| 研究課題/領域番号 |
21K19527
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| 研究種目 |
挑戦的研究(萌芽)
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| 配分区分 | 基金 |
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| 審査区分 |
中区分55:恒常性維持器官の外科学およびその関連分野
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| 研究機関 | 大阪大学 |
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研究代表者 |
宮川 周士 大阪大学, 微生物病研究所, 招へい研究員 (90273648)
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| 研究分担者 |
前田 晃 大阪大学, 大学院医学系研究科, 招へい教員 (00319708)
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| 研究期間 (年度) |
2021-07-09 – 2024-03-31
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| 研究課題ステータス |
完了 (2023年度)
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| 配分額 *注記 |
6,500千円 (直接経費: 5,000千円、間接経費: 1,500千円)
2023年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円)
2022年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円)
2021年度: 2,340千円 (直接経費: 1,800千円、間接経費: 540千円)
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| キーワード | CISPR/Cas3 / Knockout / GGTA1 / PERV-C / Xenotransplantation / PERV / CRISPR/Cas3 / ブタ線維芽細胞 / CMAH / Hanganutziu-Deicher抗原 / ブタ内在性レトロウイルス / 再生医療 / バイオ人工臓器 / ノックアウト / CRISPR |
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| 研究開始時の研究の概要 |
バイオ人工臓器（異種移植）の分野では、当初、相同組み替え法は困難を極めたが、新法によるknockout（KO）法が我々も含めブタでも成功している。しかし、CRISPR/Cas9法には特許の問題が絡んでおり、今回研究協力者の真下知士グループが開発したCRISPR/Cas3法を応用してKO-ブタの作出を進める。現時点でブタ細胞での有効性はまだ確立されていない。ブタの繊維芽細胞、等を使って、先ずはこのCas3法で既にCas9法でKO経験のあるブタGalTと4GalNT2のKOを比較しながら行う。次に、SLA ClassI,II、とPERV(内在性レトロウイルス)-CのKOの有効性の検証を行う。
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| 研究成果の概要 |
CPISPR/Cas3法をブタ細胞に適用するために、GGTA1とPERV-Cに対するKOを試みた。まずGGTA1のexon 9にtarget用plasmidsを用意し、ブタの線維芽細胞に遺伝子導入した。Gal-epitopeの発現をFACSにて分析、次にnested PCRを実行した。 さらに、各グループのPCR産物を大腸菌に形質転換させ、各コロニーをPCRチェックした。結果は294-754bpの欠失が証明された。
次に、PERV-Cに焦点を置き、Cas3法でKOを試みた。しかし、大腸菌のコロニーを解析するには至らなかった。結論、異種移植におけるCRISPR/Cas3法の効果及び特徴を確認した。
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| 研究成果の学術的意義や社会的意義 |
この研究で、異種移植分野の（ブタを使った）臓器開発での遺伝子のtargeting法で、一般に普及しているCRISPR/Cas9を使わずに、日本で開発されている新たな方法であるCRISPR/Cas3を使うことが可能になれば、特許の問題を気にせずに遺伝子編集が可能になる。これは単に異種移植分野だけでなく、他の医学・畜産、等の分野に大きく影響をもたらす。
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