用いて、解離病態における平滑筋Sykの役割を明らかにする。制御性T細胞はB細胞および各種ヘルパーT細胞とクラスターを作ることが明らかになった。この細胞クラスターの解離病態における意義を明らかにするために、空間トランスクリプトーム解析により細胞の種類および遺伝子発現の変化を捉え、制御性T細胞と炎症病態の空間的な関連を明らかにする予定である。
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