| 研究課題/領域番号 |
21K09779
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分56070:形成外科学関連
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| 研究機関 | 東京医科大学 |
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研究代表者 |
村上 史浩 東京医科大学, 医学部, 客員研究員 (40866662)
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| 研究分担者 |
善本 隆之 東京医科大学, 医学部, 教授 (80202406)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2023年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2022年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2021年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
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| キーワード | 乳歯歯髄幹細胞 / 不死化 / 細胞培養上清 / 褥瘡モデルマウス / 歯髄幹細胞 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
間葉系幹細胞の培養上清を用いた治療応用は、HLAを考慮する必要がなく、安全性も高いため注目されているが、その中の各種液性因子の濃度が十分でない場合や安定性や再現性の問題が指摘されている。そこで、応募者らは、ヒト乳歯由来歯髄幹細胞に不死化遺伝子を導入し、安定的に高い増殖性を示す不死化歯髄幹細胞を作製し、この細胞は、プライマリー細胞に比べ、より多くのサイトカインを安定的に産生することを見いだした。そこで、本研究では、この不死化歯髄幹細胞培養上清の基礎的解析と褥瘡モデルマウスを用いた治療応用の可能性、さらに、その分子機序として血管障害の軽減や活性酸素種産生抑制などの効果について明らかにする。
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| 研究実績の概要 |
2023年度は、不死化したヒト乳歯由来歯髄幹細胞の培養上清（SHED-CM）投与による虚血再灌流障害による発症する褥瘡の潰瘍形成抑制効果における肝細胞増殖因子（HGF）と血管内皮細胞増殖因子（VEGF）の関与とその作用機序について、in vitroの細胞培養系を用いて検討した。
① SHED-CM中のROS産生の抑制効果とVEGFおよびHGFの関与の検討：マウス線維芽細胞株NIH3T3を低酸素条件下（1%酸素）1%FBS含有培地でSHED-CMの有無で48時間培養後、通常の酸素下（21%酸素）で6時間培養し、細胞内の活性酸素種（ROS）の産生増強をDCFDA Cellular ROS Detection Assay Kitで測定した。その結果、SHED-CMにより、ROS産生が抑制され、SHED-CMよりHGFおよびVEGFに対する特異的抗体を用いてそれぞれのサイトカインを免疫除去すると、コントロール抗体処理したSHED-CMに比べ、そのROS産生抑制効果がキャンセルされた。
②SHED-CMの血管新生増強効果とVEGFおよびHGFの関与の検討：ヒト臍帯血由来血管内皮細胞（HUVEC）を用いた管腔形成アッセイにより、SHED-CMの血管新生の増強効果を調べた。その結果、SHED-CMにより血管新生増強効果が見られ、上述と同様に特異的抗体を用いてHGFおよびVEGFを免疫除去したSHED-CMは、コントロール抗体処理したSHED-CMに比べ、その血管新生増強効果がキャンセルされた。
以上の結果は、SHED-CMを投与した褥瘡モデルマウスでの酸化ストレスマーカー8-OHdG（8-hydroxy-2’-deoxyguanosine）や血管内皮細胞のマーカーCD31に対する抗体を用いた免疫組織化学的解析の結果と一致した。
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