研究課題/領域番号 |
21K09290
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研究種目 |
基盤研究(C)
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配分区分 | 基金 |
応募区分 | 一般 |
審査区分 |
小区分56020:整形外科学関連
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研究機関 | 医療法人徳洲会野崎徳洲会病院(附属研究所) |
研究代表者 |
由井 理洋 医療法人徳洲会野崎徳洲会病院(附属研究所), 研究所, 主任研究員 (20547757)
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研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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配分額 *注記 |
4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円)
2023年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2022年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2021年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
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キーワード | CRISPR活性化スクリーニング / 骨肉腫 / 肺転移 / RNA-seq解析 / 機械的シグナル伝達 |
研究開始時の研究の概要 |
本研究では、転移先臓器の腫瘍外環境の軟らかさという工学的性質と腫瘍増殖の関係性に焦点を当て、新規の治療標的分子を探索する。肺の軟らかく足場の乏しい環境での足場依存的増殖メカニズムから導き出された治療標的分子は、転移を特異的に抑える分子標的薬の開発など新規の治療法開発の足掛かりとなる。また、本研究の成果は、肺線維化抑制療法と組み合わせを検討することで、より効果的な肺転移抑制療法の礎となる。
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研究実績の概要 |
骨肉腫肺転移は、腫瘍細胞が原発巣から離脱し、血行性に肺組織に到着後、肺組織に侵入し生着・増殖することで成立する。本研究は、肺組織の軟らかさに着目して、工学的手法を用いて肺転移の初期段階である肺生着メカニズムを解明することを目指す。本年度は前年度から引き続き、軟らかい環境と硬い環境で培養した骨肉腫高肺転移株と低肺転移株のRNA-seq解析と解析結果の検証を進めている。候補因子は、米国NCI主導で行われたTARGET Osteosarcoma projectのデータを用いて、患者予後との相関を確認した。予後との相関が見られた因子として、複数のGTPase-activating proteinと複数のRibosomal proteinが確認された。現在、分子生物学的手法や動物実験によって肺転移への関与を検証することを計画している。さらに、前年度に引き続きCRISPR活性化スクリーニングのサンプル準備を進めている。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
2: おおむね順調に進展している
理由
CRISPR活性化スクリーニングのサンプル準備が遅れていたが、本年度はgRNAの骨肉腫細胞への導入は確認できた。さらに、移植後の肺組織から抽出した遺伝子をPCRで増幅し、gRNAライブラリーの増幅が確認できた。今年度前半には次世代シーケンサー解析を行うことができる状態である。RNA-seq解析からは、患者予後に相関する新規因子が複数見つかっている。
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今後の研究の推進方策 |
CRISPR活性化スクリーニングのサンプルを準備し、次世代シーケンサー解析を行う。解析結果とRNA-seq解析の比較検討を行う。予後との相関が見られたGTPase- activating proteinやRibosomal proteinの肺転移への影響を、分子生物学的手法や動物実験によって検証する。
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