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膜タンパク陽性エクソソームによる肉腫の超早期診断法の開発と、膜タンパクの機能解析

研究課題

研究課題/領域番号 21K09318
研究種目

基盤研究(C)

配分区分基金
応募区分一般
審査区分 小区分56020:整形外科学関連
研究機関福井大学

研究代表者

渡邉 裕美子  福井大学, 学術研究院医学系部門, 特別研究員 (50893830)

研究分担者 松峯 昭彦  福井大学, 学術研究院医学系部門, 教授 (00335118)
田中 太晶  福井大学, 学術研究院医学系部門, 講師 (00796245)
出淵 雄哉  福井大学, 学術研究院医学系部門, 特別研究員 (20795041)
研究期間 (年度) 2021-04-01 – 2025-03-31
研究課題ステータス 交付 (2023年度)
配分額 *注記
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2023年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2022年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2021年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
キーワードエクソソーム / 膜タンパクA / エクソソーム膜 / 膜タンパクA陽性エクソソーム / 肉腫 / リキッドバイオプシー / エクソソーム膜タンパク
研究開始時の研究の概要

近年、癌患者の末梢血中の “エクソソーム”と呼ばれる細胞外小胞の存在が注目されている。我々は、膜タンパクAが、肉腫細胞で特異的に発現することを見いだした。そして、膜タンパクAは肉腫細胞から分泌されるエクソソーム膜にも存在することを確認した。本研究では、肉腫再発・転移の早期発見を目指して、膜タンパクA陽性エクソソームを測定するためのイムノアッセイ法を確立するとともに、1細胞遺伝子発現解析などで膜タンパクAの機能解析を行い、膜タンパクAが肉腫の新規治療ターゲットとなる可能性を検討する。

研究実績の概要

マウス骨肉腫高肺転移株LM8とその親株であるDann骨肉腫細胞株(低肺転移株)の培養上清よりエクソソームをペレットダウン法で回収し、mass spectrometerを用いてプロテオーム解析を行い、さらに細胞株のcDNAマイクロアレイデーター、Pathway解析を参考にして10種類のタンパクを肺転移関連エクソソーム膜タンパクXsとして同定した。現在、分子量約64kDaの膜タンパクAを中心に解析を行っており、多くの肉腫細胞株や癌細胞株で高発現していることや、免疫組織学的染色により肉腫の80%で高発現していることを確認した。nativeな膜タンパクAを検出できる新規マウスモノクローナル抗体をDNA免疫法で作成、CD9/膜タンパクAエクソソームELISA kitを独自に構築することに成功した。肉腫患者35例と、コントロール群15例(良性腫瘍患者8例、非腫瘍性運動器疾患患者7例)の血清膜タンパクA陽性エクソソーム量を測定した。またCOVID-19との関連を見出し、患者84例に対しても血清膜タンパクA陽性エクソソーム量の測定を行った。肉腫別や患者背景による膜タンパクA陽性エクソームム量を統計解析し、イムノアッセイ法の確立を目指している。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

3: やや遅れている

理由

nativeな膜タンパクAを検出できる新規マウスモノクローナル抗体をDNA免疫法で作成、CD9/膜タンパクAエクソソームELISA kitを独自に構築することに成功した。肉腫患者や良性腫瘍患者は、生検時や手術時には必ず腫瘍組織と、血液を採取しており、比較検討するには十分な検体を保持している。肉腫、良性腫瘍に加え、非腫瘍性運動器疾患、健常者、COVID-19の血清も採取しサンプルを用意した。膜タンパクAエクソソーム量を測定するkitを作成し、上記のサンプルに対して測定を行った。現在、測定結果を解析中である。解析結果をもとに、イムノアッセイ法を確立することができると考えている。

今後の研究の推進方策

肉腫患者、良性腫瘍患者、非腫瘍運動器疾患の腫瘍組織、血清を引き続き収集し、CD9/膜タンパクAエクソソームELISA kitで測定し、解析する母数を増やしていく。膜タンパクAの生物学的機能を解析をすすめる。血清膜タンパクA陽性エクソソームが分泌されていた患者の肉腫の種類や、腫瘍組織での染色性、患者背景などを合わせて統計解析をすすめる。膜タンパクAの強制発現や、shRNAでのノックダウンによる造腫瘍性・転移能の変化などをin vitro, in vivoで観察し、肉腫細胞における膜タンパクAの機能解析を行っていく。

報告書

(3件)
  • 2023 実施状況報告書
  • 2022 実施状況報告書
  • 2021 実施状況報告書

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公開日: 2021-04-28   更新日: 2024-12-25  

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