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新しい金属酵素研究へのテラヘルツ電子スピン共鳴法の応用

研究課題

研究課題/領域番号 21K18937
研究種目

挑戦的研究(萌芽)

配分区分基金
審査区分 中区分32:物理化学、機能物性化学およびその関連分野
研究機関佐賀大学

研究代表者

堀谷 正樹  佐賀大学, 農学部, 准教授 (80532134)

研究分担者 大久保 晋  神戸大学, 分子フォトサイエンス研究センター, 准教授 (80283901)
原 茂生  神戸大学, 研究基盤センター, 特命技術員 (60520012)
研究期間 (年度) 2021-07-09 – 2024-03-31
研究課題ステータス 完了 (2023年度)
配分額 *注記
6,370千円 (直接経費: 4,900千円、間接経費: 1,470千円)
2023年度: 2,210千円 (直接経費: 1,700千円、間接経費: 510千円)
2022年度: 2,210千円 (直接経費: 1,700千円、間接経費: 510千円)
2021年度: 1,950千円 (直接経費: 1,500千円、間接経費: 450千円)
キーワード金属酵素 / 電子常磁性共鳴 / テラヘルツ / ヘムタンパク質 / 高周波数強磁場ESR / 整数スピン / 金属タンパク質 / 電子スピン共鳴法 / 整数スピン系 / 高周波数・強磁場ESR / ジャイロトロン / 強磁場 / テラヘルツESR / ヘム酵素
研究開始時の研究の概要

電子スピン共鳴法(ESR)はこれまで数多くの金属酵素研究に応用されてきた。しかし、市販の装置では測定対象が半整数スピン系の時のみに限定される。このデメリットを解消するため、強磁場・高周波数のESR装置の開発が行われているが、低感度装置であるため希薄スピン濃度系である金属酵素への応用研究はほとんどなされていない。本研究では全ての金属酵素が測定対象になる高感度テラヘルツESR装置を開発し、長年多くの研究者によって注目され続けているヘム酵素の反応多様性について、電子状態・配位構造の両面から解き明かす。さらに、ESR法があらゆる生体分子に適用できるようにし、生体分子ESRの研究拠点になることを目指す。

研究成果の概要

金属酵素は金属イオンの電子状態を上手く操作することで機能発現していることが知られているが、市販のESR装置では半整数スピンをもつもののみが研究対象であった。そこで、すべての金属酵素を測定対象とすべく高周波数・強磁場ESR装置の開発および金属酵素のESR信号検出に取り組んだ。
これまでに開発してきた高周波数ESR装置では感度不足なため金属酵素のようなスピン濃度希薄系では信号が観測できないことが分かった。そこで従来より1,000~1,000,000倍高出力なジャイロトロン高周波数発振器を利用したESR測定に取り組み、世界で初めて金属タンパク質由来のジャイロトロンテラヘルツESR信号の観測に成功した。

研究成果の学術的意義や社会的意義

高検出感度である熱検出器および高出力発振器であるジャイロトロンを利用することで、これまで不可能だと考えられていた金属タンパク質の高周波数・強磁場電子スピン共鳴(ESR)信号の観測に成功した。これにより市販の装置で信号検出できる金属タンパク質以外の試料や反応中間体も研究対象となることが明らかになった。また、ジャイロトロンを利用した最大出力テラヘルツ光を利用することで、市販の装置ではESR信号を飽和させることのできない金属タンパク質も飽和させられることが明らかになった。この現象は通常のESRより発展的な測定法である電子-核二重共鳴法(ENDOR)への応用が可能であることを示している。

報告書

(4件)
  • 2023 実績報告書   研究成果報告書 ( PDF )
  • 2022 実施状況報告書
  • 2021 実施状況報告書
  • 研究成果

    (42件)

すべて 2024 2023 2022 2021 その他

すべて 雑誌論文 (7件) (うち国際共著 1件、 査読あり 7件、 オープンアクセス 4件) 学会発表 (32件) (うち国際学会 4件、 招待講演 6件) 図書 (1件) 備考 (2件)

  • [雑誌論文] Identification of Genes Responsible for the Synthesis of Glycitein Isoflavones in Soybean Seeds2024

    • 著者名/発表者名
      Horitani Masaki、Yamada Risa、Taroura Kanami、Maeda Akari、Anai Toyoaki、Watanabe Satoshi
    • 雑誌名

      Plants

      巻: 13 号: 2 ページ: 156-156

    • DOI

      10.3390/plants13020156

    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Intramolecular electron transfer from biopterin to FeII-O2 complex in nitric oxide synthases occurs at very different rates between bacterial and mammalian enzymes: Direct observation of a catalytically active intermediate2023

    • 著者名/発表者名
      Kobayashi Kazuo、Ito Yuko Tsutsui、Kasu Yuri、Horitani Masaki、Kozawa Takahiro
    • 雑誌名

      Journal of Inorganic Biochemistry

      巻: 238 ページ: 112035-112035

    • DOI

      10.1016/j.jinorgbio.2022.112035

    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Trapping of a Mononitrosyl Nonheme Intermediate of Nitric Oxide Reductase by Cryo-Photolysis of Caged Nitric Oxide2023

    • 著者名/発表者名
      Takeda Hanae、Shimba Kanji、Horitani Masaki、Kimura Tetsunari、Nomura Takashi、Kubo Minoru、Shiro Yoshitsugu、Tosha Takehiko
    • 雑誌名

      The Journal of Physical Chemistry B

      巻: 127 号: 4 ページ: 846-854

    • DOI

      10.1021/acs.jpcb.2c05852

    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Quick and Spontaneous Transformation between [3Fe_4S] and [4Fe_4S] Iron_Sulfur Clusters in the tRNA-Thiolation Enzyme TtuA.2023

    • 著者名/発表者名
      Ishizaka M, Chen M, Narai S, Tanaka Y, Ose T, Horitani M, Yao M.
    • 雑誌名

      International Journal of Molecular Sciences

      巻: 24 号: 1 ページ: 833-833

    • DOI

      10.3390/ijms24010833

    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
  • [雑誌論文] Heme protein identified from scaly-foot gastropod can synthesize pyrite (FeS<sub>2</sub>) nanoparticles2023

    • 著者名/発表者名
      Yamashita Tatsuya、Matsuda Hiroki、Koizumi Kyohei、Thirumalaisamy Logu、Kim Myeongok、Negishi Lumi、Kurumizaka Hitoshi、Tominaga Yoriko、Takagi Yoshihiro、Takai Ken、Okumura Taiga、Katayama Hidekazu、Horitani Masaki、Ahsan Nazmul、Okada Yoshitaka、Nagata Koji、Suzuki Yohey、Suzuki Michio
    • 雑誌名

      Acta Biomaterialia

      巻: 162 ページ: 110

    • DOI

      10.1016/j.actbio.2023.03.005

    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] The molecular mechanism of phytosphingosine binding to FFAR4/GPR120 differs from that of other fatty acids2021

    • 著者名/発表者名
      Nagasawa Tomotaka、Horitani Masaki、Kawaguchi Shin‐ichi、Higashiyama Shigeki、Hama Yoichiro、Mitsutake Susumu
    • 雑誌名

      FEBS Open Bio

      巻: 11 号: 11 ページ: 3081-3089

    • DOI

      10.1002/2211-5463.13301

    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Biochemical properties of CumA multicopper oxidase from plant pathogen, <i>Pseudomonas syringae</i>2021

    • 著者名/発表者名
      Ishida Konan、Tsukamoto Yuya、Horitani Masaki、Ogawa Tomohisa、Tanaka Yoshikazu
    • 雑誌名

      Bioscience, Biotechnology, and Biochemistry

      巻: 85 号: 9 ページ: 1995-2002

    • DOI

      10.1093/bbb/zbab123

    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [学会発表] ミモシン合成酵素の2機能性獲得機構の解明~1残基置換により生まれた新たな基質経路~2023

    • 著者名/発表者名
      辻 さやか, 大貝 茂樹, 福田 雅一, 屋 宏典, 杉本 宏,堀谷 正樹
    • 学会等名
      第23回日本蛋白質科学会年会
    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
  • [学会発表] X線・電子常磁性共鳴法で観る複核Mn中心金属酵素の構造柔軟性と活性相関2023

    • 著者名/発表者名
      嘉数 百合,坂本 貫太朗, 杉本 宏,堀谷 正樹
    • 学会等名
      第23回日本蛋白質科学会年会
    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
  • [学会発表] 高速混合凍結-EPR法で観る金属酵素活性中心構造変化と酵素活性の相関~低温適応複核Mn2+酵素~2023

    • 著者名/発表者名
      堀谷 正樹
    • 学会等名
      第26回ESRフォーラム研究会2023京都
    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
    • 招待講演
  • [学会発表] 酵素は熱安定性を下げずに低温適応できるか?~X線結晶構造解析・EPR法で観る南極産好冷細菌由来金属酵素~2023

    • 著者名/発表者名
      堀谷 正樹,嘉数 百合, 杉本 宏
    • 学会等名
      極限環境生物学会第24回年会
    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
  • [学会発表] ESRで何が見える?~立体構造解析への羨望とその先へ~2023

    • 著者名/発表者名
      堀谷 正樹
    • 学会等名
      第35回生物無機化学夏季セミナー
    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
    • 招待講演
  • [学会発表] The combination of EPR spectroscopy and X-ray crystallography revealed that the active site rearrangement of the di-metal center by substrate binding is temperature dependent2023

    • 著者名/発表者名
      Masaki Horitani
    • 学会等名
      2023 International Joint Meeting of the 23rd International Conference on Cytochrome P450 and the 38th Annual Meeting of the Japanese Society for the Study of Xenobiotics (2023 ICCP450/JSSX)
    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
    • 国際学会 / 招待講演
  • [学会発表] ヘム駆動型フェロミクスプローブの反応機構解明2023

    • 著者名/発表者名
      黒岩 もね, 垣内 亮, 平山 祐,堀谷 正樹
    • 学会等名
      第62回電子スピンサイエンス学会年会(SEST2023)
    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
  • [学会発表] 急速凍結-電子常磁性共鳴(EPR)法を用いた金属酵素活性中心における構造変化の温度依存性2023

    • 著者名/発表者名
      嘉数 百合,堀谷 正樹
    • 学会等名
      第62回電子スピンサイエンス学会年会(SEST2023)
    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
  • [学会発表] Electron Spin Resonance Spectroscopy Reveals the Reaction Mechanism of a Heme-Driven Ferromics Probe with Heme2023

    • 著者名/発表者名
      Mone Kuroiwa, Ryo Kakiuchi, Tasuku Hirayama,Masaki Horitani
    • 学会等名
      日本農芸化学会西日本支部第6回学生フォーラム(JSBBA WEST 6th Studendt Forum)
    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
  • [学会発表] How the Proteins Work - Development of a New Methodology for the Capturing of Short-Lived Intermediates ?2023

    • 著者名/発表者名
      Yuna Koga,Masaki Horitani
    • 学会等名
      日本農芸化学会西日本支部第6回学生フォーラム(JSBBA WEST 6th Studendt Forum)
    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
  • [学会発表] Temperature dependence of structural changes in active center of Inorganic Pyrophosphatase using electron paramagnetic resonance (EPR) with rapid freeze quench method2023

    • 著者名/発表者名
      Yuri Kasu,Masaki Horitani
    • 学会等名
      2nd Japan-India Science & Technology Seminar
    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
  • [学会発表] Electron Spin Resonance Spectroscopy Reveals the Reaction Mechanism of a Heme-Driven Ferromics Probe with Heme2023

    • 著者名/発表者名
      Mone Kuroiwa, Ryo Kakiuchi, Tasuku Hirayama,Masaki Horitani
    • 学会等名
      2nd Japan-India Science & Technology Seminar
    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
  • [学会発表] Elucidation of the mechanism of high activity and high thermostability of glucokinase from Antarctic bacteria using by X-ray crystallography2023

    • 著者名/発表者名
      Marina Takado,Kazuki Fujii,Masaki Horitani
    • 学会等名
      2nd Japan-India Science & Technology Seminar
    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
  • [学会発表] Biochemical and Spectroscopic Studies Reveal that Inorganic Pyrophosphatase from Piezophilic Bacterium has Cold-Adaptation and High-Thermal Stability2023

    • 著者名/発表者名
      Ren Sugawara,Yurika Mizoguchi,Masaki Horitani
    • 学会等名
      2nd Japan-India Science & Technology Seminar
    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
  • [学会発表] 電子スピン共鳴法で”観る”金属酵素活性部位の温度による微細構造変化2022

    • 著者名/発表者名
      嘉数 百合, 堀谷 正樹
    • 学会等名
      第25回ESRフォーラム研究会(2022)
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] スピンラベル-ESR法を利用した酵素の構造柔軟性の実測2022

    • 著者名/発表者名
      矢垰 紅音, 浅香 里緒, 渡邉 啓一, 堀谷 正樹
    • 学会等名
      第25回ESRフォーラム研究会(2022)
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] 南極海由来金属酵素の酵素反応・低温適応機構2022

    • 著者名/発表者名
      堀谷 正樹
    • 学会等名
      日本農芸化学会2022年度西日本支部大会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
    • 招待講演
  • [学会発表] 先端X線回折法によるグルコキナーゼの動的構造-機能相関の解明2022

    • 著者名/発表者名
      藤井 和輝, 奥村 英夫、馬場 清喜、杉本 宏, 堀谷 正樹
    • 学会等名
      日本農芸化学会2022年度西日本支部大会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] 反応中間体捕捉から解き明かすミモシン合成酵素の2機能性獲得機構2022

    • 著者名/発表者名
      辻 さやか, 大貝 茂希、福田 雅一、屋 宏典、杉本 宏, 堀谷 正樹
    • 学会等名
      日本農芸化学会2022年度西日本支部大会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] EPR Spectroscopy Reveals Active Site Rearrangements of Di-Mn Center in Inorganic Pyrophosphatase2022

    • 著者名/発表者名
      Masaki Horitani
    • 学会等名
      錯体化学会第72回討論会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
    • 招待講演
  • [学会発表] EPR Spectroscopy Reveals the Differences of Active Site Structure for Di-Mn Enzymes from Mesophillic and Psychrophillic Bacteria2022

    • 著者名/発表者名
      Masaki Horitani
    • 学会等名
      第60回生物物理学会年会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] X-ray Crystallography and Spin-Labeling ESR Reveal Cold Adaptation and High Thermal Stability Mechanism of Cold-Adapted Glucokinase2022

    • 著者名/発表者名
      Akane Yato, Rio Asaka, Hiroshi Sugimoto, Keiichi Watanabe, Masaki Horitani
    • 学会等名
      第60回生物物理学会年会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] EPR Spectroscopy and X-ray Crystallography Revealed Rearrangements of Di-Mn Active Site by Substrate Binding in Inorganic Pyrophosphatase2022

    • 著者名/発表者名
      Masaki Horitani
    • 学会等名
      10th Asian Biological Inorganic Chemistry Conference
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
    • 国際学会 / 招待講演
  • [学会発表] スピンラベル-ESR法を利用した酵素の構造柔軟性の実測2022

    • 著者名/発表者名
      矢垰紅音、浅香里緒、渡邉啓一、堀谷正樹
    • 学会等名
      第61回電子スピンサイエンス学会年会(SEST2022)
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] ヘムトランスポーターの輸送機構解明へ向けた新たな反応中間体捕捉法の開発2022

    • 著者名/発表者名
      古賀優菜、堀谷正樹
    • 学会等名
      第61回電子スピンサイエンス学会年会(SEST2022)
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] 急速凍結-電子常磁性共鳴(EPR)法を用いた金属酵素活性中心における構造変化の温度依存性2022

    • 著者名/発表者名
      嘉数百合、堀谷正樹
    • 学会等名
      第61回電子スピンサイエンス学会年会(SEST2022)
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] ヘム駆動型フェロミクスプローブの反応機構解明2022

    • 著者名/発表者名
      黒岩もね、垣内亮、平山祐、堀谷正樹
    • 学会等名
      第61回電子スピンサイエンス学会年会(SEST2022)
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] X-ray Crystallography and Site-Directed Spin-Labeling ESR Reveal Cold Adaptation and High Thermal Stability Mechanisms of Cold-Adapted Glucokinase2021

    • 著者名/発表者名
      Akane Yato, Rio Asaka, Hiroshi Sugimoto, Keiichi Watanabe, Masaki Horitani
    • 学会等名
      22nd International Society of Magnetic Resonance
    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] Analysis on Cold Adaptation Mechanism of Metalloenzyme by X-ray Crystallography and EPR Spectroscopy Combined with Rapid Freeze-Quench2021

    • 著者名/発表者名
      Masaki Horitani, Yuri Kasu, Hiroshi Sugimoto, Keiichi Watanabe
    • 学会等名
      22nd International Society of Magnetic Resonance
    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] 急速凍結EPR法およびX線結晶構造解析法による好冷細菌由来無機ピロフォスファターゼの低温適応機構の解明2021

    • 著者名/発表者名
      堀谷 正樹, 杉本 宏, 渡邉 啓一
    • 学会等名
      第47回生体分子討論会
    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書
  • [学会発表] X線結晶構造解析法による低温適応無機ピロフォスファターゼの触媒活性機構の解明2021

    • 著者名/発表者名
      坂本 貫太朗, 杉本 宏, 渡邉 啓一, 堀谷 正樹
    • 学会等名
      第47回生体分子討論会
    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書
  • [学会発表] 動的・静的構造解析による南極産好冷細菌由来グルコキナーゼの低温適応・高熱安定性機構の解明2021

    • 著者名/発表者名
      矢垰 紅音, 浅香 里緒, 杉本 宏, 渡邉 啓一, 堀谷 正樹
    • 学会等名
      第47回生体分子討論会
    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書
  • [図書] ヘムタンパク質の科学、第5章 測定解析技術・第3節 "磁気共鳴EPRでヘムタンパク質の何をみるか?―活性中心の電子状態とミクロ分子環境―2022

    • 著者名/発表者名
      堀谷 正樹、堀 洋
    • 総ページ数
      472
    • 出版者
      エヌ・ティー・エス 監修:城 宜嗣、青野 重利、齋藤 正男
    • ISBN
      9784860437787
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [備考] 佐賀大学農学部生命機能科学科分子生命科学分野堀谷研究室

    • URL

      http://horitani.ag.saga-u.ac.jp/horitanilab/research.html

    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
  • [備考] 佐賀大学農学部生命機能科学科分子生命科学分野堀谷研究室

    • URL

      http://horitani.ag.saga-u.ac.jp/horitanilab/index.html

    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書 2021 実施状況報告書

URL: 

公開日: 2021-07-13   更新日: 2025-01-30  

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