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進化分子工学を駆使した新規高機能金属酵素の開発

研究課題

研究課題/領域番号 21K20535
研究種目

研究活動スタート支援

配分区分基金
審査区分 0501:物理化学、機能物性化学、有機化学、高分子、有機材料、生体分子化学およびその関連分野
研究機関大阪大学

研究代表者

加藤 俊介  大阪大学, 大学院工学研究科, 助教 (60909125)

研究期間 (年度) 2021-08-30 – 2024-03-31
研究課題ステータス 完了 (2023年度)
配分額 *注記
3,120千円 (直接経費: 2,400千円、間接経費: 720千円)
2022年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
2021年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円)
キーワード人工金属酵素 / 進化分子工学 / 指向性進化法 / C-H結合官能基化 / 生体触媒 / ヘムタンパク質 / 金属ポルフィリノイド / バイオハイブリッド触媒
研究開始時の研究の概要

本研究は、進化分子工学的手法を遷移金属錯体へと応用し、優れた触媒特性を発揮する新規高機能触媒を開発することを目的とする。具体的には、非天然の遷移金属錯体を補因子としてタンパク質に導入した「人工金属酵素」を構築し、「指向性進化法」を駆使した遺伝子工学的な改変を実施する。補因子として用いる遷移金属錯体の合成と、反応場として用いるタンパク質の発現は既に完了しており、補助事業期間内において今後、指向性進化法による活性中心のタンパク質反応場の最適化を行い、通常の小分子金属錯体では達成困難な高難度な物質変換を実現する人工金属酵素の開発をめざす。

研究成果の概要

本研究では、優れた触媒特性を発揮する新規高機能触媒を開発することを目的とし、非天然の遷移金属錯体をタンパク質に導入した人工金属酵素の構築と、指向性進化法を駆使した遺伝子工学的な改変を実施した。具体的には、ロジウム錯体、鉄コロール錯体、鉄ポルフィリン錯体を補因子とする人工金属酵素を構築し、指向性進化法による改変を実施した結果、C-H結合官能基化反応やニトリル合成反応に対して高い触媒活性を示す変異体の獲得に成功した。また、効率的な人工金属酵素の指向性進化を実現するために、新たなハイスループットスクリーニング法も確立している。以上のように、期間全体を通じて当初の予想を上回る大きな成果が得られた。

研究成果の学術的意義や社会的意義

本研究では、非天然の遷移金属錯体をタンパク質に導入した人工金属酵素の構築と、指向性進化法を駆使した遺伝子工学的な改変を実施し、優れた触媒特性を発揮する新規高機能触媒の開発に成功した。持続可能な社会の実現にむけ、酵素や微生物などを用いた物質生産技術(バイオプロダクション)に注目が集まる昨今において、本研究成果はバイオプロダクションの有用性を拡張し、その社会実装の一助になることが期待される。

報告書

(4件)
  • 2023 実績報告書   研究成果報告書 ( PDF )
  • 2022 実施状況報告書
  • 2021 実施状況報告書
  • 研究成果

    (32件)

すべて 2024 2023 2022 2021 その他

すべて 国際共同研究 (3件) 雑誌論文 (3件) (うち国際共著 1件、 査読あり 3件、 オープンアクセス 2件) 学会発表 (19件) (うち国際学会 6件、 招待講演 5件) 図書 (4件) 備考 (3件)

  • [国際共同研究] RWTH Aachen University/Bierefeld University(ドイツ)

    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
  • [国際共同研究] RWTH Aachen University(ドイツ)

    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [国際共同研究] RWTH Aachen University(ドイツ)

    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書
  • [雑誌論文] Chitin‐ and Streptavidin‐Mediated Affinity Purification Systems: A Screening Platform for Enzyme Discovery2023

    • 著者名/発表者名
      Kato Shunsuke、Takeuchi Koki、Iwaki Motonao、Miyazaki Kentaro、Honda Kohsuke、Hayashi Takashi
    • 雑誌名

      Angewandte Chemie International Edition

      巻: 62 号: 31

    • DOI

      10.1002/anie.202303764

    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Evolutionary Engineering of a Cp*Rh(III) Complex-Linked Artificial Metalloenzyme with a Chimeric β-Barrel Protein Scaffold2023

    • 著者名/発表者名
      Kato Shunsuke、Onoda Akira、Schwaneberg Ulrich、Hayashi Takashi
    • 雑誌名

      Journal of the American Chemical Society

      巻: in press 号: 15 ページ: 8285-8290

    • DOI

      10.1021/jacs.3c00581

    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
  • [雑誌論文] Engineering of hemoproteins2023

    • 著者名/発表者名
      Hayashi Takashi、Kato Shunsuke
    • 雑誌名

      Comprehensive Inorganic Chemistry III

      巻: 3 ページ: 215-230

    • DOI

      10.1016/b978-0-12-823144-9.00142-4

    • ISBN
      9780128231531
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [学会発表] キチン粉末を利用したタンパク質精製手法の開発: 非天然化学反応を指向した酵素探索への応用2024

    • 著者名/発表者名
      加藤 俊介、林 高史
    • 学会等名
      生物無機化学シンポジウム
    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
  • [学会発表] 有機触媒反応から学ぶ光駆動型ラジカル酵素の創製2024

    • 著者名/発表者名
      加藤 俊介
    • 学会等名
      学術変革領域(A) 予知生合成科学 第3回公開シンポジウム
    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
  • [学会発表] In vitro High-throughput Screening of Hemoprotein Library for Stereodivergent Synthesis of 1,2-Disubstituted Cyclopropanes2024

    • 著者名/発表者名
      Shunsuke Kato
    • 学会等名
      1st Unified Catalysis Joint Symposium
    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] 非天然化学反応を指向した微生物酵素の探索と遺伝子工学的改変2024

    • 著者名/発表者名
      加藤 俊介
    • 学会等名
      日本農芸化学会2004年度大会 大会シンポジウム「物質生産技術の革新を目指した予知生合成科学」
    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
    • 招待講演
  • [学会発表] 多糖高分子を利用したタンパク質精製手法の開発:非天然化学反応を指向した酵素探索への応用2024

    • 著者名/発表者名
      加藤 俊介
    • 学会等名
      日本薬学会第144年会 一般シンポジウム「化学の力で拓く革新的タンパク質研究」
    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
    • 招待講演
  • [学会発表] キチン粉末を利用したアフィニティー精製手法の開発:シクロプロパン化反応を触媒する微生物酵素の探索への応用2023

    • 著者名/発表者名
      加藤 俊介、竹内 康基、林 高史
    • 学会等名
      第49回生体分子科学討論会
    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
  • [学会発表] Evolutionary Engineering of Artificial Metalloenzymes for Abiotic Transformations2023

    • 著者名/発表者名
      Shunsuke Kato
    • 学会等名
      SPEED×Bottom-up Biotech×ELSI joint workshop
    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
    • 国際学会 / 招待講演
  • [学会発表] Directed Evolution of a Rh(III)-Linked Artificial Metalloenzyme for C-H Bond Functionalization2023

    • 著者名/発表者名
      Shunsuke Kato
    • 学会等名
      Gordon Research Conference -Expanding the boundaries of Protein Engineering-
    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
    • 国際学会 / 招待講演
  • [学会発表] In vitro High-Throughput Screening Platforms for Protein Engineering and Enzyme Discovery2023

    • 著者名/発表者名
      Shunsuke Kato
    • 学会等名
      Vortrag im Rahmen des Organisch-Chemischen IOCB-Kolloquiums
    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
    • 国際学会 / 招待講演
  • [学会発表] キメラ型バレルタンパク質を基盤とするロジウム含有金属酵素の指向性進化:芳香族C-H結合官能基化反応への応用2022

    • 著者名/発表者名
      加藤俊介、小野田晃、Ulrich Schwaneberg、林高史
    • 学会等名
      第48回生体分子科学討論会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] アフィニティ精製手法を活用したハイスループットスクリーニング系の構築と鉄コロール錯体を導入したミオグロビンの指向性進化への応用2022

    • 著者名/発表者名
      竹内康基、加藤俊介、林高史
    • 学会等名
      第34回生物無機化学夏季セミナー
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] キチン粉末を利用したアフィニティー精製手法の開発:非天然化学反応を触媒する微生物酵素の探索への応用2022

    • 著者名/発表者名
      加藤俊介、林高史
    • 学会等名
      第16回バイオ関連化学シンポジウム
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] Directed Evolution of an Artificial Metalloenzyme Containing an Iron Corrole Complex Using a High-throughput Screening Platform Based on an Affinity Purification System2022

    • 著者名/発表者名
      竹内康基、加藤俊介、林高史
    • 学会等名
      錯体化学会第72回討論会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] Evolutionary Engineering of a Rh(III)-linked Artificial Metalloenzyme for Isoquinoline Synthesis via C(sp2)-H Bond Activation2022

    • 著者名/発表者名
      加藤俊介、小野田晃、Ulrich Schwaneberg、林高史
    • 学会等名
      10th Asian Biological Inorganic Chemistry Conference
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] Directed Evolution of Myoglobin Reconstituted with an Iron Corrole Complex Base on a Screening Platform Based on an Affinity Purification System2022

    • 著者名/発表者名
      竹内康基、加藤俊介、林高史
    • 学会等名
      10th Asian Biological Inorganic Chemistry Conference
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] Directed Evolution of Myoglobin Reconstituted with an Iron Corrole Complex: Development of Artificial Peroxidase with Enhanced Catalytic Activity2022

    • 著者名/発表者名
      竹内康基、加藤俊介、林高史
    • 学会等名
      第103回日本化学会春季年会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] ミオグロビンを利用した人工金属酵素の開発:アルドキシム脱水反応によるニトリル合成2022

    • 著者名/発表者名
      阿部美笛、加藤俊介、林高史
    • 学会等名
      第103回日本化学会春季年会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] Cp*Rh(III)錯体を活性中心に有する人工金属酵素の指向性進化:芳香族C-H結合活性化を経由する付加環化反応への応用2021

    • 著者名/発表者名
      加藤俊介、小野田晃、Ulrich Schwaneberg、林高史
    • 学会等名
      第30回金属の関与する生体関連反応シンポジウム
    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書
  • [学会発表] キメラ型 β-バレルタンパク質を基盤とするロジウム含有人工金属酵素の指向性進化:芳香族 C-H 結合官能基化反応への応用2021

    • 著者名/発表者名
      加藤俊介、小野田晃、Ulrich Schwaneberg、林高史
    • 学会等名
      第15回バイオ関連化学シンポジウム
    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書
  • [図書] バイオサイエンスとインダストリー2024

    • 著者名/発表者名
      加藤 俊介、林 高史
    • 総ページ数
      272
    • 出版者
      バイオインダストリー協会
    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
  • [図書] 化学「2023年の化学 注目の論文」酵素で光り輝く有機合成2023

    • 著者名/発表者名
      加藤俊介
    • 総ページ数
      2
    • 出版者
      株式会社 化学同人
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [図書] 金属 特集「金属の生体機能―最近の話題から―」 代表的な鉄含有タンパク質の構造と生体機能2021

    • 著者名/発表者名
      加藤俊介、林高史
    • 総ページ数
      9
    • 出版者
      アグネ技術センター
    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書
  • [図書] 水中有機合成の開発動向 第 23 章 水中で触媒する人工金属酵素2021

    • 著者名/発表者名
      加藤俊介、林高史
    • 総ページ数
      10
    • 出版者
      シーエムシー出版
    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書
  • [備考] 指向性進化法を駆使した人工金属酵素の創製

    • URL

      http://www.cfi.eng.osaka-u.ac.jp/seeds/seeds_list_1/kato_shunsuke_assist/

    • 関連する報告書
      2023 実績報告書 2022 実施状況報告書
  • [備考] 自然界にない化学反応を実現する人工酵素の開発

    • URL

      https://miraibook.jp/researcher/sa23009

    • 関連する報告書
      2023 実績報告書
  • [備考] 指向性進化法を駆使した 人工金属酵素の創製

    • URL

      http://www.cfi.eng.osaka-u.ac.jp/assets/doc/seeds/assistant_professor/2021Jul/04.pdf

    • 関連する報告書
      2021 実施状況報告書

URL: 

公開日: 2021-10-22   更新日: 2025-01-30  

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