| 研究課題/領域番号 |
21K08883
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分55040:呼吸器外科学関連
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| 研究機関 | 山口大学 |
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研究代表者 |
原田 栄二郎 山口大学, 医学部附属病院, 講師 (90467803)
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| 研究分担者 |
村上 順一 山口大学, 医学部附属病院, 助教 (10725683)
田中 俊樹 山口大学, 医学部附属病院, 講師 (50457305)
竹本 圭宏 山口大学, 医学部附属病院, 助教 (50622213)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2023年度: 1,040千円 (直接経費: 800千円、間接経費: 240千円)
2022年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2021年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
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| キーワード | 抗癌剤抵抗性 / RNA修飾酵素 / RNA修飾 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
近年のRNA修飾に関する研究で、DNAから転写されたmRNAが修飾を受けることで翻訳されるタンパク質の産生量が変化することが報告されている。そこで、本研究では、肺癌においても、癌の進展に関与する遺伝子から転写されたmRNAが修飾を受けることで、抗癌剤治療の抵抗性に関与しているのではないかと考え、本研究を遂行するに至った。本研究の結果は、効果的な抗癌剤治療の開発に繋がる可能性がある。
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| 研究実績の概要 |
本年度は、日本人由来のヒト扁平上皮癌細胞株 RERF-LC-AIに対して、ドセタキセルおよびペメトレキセドを添加培養した時の、RNA修飾酵素の発現レベルをqPCRで解析した。
RERF-LC-AIにドセタキセルおよびペメトレキセドを100ｎMの濃度でそれぞれ添加して、48時間培養し、細胞からtotal RNAを抽出し、代表的な12種類のRNA修飾酵素の遺伝子発現レベル(AHCY、ALKBH5、FTO、HENMT1、HNRNPC、NSUN2、PNP、RNMT、TRMT6、TRMT61A、YTHDF2、METTL3) をqPCRで解析した。
ドセタキセルの添加では、12種類の遺伝子のうちAHCY、FTO、TRMT61A、YTHDF2の4種類の遺伝子の発現がコントロールに比べ10倍以上上昇した。ペメトレキセドの添加では12種類の遺伝子のうちAHCY、FTO、HENMT1、HNRNPCの4種類の遺伝子の発現がコントロールに比べ10倍以上上昇した。
発現が上昇した4種類の遺伝子（AHCY、FTO,YTHDF2、TRMT61A）を個別にノックダウンする為に、遺伝子の標的配列をin silico解析から、個々の遺伝子に対して3種類ずつ選択し、shRNAウイルスベクターを作製した。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
ドセタキセルおよびペメトレキセドを添加培養した時に、共通して発現レベルが上昇するRNA修飾酵素を複数特定することが出来た為。
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| 今後の研究の推進方策 |
RERF-LC-AI細胞のAHCY、FTO、TRMT61A、YTHDF2を個別にノックダウンした細胞を作製し、ドセタキセルおよびペメトレキセドに対する抵抗性を確認する実験を行う。
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