抗原提示バキュロウイルスを用いた原虫感染症治療用ワクチン開発基盤技術の構築

• 研究課題/領域番号: 22248009
• 研究種目: 基盤研究(A)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 応用生物化学
• 研究機関: 静岡大学
• 研究代表者: 朴 龍洙 静岡大学, グリーン科学技術研究所, 教授 (90238246)
• 研究期間 (年度): 2010-04-01 – 2014-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2013年度)
• 配分額: 46,150千円 (直接経費: 35,500千円、間接経費: 10,650千円); 2013年度: 9,880千円 (直接経費: 7,600千円、間接経費: 2,280千円); 2012年度: 9,880千円 (直接経費: 7,600千円、間接経費: 2,280千円); 2011年度: 9,880千円 (直接経費: 7,600千円、間接経費: 2,280千円); 2010年度: 16,510千円 (直接経費: 12,700千円、間接経費: 3,810千円)
• キーワード: カイコ / ワクチン / 抗原提示 / バキュロウイルス / バイオテクノロジー / 蚕

研究概要

本研究は、ネオスポラ症の成分ワクチン開発の基盤構築を行うものである。抗原候補５種類のタンパク質をカイコで発現・精製に成功した。抗原性が著しく高い３種類の抗原タンパク質をバキュロウイルス表面に提示し、ワクチンとして評価したところ、細胞性免疫が優位であった。さらに、抗原タンパク質を哺乳類細胞内で発現させる改変バキュロウイルスを構築し、動物細胞に導入したところ、抗原タンパク質の発現が確認出来た。

研究成果

• [雑誌論文] Tracking Neospora caninum parasites using chimera monoclonal antibodies against its surface antigen-related sequences (rNcSRS2) (2014)
  • 著者名/発表者名: Jinhua Dong, Takahiro Otsuki, Tatsuya Kato, and Enoch Y.Park
  • 雑誌名: J. Biosci. Bioeng. 巻: 177巻 号: 3 ページ: 351-357
  • DOI: 10.1016/j.jbiosc.2013.09.003
  • 査読あり
• [雑誌論文] Display of Neospora caninum surface protein related sequence 2 on Rous sarcoma virus-derived gag protein virus-like particles (2013)
  • 著者名/発表者名: Vipin Kumar Deo, Katsuhiko Yoshimatsu, Takahiro Otsuki, Jinhua Dong, Tatsuya Kato, Enoch Y.Park
  • 雑誌名: J. Biotechnol. 巻: 165巻 号: 1 ページ: 69-75
  • DOI: 10.1016/j.jbiotec.2013.02.013
  • 査読あり
• [雑誌論文] Detection of anti-Neospora antibodies in bovine serum by using spiky Au-CdTe nanocomplexes (2013)
  • 著者名/発表者名: HongJin Zhou, Jinhua Dong, Vipin Kumar Deo, Enoch Y.Park, Jaebeom Lee
  • 雑誌名: Sensor Actuat B 巻: 178巻 ページ: 192-199
  • DOI: 10.1016/j.snb.2012.12.078
  • 査読あり
• [雑誌論文] Isolation of recombinant phage antibodies targeting the hemagglutinin cleavage site of highly pathogenic avian influenza virus (2013)
  • 著者名/発表者名: Jinhua Dong, Akira Sakurai, Namiko Nomura, Enoch Y.Park, Futoshi Shibasaki, Hiroshi Ueda
  • 雑誌名: PLoS One 巻: 8巻 号: 4 ページ: e61158-e61158
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0061158
  • 査読あり
• [雑誌論文] Expression, purification and antigenicity of Neospora caninum-antigens using silkworm larvae targeting for subunit vaccines (2013)
  • 著者名/発表者名: Takahiro Otsuki, Jinhua Dong, Tatsuya Kato and Enoch Y.Park
  • 雑誌名: Vet. Parasitol. 巻: 192巻 号: 1-3 ページ: 284-287
  • DOI: 10.1016/j.vetpar.2012.09.038
  • 査読あり
• [雑誌論文] Construction of new ligation-independent cloning vectors for the expression and purification of recombinant proteins in silkworms using BmNPV bacmid system (2013)
  • 著者名/発表者名: Tatsuya Kato, James R. Thompson, Enoch Y. Park
  • 雑誌名: PLoS ONE 巻: 8 号: 5 ページ: e64007-e64007
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0064007
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of two murine antibodies against Neospora caninum using phage display technology and application on the detection of N. canimum (2013)
  • 著者名/発表者名: Jinhua Dong, Takahiro Otsuki, Tatsuya Kato, Tetsuya Kohsaka, Kazunori Ike, and Enoch Y. Park
  • 雑誌名: PLoS ONE 巻: 8 号: 1 ページ: e53264-e53264
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0053264
  • 査読あり
• [雑誌論文] Expression, purification and antigenicity of Neospora caninum-antigens using silkworm larvae targeting for subunit vaccines (2013)
  • 著者名/発表者名: Takahiro Otsuki, Jinhua Dong, Tatsuya Kato and Enoch Y. Park
  • 雑誌名: Vet. Parasitol. 巻: 192 号: 2 ページ: 284-287
  • DOI: 10.1007/s11814-013-0003-1
  • 査読あり
• [雑誌論文] Improvement of the transcriptional strength of baculovirus very late polyhedrin promoter by repeating its untranslated leader sequences and co-expression with the primary transactivator (2012)
  • 著者名/発表者名: Tatsuya Kato, Suganthi Lavender Manohar, Shin Kanamasa, Makoto Ogata, and Enoch Y.Park
  • 雑誌名: J. Biosci. Bioeng. 巻: 113巻 号: 6 ページ: 694-696
  • DOI: 10.1016/j.jbiosc.2012.01.010
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of a diagnostic method for neosporosis in cattle using recombinant Neospora caninum proteins (2012)
  • 著者名/発表者名: Jinhua Dong, Takahiro Otsuki, Tatsuya Kato, and Enoch Y.Park
  • 雑誌名: BMC Biotechnol. 巻: 12巻 号: 1 ページ: 19-19
  • DOI: 10.1186/1472-6750-12-19
  • 査読あり
• [雑誌論文] Expression of human papillomavirus 6b L1 protein in silkworm larvae and enhanced green fluorescent protein displaying on its virus-like particles (2012)
  • 著者名/発表者名: Muthukutty Palaniyandi, Tatsuya Kato and Enoch Y. Park
  • 雑誌名: SpringerPlus 巻: 1 号: 1
  • DOI: 10.1186/2193-1801-1-29
  • 査読あり
• [雑誌論文] Purification of functional baculovirus particles from silkworm larval hemolymph and their use as nanoparticles for the detection of human prorenin receptor (PRR) binding (2011)
  • 著者名/発表者名: Tatsuya Kato, Fumiaki Suzuki, and Enoch Y.Park
  • 雑誌名: BMC Biotechnology 巻: 11巻 号: 1 ページ: 60-60
  • DOI: 10.1186/1472-6750-11-60
  • 査読あり
• [雑誌論文] Expression of RSV-gag virus like particle in insect cell lines and silkworm larvae (2011)
  • 著者名/発表者名: Vipin Kumar Deo, Yoshitaka Tsuji, Tomomi Yasuda, Tatsuya Kato, Naonori Sakamoto, Hisao Suzuki, Enoch Y.Park
  • 雑誌名: J. Viol. Methods 巻: 177巻 号: 2 ページ: 147-152
  • DOI: 10.1016/j.jviromet.2011.07.012
  • 査読あり
• [雑誌論文] Production of Rous sarcoma virus-like particles displaying human transmembrane protein in silkworm larvae and its application to ligand-receptor binding assay (2011)
  • 著者名/発表者名: Yoshitaka Tsuji, Vipin Kumar Deo, Tatsuya Kato, and Enoch Y Park
  • 雑誌名: J. Biotechnol. 巻: 155巻 号: 2 ページ: 185-192
  • DOI: 10.1016/j.jbiotec.2011.07.008
  • 査読あり
• [雑誌論文] Enhanced Gene Expression in Insect Cells and Silkworm Larva by Modified Polyhedrin Promoter using Repeated Burst Sequence and Very Late Transcriptional Factor-1 (2010)
  • 著者名/発表者名: Lavender Suganthy Manohar, Shin Kanamasa, Takuya Nishida, Tatsuya Kato, Enoch Y.Park
  • 雑誌名: Biotechnol.Bioeng. 巻: 107 ページ: 909-916
  • 査読あり
• [雑誌論文] New strategy for rapid isolation of stable cell lines from DNA-transformed insect cells using fluorescence activated cell-sorting (2010)
  • 著者名/発表者名: Tatsuya Kato, Kengo Yoshizuka, Enoch Y.Park
  • 雑誌名: J.Biotechnol. 巻: 147 ページ: 102-107
  • 査読あり
• [雑誌論文] Silkworm expression system as a platform technology in life science (2010)
  • 著者名/発表者名: Tatsuya Kato, Mizuho Kajikawa, Katsumi Maenaka, Enoch Y.Park
  • 雑誌名: Appl.Microbiol.Biotechnol. 巻: 85 ページ: 459-470
  • 査読あり
• [学会発表] Neospora caninum-antigens and antigen displaying baculovirus using silkworm larvae targeting for Neospora vaccine (2013)
  • 著者名/発表者名: Enoch Y.Park, Takahiro Otsuki, Jinhua Dong, Tatsuya Kato
  • 学会等名: 2013 KSBB Fall meeting and International Symposium
  • 発表場所: BEXCO(韓国釜山)
  • 年月日: 2013-10-18
• [学会発表] Neospora caninum 抗原タンパク質を提示したバキュロウイルスの作製とマウスの免疫化 (2013)
  • 著者名/発表者名: 大月 隆寛、董 金華、加藤 竜也、高坂 哲也、朴 龍洙
  • 学会等名: 日本農芸化学会2013年度大会
  • 発表場所: 東北大学川内キャンパス(仙台)
  • 年月日: 2013-03-25
• [学会発表] Silkworm larvae as a potential protein factory-Silkworm expression system using bacmid (2013)
  • 著者名/発表者名: Enoch Y.Park
  • 学会等名: CELL Tech 2013
  • 発表場所: Crowne Plaza (San Diego、USA)
  • 年月日: 2013-01-22
• [学会発表] ネオスポラ症及び抗ネオスポラ原虫の検出法の開発 (2013)
  • 著者名/発表者名: 朴 龍洙、董 金華、 大月 隆寛、加藤 竜也
  • 学会等名: 第7回バイオ関連化学シンポジウム
  • 発表場所: 名古屋市名古屋大学
• [学会発表] Neospora caninum-antigens and antigen displaying baculovirus using silkworm larvae targeting for Neospora vaccine (2013)
  • 著者名/発表者名: Enoch Y. Park, Takahiro Otsuki, Jinhua Dong, Tatsuya Kato
  • 学会等名: 2013 KSBB Fall meeting and International Symposium
  • 発表場所: BEXCO in Busan Korea
• [学会発表] High- or medium-throughput protein expression and purification in silkworm pupae (2013)
  • 著者名/発表者名: Tatsuya Kato, James R. Thompson, Enoch Y. Park
  • 学会等名: Shizuoka University International Symposium 2013 - Directions of Interdisciplinary Domain Research in Japan-Europe Partnership -
  • 発表場所: Granship in Shizuoka
• [学会発表] カイコ発現系を用いたネオスポラカニナム抗原タンパク質の発現、精製及びそれらを用いたマウスの免疫 (2013)
  • 著者名/発表者名: Mai Yoshimoto, Jinha Dong, Tatsuya Kato,Tetsuya Kousaka, Kazunori Ike, Yumino Matsumoto, Kazunori Ike, and Enoch Y. Park
  • 学会等名: シーズ＆ニーズビジネスマッチング研究発表会ー高齢化社会・健康・食品産業ー
  • 発表場所: 静岡市ホテルアソシア静岡３Ｆ駿河II
• [学会発表] Neospora caninum抗原タンパク質を提示したバキュロウイルスの作製とマウスの免疫化 (2013)
  • 著者名/発表者名: 大月 隆寛、董 金華、加藤 竜也、高坂 哲也、朴 龍洙
  • 学会等名: 日本農芸化学会2013年度大会
  • 発表場所: 東北大学川内北キャンパス（仙台）
• [学会発表] Display of Neospora caninum Surface Protein Related Sequence 2 (NcSRS2) on Rous sarcoma Virus Derived gag Protein Virus-like Particles (VLPs) (2013)
  • 著者名/発表者名: Vipin Kumar Deo, Katsuhiko Yoshimatsu, Takahiro Otsuki, Jinhua Dong, Tatsuya Kato and Enoch Y Park
  • 学会等名: 日本農芸化学会2013年度大会
  • 発表場所: 東北大学川内北キャンパス（仙台）
• [学会発表] Silkworm larvae as a potential protein factory-Silkworm expression system using bacmid (2013)
  • 著者名/発表者名: Enoch Y. Park
  • 学会等名: Cell Tech 2013
  • 発表場所: Crowne Plaza San Diego (USA)
• [学会発表] 量子ドット/金ナノ粒子複合体を用いた牛ネオスポラ症の検出 (2012)
  • 著者名/発表者名: 董金華、周 宏建、李 可範、朴 龍洙
  • 学会等名: 第64回日本生物工学会大会
  • 発表場所: 神戸国際会議場(神戸)
  • 年月日: 2012-10-25
• [学会発表] 量子ドット/金ナノ粒子複合体を用いた牛ネオスポラ症の検出 (2012)
  • 著者名/発表者名: 董金華、周 宏建、李 可範、朴 龍洙
  • 学会等名: 第64回日本生物工学会大会
  • 発表場所: 神戸国際会議場（神戸）
• [学会発表] A new diagnostic method for neosporosis in cattle using recombinant Neospora caninum proteins (2012)
  • 著者名/発表者名: Jinhua Dong, Takahiro Otsuki, Tatsuya Kato, and Enoch Y. Park
  • 学会等名: 15th International Biotechnology Symposium and Exhibition
  • 発表場所: EXCO, Daegu (Korea)
• [学会発表] Display of Neospora caninum antigenic proteins (SRS2, SAG1, MIC3) onto the baculovirus surface (2012)
  • 著者名/発表者名: Takahiro Otsuki, Jinhua Dong, Tatsuya Kato, Enoch Y Park
  • 学会等名: 15th International Biotechnology Symposium and Exhibition
  • 発表場所: EXCO, Daegu (Korea)
• [学会発表] BmNPVバクミド‐カイコ発現系を用いたNeospora caninum 抗原タンパク質の発現 (2011)
  • 著者名/発表者名: 大月 隆寛,加藤 竜也,朴 龍洙
  • 学会等名: 第63回日本生物工学会大会
  • 発表場所: 東京農工大学(東京)
  • 年月日: 2011-09-27
• [学会発表] Synthesis of chelate molecular-based tetravalent glycoside influenza virus inhibitor, Proceeding p37(2010) (2011)
  • 著者名/発表者名: Seiichiro Umemura, Makoto Ogata, Chika Hashimoto, Enoch Y.Park, Taichi Usui
  • 学会等名: Second Joint Symposium TU Braunschweig-Shizuoka University
  • 発表場所: TU Braunschweig in Germany
  • 年月日: 2011-08-30
• [学会発表] Expression of Rous Sarcoma Virus gag protein forming virus like particles in insect cells, Proceeding p28, 2010. (2011)
  • 著者名/発表者名: Vipin K Deo, Tomomi Yasuda, Tsuji Yoshitaka, Enoch Y.Park
  • 学会等名: Second Joint Symposium TU Braunschweig-Shizuoka University
  • 発表場所: TU Braunschweig in Germany
  • 年月日: 2011-08-30
• [学会発表] Display of human prorenin receptor on baculovirus using silkworm larvae and its application on detection of protein-protein interaction, ICCMB proceeding page75, 2010. (2011)
  • 著者名/発表者名: Tatsuya Kato, Enoch Y Park
  • 学会等名: The 2nd International Conference of Cellular & Molecular Bioengineering
  • 発表場所: Nangyang Technical University in Singapore
  • 年月日: 2011-08-02
• [学会発表] Expression of Neospora caninum antigenic proteins using Bombyx morinucleopolyhedrovirus(BmNPV)bacmid expression system, Proceeding p71-72, 2011 (2011)
  • 著者名/発表者名: Takahiro Otsuki, Tatsuya Kato, Enoch Y.Park
  • 学会等名: 1st Zhejiang Univ.-Shizuoka Univ.Student Workshop
  • 発表場所: Zhejiang Univ.in China
  • 年月日: 2011-03-24
• [学会発表] VLPs display technology a step towards efficient vaccination platform using stable insect cell line and silkworm 1st Zhejiang Univ.-Shizuoka Univ.Student Workshop. Proceeding p22.24, 2011 (2011)
  • 著者名/発表者名: Vipin Kumar Deo, Yoshitaka Tsuji, Tomomi Yasuda, Tatsuya Kato, Naonori Sakamoto, Hisao Suzuki, Enoch Y.Park
  • 学会等名: 1st Zhejiang Univ.-Shizuoka Univ.Student Workshop
  • 発表場所: Zhejiang Univ.in China
  • 年月日: 2011-03-24
• [学会発表] Expression of Neospora caninum proteons and their application in diagnostic of neosporosis in cattle
  • 著者名/発表者名: Jinhua Dong, Takahiro Otsuki, Tatsuya Kato, and Enoch Y. Park
  • 学会等名: International Symposium on Global Young Fellowship for Functional Development of Life Science
  • 発表場所: KyungPook National University (Korea)
• [学会発表] Display of Neospora caninum antigenic proteins (SRS2, SAG1, MIC3) onto the baculovirus surface
  • 著者名/発表者名: Takahiro Otsuki, Jinhua Dong, Tatsuya Kato, Enoch Y Park
  • 学会等名: International Symposium on Global Young Fellowship for Functional Development of Life Science
  • 発表場所: KyungPook National University (Korea)
• [学会発表] Detection of anti-neospora antibodies on bovine serum by Au-CdTe nanocomplex
  • 著者名/発表者名: Hongjian Zhou, Jinhua Dong, Enoch Y. Park, Jaebeom Lee
  • 学会等名: International Symposium on Global Young Fellowship for Functional Development of Life Science
  • 発表場所: KyungPook National University (Korea)
• [備考]
  • URL: http://www.agr.shizuoka.ac.jp/c/biotech/
• [備考] 静岡大学生物工学研究室
  • URL: http://www.agr.shizuoka.ac.jp/c/biotech/
• [備考] 静岡大学グリーン科学技術研究所
  • URL: http://www.green.shizuoka.ac.jp
• [備考] 生物工学研究室
  • URL: http://www.agr.shizuoka.ac.jp/c/biotech/
• [備考] 静岡大学ナノバイオ科学推進室
  • URL: http://gsst.shizuoka.ac.jp/nano-bio/index.html
• [備考]
  • URL: http://www.agr.shizuoka.ac.jp/c/biotech/index.htm
• [産業財産権] 試料中の標的物質を検出又は定量する方法及びキット (2012)
  • 発明者名: 朴 龍洙、董 金華、李 在範、周宏建
  • 権利者名: 国立大学静岡大学、韓国釜山大学校
  • 産業財産権種類: 特許
  • 出願年月日: 2012-07-20
• [産業財産権] 目的タンパク質の製造方法 (2012)
  • 発明者名: 朴 龍洙、金政 真
  • 権利者名: 国立大学静岡大学
  • 産業財産権種類: 特許
  • 取得年月日: 2012-12-14
• [産業財産権] 試料中の標的物質を検出又は定量する方法及びキット (2012)
  • 発明者名: 朴 龍洙、董 金華、李 在範、周 宏建
  • 権利者名: 静岡大学
  • 産業財産権種類: 特許
  • 出願年月日: 2012-07-20