研究課題/領域番号 |
21K09840
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研究種目 |
基盤研究(C)
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配分区分 | 基金 |
応募区分 | 一般 |
審査区分 |
小区分57020:病態系口腔科学関連
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研究機関 | 東京工業大学 |
研究代表者 |
越川 直彦 東京工業大学, 生命理工学院, 教授 (70334282)
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研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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配分額 *注記 |
4,030千円 (直接経費: 3,100千円、間接経費: 930千円)
2023年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円)
2022年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2021年度: 780千円 (直接経費: 600千円、間接経費: 180千円)
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キーワード | ラミニン / 口腔癌 / 浸潤・転移 / ラミニン融合遺伝子 / 細胞外マトリックス / 融合遺伝子 / 扁平上皮がん細胞 |
研究開始時の研究の概要 |
扁平上皮癌細胞は、上皮間葉転換を起こした癌細胞による浸潤様式と異なり、癌細胞塊が上皮から引きちぎれるように間質浸潤(集団浸潤)を起こす。先行研究から、上皮内癌細胞の過増殖、運動亢進に基底膜の形成、構造の変異が関与する可能性が示唆されている。先行研究において、γ2鎖遺伝子が染色体転座により核内受容体遺伝子と融合 した新たなγ2融合遺伝子として種々の癌腫で発現することを見出している。γ2融合遺伝子産物(γ2融合分子)は、その構造欠損から基底膜のラミニン332を形成できない。本研究では、上皮内癌で発現γ2融合分子が、細胞増殖、運動の亢進と基底膜形成の抑制により集団浸潤の発症に寄与することを示す。
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研究実績の概要 |
ラミニン融合遺伝子のコンディショナルトランスジェニック(cTg)マウスの作製の作製が完了し、今後の動物実験に必要なマウス数の準備を進めるとともに、アデノ随伴初ウイルスによるCre-loxpを異所的に発現させるための実験系の構築を行った。本年度、Cre-loxp-GFPを発現させるためのアドレの随伴ウイルス(AAV)が完成し、その感染実験を野生型マウス口腔内に投与し、AAV感染をGFPの発現での経時的に検証し、投与後7日後にはAAV感染によるGFPの蛍光が舌上皮、食道上皮、肺胞上皮等で確認された。現在、小数のTgマウスにCre-loxp-GFP-AAVを投与し、10、20週後に当該組織のH&E染色による上皮組織の変化を調べる予定である。 また、Tgマウスから初代細胞の上皮細胞を単離して、in vitroにおけるラミニン融合遺伝子の発現が上皮組織の形態、機能に及ぼす影響を検討しているが、上皮組織由来のケラチノサイトの初代培養が成功していないため、マウス胎児由来の線維芽細胞を不死化したものを用いた解析を進めている。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
Tgマウス個体が想定した以上に増えないことが判明し、予定した実験に用いるマウス個体数を確保するために時間がかかり、AAVによる感染実験(有意差を得るための実験)の開始がおくれている。
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今後の研究の推進方策 |
Tgマウスの個体数が増えにくいことが判明したので、マウスを増やすことに注力し、実験結果に有意差を得られるマウス個体数を確保した後、AAVによる実験を複数回行い、上皮組織に及ぼす当該融合遺伝子の影響を病理的に検討する。 また、初代細胞によるin vitro解析については、当初の上皮細胞から線維芽細胞を用いた解析を行う予定である。線維芽細胞はSV40で不死化させた後、がん浸潤・転移に重要な役割を担う、接着、運動、分解について検証してゆく。
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