| 研究課題/領域番号 |
21K16687
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| 研究種目 |
若手研究
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| 配分区分 | 基金 |
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| 審査区分 |
小区分56020:整形外科学関連
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| 研究機関 | 広島大学 |
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研究代表者 |
原田 洋平 広島大学, 病院(医), 助教 (40829800)
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| 研究期間 (年度) |
2021-04-01 – 2025-03-31
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| 研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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| 配分額 *注記 |
4,680千円 (直接経費: 3,600千円、間接経費: 1,080千円)
2024年度: 130千円 (直接経費: 100千円、間接経費: 30千円)
2023年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2022年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2021年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
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| キーワード | 凍結肩 / 線維化 / microRNA 26a / microRNA / 五十肩 |
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| 研究開始時の研究の概要 |
本研究では凍結肩における関節包の線維化に関わるmiRNAの解明と新たな治療法の開発を行う。まず凍結肩患者のサンプルを用いて、凍結肩に関わるmiRNAの探索を行う。次にWTマウスを用いて凍結肩モデルを作製し、miRNAの病態への関わりの解明を行う。また特定のmiRNAノックアウトマウスにおいても凍結肩モデルを作製し、miRNAの影響を評価する。最後にmiRNAを用いた治療法の開発として、特定したmiRNAを過剰に含んだMSC由来エクソソームを用いて、in vitroおよびin vivoにおける関節包の線維化抑制効果を検討する。
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| 研究実績の概要 |
10週齢雄C57BL6/Jマウス（野生型）とmiR-26a全身ノックアウトマウス（miR-26a KO）を用い、凍結肩モデルを作成した。モデル作成後1週を炎症期、6週を拘縮期、6週後に糸の除去をして2週経過したものを回復期モデルとし、他動肩関節可動域、組織学的検討（H&E染色、Masson Trichrome染色およびサフラニンO染色）を行った。さらに各週で肩関節包をそれぞれ採取し、滑膜炎や線維化に影響する各遺伝子の発現（IL-6、TNF-α、TGF-β、CTGF、タイプI・IIIコラーゲン、HGF）をリアルタイムRT-PCR法で評価した。他動肩関節可動域はmiR-26a KOが各週で有意に大きかった。組織学的検討ではH&E染色において、miR-26a KOの方が炎症期モデルで炎症細胞の浸潤が少なく、拘縮期モデルで関節包が薄かった。Masson Trichrome染色における線維化の程度は、miR-26a KOの方が拘縮期モデルで少なかった。さらに、サフラニンO染色にて、野生型は拘縮期モデルで上腕骨頭下方の軟骨様形成を認めたが、miR-26a KO では全く認めなかった。滑膜炎や線維化関連遺伝子の発現も、miR-26a KOの方が炎症期と拘縮期モデルで低下していた。以上のことより、miR-26a KOは、野生型と比較して、凍結肩モデルにおいて他動肩関節可動域、組織学的および遺伝子発現解析において一貫して線維化が抑制されていた。
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| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
3: やや遅れている
理由
miR-26aノックアウトマウスの数に限りがあり、モデル作製に時間を要しているため。
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| 今後の研究の推進方策 |
今後はmiR-26aノックアウトマウス凍結肩モデルマウスの肩関節包細胞を用いて、miR-26aを投与することで線維化関連サイトカインが増幅されるかなど、in vitroの実験を行い、miR-26aの線維化に関わる機序について解明を行う予定である。
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