| 研究課題/領域番号 |
21K12238
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| 研究種目 |
基盤研究(C)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 応募区分 | 一般 |
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| 審査区分 |
小区分63020:放射線影響関連
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| 研究機関 | 名古屋大学 |
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研究代表者 |
金尾 梨絵 名古屋大学, 環境医学研究所, 助教 (30542287)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
4,030千円 (直接経費: 3,100千円、間接経費: 930千円)
2023年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2022年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2021年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
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| キーワード | DNA損傷トレランス / イルジンS / 損傷乗り越えDNA合成 / DNA損傷 / ユビキチン化 / PCNA / DNA修復 / 損傷乗り越え複製 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
細胞が増殖するためには細胞分裂に先立ち、ゲノムDNAをコピーするDNA複製が必要であるが、放射線、紫外線、化学物質などにより生じたDNA上の損傷はDNA複製の妨げとなる。細胞にはDNA損傷が生じても複製を継続するためのDNA損傷トレランスと呼ばれるメカニズムが備わっているが、ヒト細胞において、その全容はまだ明らかになっていない。本研究はヒト細胞のDNA損傷トレランスのメカニズムを明らかにしようとするものである。
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| 研究実績の概要 |
DNA損傷はDNA複製の進行を阻害し、ゲノム不安定化の要因となるため、細胞にはDNA複製阻害を解消するDNA損傷トレランス機構が備わっている。DNA損傷トレランスには複数の経路があり、DNA複製に必須のスライディングクランプであるPCNAのユビキチン化が制御機構に重要であることが示唆されている。DNA損傷トレランスの経路のうち、損傷乗り越えDNA合成(TLS)は最も解析が進んでおり、損傷の種類に応じたTLSポリメラーゼが損傷部分のDNA合成を行う。一方、ヒト細胞ではTLS以外の経路のメカニズムは不明な点が多い。本研究ではDNA損傷剤としてDNA付加体を作り、DNA複製を阻害するイルジンSを用いている。我々はイルジンSを用いた解析により、ユビキチンE3リガーゼであるRFWD3がヒト細胞でTLSとは独立してPCNAのユビキチン化に依存したDNA損傷トレランスに関与することを見出している。
本研究ではRFWD3の関与するPCNAのユビキチン化に依存したDNA損傷トレランスの解析を行った。RFWD3のユビキチンリガーゼ活性、及びクロマチンへの局在、複製因子のRPAとの相互作用がDNA損傷トレランスに重要であることを示した。また、RFWD3が紫外線損傷に対してもPCNAのユビキチン化に依存したDNA損傷トレランスに重要であることを示した。紫外線損傷に対しても、イルジンS損傷と同様にTLSとは独立して働いていると考えられた。さらに本年度はRFWD3発現抑制細胞のイルジンS、紫外線誘発変異実験を行い、RFWD3の発現抑制が変異頻度に影響しないことを見出した。さらにRFWD3と相互作用する因子の解析を行い、新たにRFWD3と細胞内で相互作用する因子を見出した。
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