ブタ卵の遠心・融合再構築法による生殖工学基盤・応用技術の確立

• 研究課題/領域番号: 22380153
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 応用動物科学
• 研究機関: 独立行政法人農業生物資源研究所
• 研究代表者: 菊地 和弘 独立行政法人農業生物資源研究所, 動物発生分化研究ユニット, 上級研究員 (20360456)
• 研究分担者: 柏崎 直巳 麻布大学, 獣医学部, 教授 (90298232)
• 研究期間 (年度): 2010-04-01 – 2014-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2013年度)
• 配分額: 19,500千円 (直接経費: 15,000千円、間接経費: 4,500千円); 2013年度: 4,550千円 (直接経費: 3,500千円、間接経費: 1,050千円); 2012年度: 5,070千円 (直接経費: 3,900千円、間接経費: 1,170千円); 2011年度: 4,940千円 (直接経費: 3,800千円、間接経費: 1,140千円); 2010年度: 4,940千円 (直接経費: 3,800千円、間接経費: 1,140千円)
• キーワード: 応用動物 / 発生・分化 / 発生工学 / 細胞操作 / 受精 / 発生分化 / 発生・分

研究概要

ブタ卵を遠心し細胞質小片を融合させることにより、顕微操作技術を要しない生殖工学技術を確立することを目的とした。小片は褐色ならびに透明のものが含まれるが、褐色小片にはミトコンドリアが多数含まれていた。褐色小片から再構築した未受精卵で受精の効率が高かった。また、発生能が低下した卵に小片を融合した場合は受精・発生能を高めたが、小片のタイプで受精ならびに発生能に差がなかった。受精卵から得られた小片には卵の活性化を誘起する能力が認められた。これらの手法を基にして生殖工学応用技術の発展が期待される。

研究成果

• [雑誌論文] Roles of the zona pellucida and functional expression of the sperm-egg fusion factor "Izumo" during in vitro fertilization in pigs (2014)
  • 著者名/発表者名: Tanihara F, Kikuchi K ほか
  • 雑誌名: Anim Sci J 巻: 85 号: 4 ページ: 395-404
  • DOI: 10.1111/asj.12164
  • 査読あり
• [雑誌論文] Normal reproductive development of pigs produced using sperm retrieved from immature testicular tissue cryopreserved and grafted into nude mice (2014)
  • 著者名/発表者名: Kaneko H, Kikuchi K, Kashiwazaki N. ほか
  • 雑誌名: Theriogenology 巻: 15 号: 2 ページ: 325-331
  • DOI: 10.1016/j.theriogenology.2014.04.012
  • 査読あり
• [雑誌論文] Generation of live piglets for the first time using sperm retrieved from immature testicular tissue cryopreserved and grafted into nude mice (2013)
  • 著者名/発表者名: Kaneko H, Kikuchi K, Kashiwazaki N ほか
  • 雑誌名: PLoS ONE 巻: 8 号: 7 ページ: e70989-e70989
  • DOI: 10.1371/journal.pone.0070989
  • 査読あり
• [雑誌論文] Evaluation of zona pellucida function for sperm penetration during in vitro fertilization in pigs (2013)
  • 著者名/発表者名: Tanihara F, Kikuchi K ほか
  • 雑誌名: J Reprod Dev 巻: 59 ページ: 385-392
  • NAID: 10031195876
  • URL: https://www.jstage.jst.go.jp/article/jrd/59/4/59_2013-021/_pdf
  • 査読あり
• [雑誌論文] Improved developmental ability of porcine oocytes grown in nude mice after fusion with cytoplasmic fragments prepared by centrifugation : A model for utilization of primordial oocytes (2013)
  • 著者名/発表者名: Kaneko H, Kikuchi K ほか
  • 雑誌名: Theriogenology 巻: 80 号: 8 ページ: 887-892
  • DOI: 10.1016/j.theriogenology.2013.07.014
  • 査読あり
• [雑誌論文] Comparison of cytoskeletal integrity, fertilization and developmental competence of oocytes vitrified before or after in vitro maturation in a porcine model (2013)
  • 著者名/発表者名: Egerszegi I, Kikuchi K ほか.
  • 雑誌名: Cryobiology 巻: 67 号: 3 ページ: 287-292
  • DOI: 10.1016/j.cryobiol.2013.08.009
  • 査読あり
• [雑誌論文] Fertilization ability of porcine oocytes reconstructed from ooplasmic fragments produced and characterized after serial centrifugations (2013)
  • 著者名/発表者名: Viet Linh N, Kikuchi K ほか
  • 雑誌名: J Reprod Dev 巻: 59 ページ: 549-556
  • NAID: 130003361058
  • URL: https://www.jstage.jst.go.jp/article/jrd/59/6/59_2013-042/_pdf
  • 査読あり
• [雑誌論文] Fertilization ability of porcine oocytes reconstructed from ooplasmic fragments produced and characterized after serial centrifugations (2013)
  • 著者名/発表者名: Viet Linh N, Kikuchi K, Nakai M, Tanihara F, Noguchi J, Kaneko H, Dang-Nguyen T.Q, Men N.T, Hanh N.V, Somfai T, Nguyen B.X, Nagai T, Manabe N
  • 雑誌名: Journal of Reproduction and Development 巻: 59 ページ: 549-556
  • NAID: 130003361058
  • 査読あり
• [雑誌論文] Evaluation of zona pellucida function for sperm penetration during in vitro fertilization in pigs (2013)
  • 著者名/発表者名: Tanihara F, Nakai M, Kaneko H, Noguchi J, Otoi T, Kikuchi K (2013) Evaluation of zona pellucida function for sperm penetration during in vitro fertilization in pigs
  • 雑誌名: Journal of Reproduction and Development 巻: 59 ページ: 385-392
  • NAID: 10031195876
  • 査読あり
• [雑誌論文] Normal reproductive development of offspring derived by intracytoplasmic injection of porcine sperm grown in hoist mice (2012)
  • 著者名/発表者名: Kaneko H, Kikuchi K, Nakai M, Tanihara F, Noguchi J, Noguchi M, Ito J, Kashiwazaki N
  • 雑誌名: Theriogenology 巻: 78 号: 4 ページ: 898-906
  • DOI: 10.1016/j.theriogenology.2012.04.004
  • 査読あり
• [雑誌論文] Xenografting of gonadal tissues into mice as a possible method for conservation and utilization of porcine genetic resources (2011)
  • 著者名/発表者名: Kikuchi K, Nakai M, Kashiwazaki N, Kaneko H
  • 雑誌名: Anim Sci J 巻: 82 号: 4 ページ: 495-503
  • DOI: 10.1111/j.1740-0929.2011.00919.x
  • NAID: 10030377418
  • 査読あり
• [雑誌論文] Improvement of Porcine Oocytes with Low Developmental Ability after Fusion of Cytoplasmic Fragments Prepared by Serial Centrifugation (2011)
  • 著者名/発表者名: Viet Linh N, Kikuchi K, et al
  • 雑誌名: Journal of Reproduction and Development 巻: 57 号: 5 ページ: 620-626
  • DOI: 10.1262/jrd.11-053H
  • NAID: 10029878394
  • ISSN: 0916-8818, 1348-4400
  • 査読あり
• [雑誌論文] Xenografting of gonadal tissues into mice as a possible method for conservation and utilization of porcine genetic resources (2011)
  • 著者名/発表者名: Kikuchi K, Kaneko H, Nakai M, Kashiwazaki N.
  • 雑誌名: Animal Science Journal 巻: (印刷中)
  • NAID: 10030377418
  • 査読あり
• [雑誌論文] ヌードマウス体内におけるブタ原始卵胞の発育と卵の発生能 (2010)
  • 著者名/発表者名: 金子浩之, 菊地和弘 ほか
  • 雑誌名: J Reprod Engineer 巻: 13 ページ: 1-6
  • URL: http://sre.ac.affrc.go.jp/Contents/Vol_13/13_Kaneko.pdf
  • 査読あり
• [雑誌論文] ヌードマウス体内におけるブタ原始卵胞の発育と卵の発生能 (2010)
  • 著者名/発表者名: 金子浩之, 中井美智子, 菊地和弘
  • 雑誌名: Journal of Reproduction Engineering 巻: 13 ページ: 1-6
  • 査読あり
• [学会発表] cent progress on pig genetic resources: Cryopreservation of gametes and gonadal tissues (2014)
  • 著者名/発表者名: Kikuchi K, Nakai M, Somfai T, Noguchi J, Tanihara F, Ito J, Kashiwazaki N, Nagai T, Kaneko H
  • 学会等名: The 2nd Symposium of the Thai Society for Animal Reproduction
  • 発表場所: タイ, バンコック
  • 招待講演
• [学会発表] New perspectives of in vitro gamete preservation : Xenografting of testicular tissues. Pig (2013)
  • 著者名/発表者名: Kikuchi K, Kashiwazaki N ほか
  • 学会等名: 2nd Fatty Pig Conference
  • 発表場所: ハンガリー国ブダペスト市
  • 年月日: 2013-11-21
• [学会発表] Recent progress on pig genetic resources : Cryopreservation of gametes and gonadal tissues (2013)
  • 著者名/発表者名: Kikuchi K, Kashiwazaki N ほか
  • 学会等名: The 2nd Symposium of Thai Society for Animal Reproduction
  • 発表場所: タイ国バンコック市
  • 年月日: 2013-03-20
• [学会発表] New perspectives of in vitro gamete preservation: Xenografting of testicular tissues (2013)
  • 著者名/発表者名: Kikuchi K, Nakai M, Somfai T, Noguchi J, Tanihara F, Ito J, Kashiwazaki N, Kaneko H
  • 学会等名: 2nd Fatty pig Conference
  • 発表場所: ハンガリー, ブダペスト
  • 招待講演
• [学会発表] Contribution of mitochondria in restoration of fertilization and developmental competence of oocytes with low cytoplasmic maturity (2012)
  • 著者名/発表者名: Viet Linh N, Kikuchi K
  • 学会等名: The 9th Annual Conference of the Asian Reproductive Biotechnology Society
  • 発表場所: フィリピン国マニラ市
  • 年月日: 2012-10-25
• [学会発表] Fusion of cytoplasmic fragments to porcine oocytes improves the ability for embryonic development (2012)
  • 著者名/発表者名: Kikuchi K ほか
  • 学会等名: The 17th International Congress on Animal Reproduction
  • 発表場所: カナダ国バンクーバー市
  • 年月日: 2012-07-30
• [学会発表] Production of sperm from cryopreserved boar testicular tissue grafted into mice (2012)
  • 著者名/発表者名: Kaneko H, Kikuchi K ほか
  • 学会等名: 8th Association for Applied Animal Andrology Biennial Conference
  • 発表場所: 8th Association for Applied Animal Andrology Biennial Conference
  • 年月日: 2012-07-28
• [学会発表] Contribution of fusion of ooplasmic fragments to the developmental ability of porcine denuded oocytes (2011)
  • 著者名/発表者名: Viet Linh N, 菊地和弘 ほか
  • 学会等名: 第104回日本繁殖生物学会大会
  • 発表場所: 盛岡市
  • 年月日: 2011-09-13
• [学会発表] Fusion with ooplasmic fragments improved in vitro fertilization and subsequent devlopmental ability of porcine denuded oocytes (2010)
  • 著者名/発表者名: Viet Linh N, Kikuchi K ほか
  • 学会等名: 第103回日本繁殖生物学会大会
  • 発表場所: 十和田市
  • 年月日: 2010-09-02
• [学会発表] Fusion with ooplasmic fragments improved in vitro fertilization and subsequent developmental ability of porcine denuded oocytes (2010)
  • 著者名/発表者名: Viet Linh N, Kikuchi K, et al.
  • 学会等名: 日本繁殖生物学会
  • 発表場所: 北里大学獣医学部キャンパス
  • 年月日: 2010-09-02
• [学会発表] Fusion of cytoplasmic fragments to porcine oocytes improves the ability for embryonic development
  • 著者名/発表者名: Kikuchi K, Viet Linh N, Nakai M, Tanihara F, Noguchi J, Kanenko H.
  • 学会等名: The 17th International Congress on Animal Reproduction
  • 発表場所: カナダ、バンクーバー
• [学会発表] Production of sperm from cryopreserved boar testicular tissue grafted into mice
  • 著者名/発表者名: Kaneko H, Nakai M, Tanihara F, Noguchi J, Kikuchi K.
  • 学会等名: 8th Association for Applied Animal Andrology Biennial Conference
  • 発表場所: カナダ、バンクーバー
• [学会発表] Contribution of mitochondria in restoration of fertilization and developmental competence of oocytes with low cytoplasmic maturity
  • 著者名/発表者名: Viet Linh N, Kikuchi K
  • 学会等名: The 9th Annual Conference of the Asian Reproductive Biotechnology Society
  • 発表場所: フィリピン、マニラ