研究課題/領域番号 |
21K19431
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研究種目 |
挑戦的研究(萌芽)
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配分区分 | 基金 |
審査区分 |
中区分51:ブレインサイエンスおよびその関連分野
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研究機関 | 大阪大学 |
研究代表者 |
八木 健 大阪大学, 大学院生命機能研究科, 教授 (10241241)
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研究期間 (年度) |
2021-07-09 – 2024-03-31
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研究課題ステータス |
交付 (2022年度)
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配分額 *注記 |
6,500千円 (直接経費: 5,000千円、間接経費: 1,500千円)
2022年度: 2,600千円 (直接経費: 2,000千円、間接経費: 600千円)
2021年度: 3,900千円 (直接経費: 3,000千円、間接経費: 900千円)
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キーワード | 脳幹網様体 / 巨大神経網様核細胞 / クラスター型プロトカドヘリン / 意識 / 覚醒 / 光遺伝学 / 両作動性神経細胞 / マルチモーダル / 網様体 / ニューロン / 神経回路 |
研究開始時の研究の概要 |
本研究の目的は、脳の統合的機能を制御する脳幹網様体の巨大神経網様核(NRG)細胞を分子生理学的に明らかにし、神経活動を光操作する方法を開発することにより、マルチモーダルな感覚入力や内的環境、運動制御、覚醒・睡眠を統合し、意識を支えるNRG細胞の分子神経生物学的基盤を明らかにすることにある。意識が脳幹網様体により支えられていることはかなり以前から知られているものの、これまでに分子神経生物学的アプローチがほとんど進められていなかった。本研究は、個体レベルでの意識を人工的に操作するこれまでに無い革新的技術の開発研究であり、意識を脳研究としてアプローチする為のブレイクスルーとなる意義ある研究である。
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研究実績の概要 |
脳幹網様体は身体の内部環境のホメオスタシス調節、外部環境からのマルチモーダルな感覚入力と運動制御、覚醒状態や意識を支える領域として知られ、複雑な神経ネットワークとなっている。特に、脳幹網様体の巨大神経網様核(NRG: nucleus reticular gigantocellularis)細胞は、1神経細胞が上行性と下行性に投射し、マルチモーダルな感覚刺激(匂い、視覚、聴覚、触覚、前庭、運動)に反応、運動パターンや意識・覚醒を制御していること、グルタミン酸作動性神経細胞やGABA作動性神経細胞だけでなく両グルタミン酸・GABA作動性神経細胞が存在すること、脳において最も早く分化する神経細胞であることも明らかとなっている。本研究の目的は、脳の統合的機能を制御する脳幹網様体のNRG細胞を分子生理学的に明らかにし、神経活動を光操作する方法を開発することにより、マルチモーダルな感覚入力や内的環境、運動制御、覚醒・睡眠を統合し、意識を支えるNRG細胞の分子神経生物学的基盤を明らかにすることである。本年度は、グルタミン酸作動性神経細胞でFLP発現するvGluT2-Flp、GABA作動性神経細胞でCRE発現するGad1-Creとfrt/flox組み換え依存的にTdTomamoが発現するAi65マウスを交配することにより両グルタミン酸・GABA作動性神経細胞(Glu/GABA神経細胞)でのみtdTomamo が発現するマウスの作製に成功し、Glu/GABA神経細胞と神経投射領域の分布を透明化した全脳において解析し、脳幹網様体に存在するGlu/GABA作動性n巨大神経網様核細胞の同定に成功した。また、化学遺伝学的手法により、視床下部乳頭上核(SuM)に存在するGlu/GABA神経細胞を活性化・不活性化させることに成功し、探索行動制御への関与を明らかにした。
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現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
1: 当初の計画以上に進展している
理由
本年度は、両グルタミン酸・GABA作動性神経細胞(Glu/GABA神経細胞)でtdTomamo が発現するマウスの作製に成功した。これにより、脳幹網様体に存在するGlu/GABA作動性n巨大神経網様核細胞の同定に成功した。さらに、化学遺伝学的手法により、視床下部乳頭上核(SuM)に存在するGlu/GABA神経細胞が探索行動制御への関与が明らかとなった。
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今後の研究の推進方策 |
今後は、両グルタミン酸・GABA作動性神経細胞(Glu/GABA神経細胞)でtdTomamo が発現するマウスを用いて、Glu/GABA神経細胞と神経投射領域の分布を透明化した全脳において3Dにより詳細に解析する。また、frt/flox組み換え依存的にチャネルロドプシン2(ChR2)が発現するアデノ随伴ウイルスを脳幹網様体NRG細胞に感染させ、Glu/GABA-NRG細胞の神経細胞と神経投射領域の分布を解析するとともに、青色光照射により神経活動誘発を行い、マウス個体における覚醒レベル、運動パターン制御へのGlu/GABA-NRG細胞の関与について解析を行うことにより、Glu/GABA-NRG細胞の神経回路網と生理学的意義を明らかにする。さらに、脳幹網様体に存在するNRG細胞をホールセルパッチクランプ法により生理学的特徴を解析し、細胞質を吸引してRamDA-seq法を用いてRNAシーケンスを行い、NRG細胞のシングルセルレベルでの生理学的特徴と遺伝子発現プロファイルを解析する。
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