蛍光性リン酸基結合タグ分子を用いたプロテインキナーゼ反応の解析法

• 研究課題/領域番号: 22390006
• 研究種目: 基盤研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 物理系薬学
• 研究機関: 広島大学
• 研究代表者: 小池 透 広島大学, 医歯薬保健学研究院, 教授 (90186586)
• 研究期間 (年度): 2010-04-01 – 2014-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2013年度)
• 配分額: 16,510千円 (直接経費: 12,700千円、間接経費: 3,810千円); 2013年度: 2,990千円 (直接経費: 2,300千円、間接経費: 690千円); 2012年度: 2,860千円 (直接経費: 2,200千円、間接経費: 660千円); 2011年度: 2,860千円 (直接経費: 2,200千円、間接経費: 660千円); 2010年度: 7,800千円 (直接経費: 6,000千円、間接経費: 1,800千円)
• キーワード: プロテオミクス / キナーゼ / フォスファターゼ / 蛍光分析 / ケミカルバイオロジー / リン酸化タンパク質 / 蛍光分析法 / 磁気ビーズ / キナーゼ反応 / シグナル伝達 / タンパク質リン酸化 / タンパク質 / リン酸化反応

研究概要

フォスタグ技術を世界標準のリン酸化プロテオーム解析技術にすることを目的として，(1)蛍光共鳴エネルギー移動(FRET)を利用したリン酸化ペプチドのキナーゼ反応の高感度蛍光分析システム，(2) リン酸化タンパク質の蛍光検出・定量システム，(3) リン酸化数やリン酸化部位の異なるリン酸化生体分子（ペプチドや糖類）のリン酸化状態解析法を開発した．本研究で開発した新しいリン酸化合物の研究手法は，今後のリン酸化プロテオーム研究を劇的に促進するものであると確信している。

研究成果

• [雑誌論文] Profiling of Protein Thiophosphorylation Using Phos-tag Affinity Electrophoresis: Evaluation of Adenosine 5′-O-(3-thiotriphosphate) as a Phosphoryl Donor in Protein Kinase Reactions (2014)
  • 著者名/発表者名: E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, A. Shiba, K. Edahiro, Y. Inoue, K. Yamamoto, and T. Koike
  • 雑誌名: Proteomics 巻: 14 号: 6 ページ: 668-679
  • DOI: 10.1002/pmic.201300533
  • 査読あり
• [雑誌論文] Sandwich assay for phosphorylation of protein multiplexes by using antibodies and Phos-tag (2013)
  • 著者名/発表者名: E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike
  • 雑誌名: Analytical Biochemistry 巻: 438 号: 2 ページ: 104-106
  • DOI: 10.1016/j.ab.2013.03.029
  • 査読あり
• [雑誌論文] A Phos-tag-based magnetic-bead method for rapid and selective separation of phosphorylated biomolecules (2013)
  • 著者名/発表者名: M. Tsunehiro, Y. Meki, K. Matsuoka, E. Kinoshita-Kikuta, E. Kinoshita and T. Koike
  • 雑誌名: Journal of Chromatography B 巻: 925 ページ: 86-94
  • DOI: 10.1016/j.jchromb.2013.02.039
  • 査読あり
• [雑誌論文] Phos-tag-Based Microarray Techniques Advance Phosphoproteomics (2013)
  • 著者名/発表者名: Eiji Kinoshita, Emiko Kinoshita-Kikuta and Tohru Koike
  • 雑誌名: Journal of Proteomics & Bioinformatics 巻: S6 号: S6 ページ: 8-8
  • DOI: 10.4172/jpb.s6-008
  • 査読あり
• [雑誌論文] A Laborsaving, Timesaving, and More Reliable Strategy for Separation of Low-Molecular-Mass Phosphoproteins in Phos-tag Affinity Electrophoresis (2012)
  • 著者名/発表者名: E. Kinoshita-Kikuta, E. Kinoshita, and T. Koike
  • 雑誌名: International Journal of Chemistry 巻: 4 号: 5 ページ: 1-8
  • DOI: 10.5539/ijc.v4n5p1
  • 査読あり
• [雑誌論文] Highly sensitive detection of protein phosphorylation by using improved Phos-tag Biotin (2012)
  • 著者名/発表者名: E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, Y. Sugiyama, Y. Fukada, T. Ozeki, and T. Koike
  • 雑誌名: Proteomics 巻: 12 号: 7 ページ: 932-937
  • DOI: 10.1002/pmic.201100639
  • 査読あり
• [雑誌論文] Separation and identification of four distinct serine-phosphorylation states of ovalbumin by Phos-tag affinity electrophoresis (2012)
  • 著者名/発表者名: E. Kinoshita-Kikuta, E. Kinoshita, and T. Koike
  • 雑誌名: Electrophoresis 巻: 33 号: 5 ページ: 849-855
  • DOI: 10.1002/elps.201100518
  • 査読あり
• [雑誌論文] Phos-tag SDS-PAGE systems for phosphorylation profiling of proteins with a wide range of molecular masses under neutral pH conditions (2012)
  • 著者名/発表者名: E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike
  • 雑誌名: Proteomics 巻: 12 号: 2 ページ: 192-202
  • DOI: 10.1002/pmic.201100524
  • 査読あり
• [雑誌論文] A Phos-tag-based fluorescence resonance energy transfer system for the analysis of the kinase reaction of a substrate peptide (2011)
  • 著者名/発表者名: M. Somura, K. Takiyama, E. Kinoshita- Kikuta, E. Kinoshita, and T. Koike
  • 雑誌名: Analytical Methods 巻: 3 号: 6 ページ: 1303-1309
  • DOI: 10.1039/c1ay05016h
  • 査読あり
• [雑誌論文] Zinc(II)-cyclen polyacrylamide gel electrophoresis for detection of mutations in short Ade/Thy-rich DNA fragments (2011)
  • 著者名/発表者名: Eiji Kinoshita
  • 雑誌名: Analytical Biochemistry 巻: 408 ページ: 348-350
  • 査読あり
• [雑誌論文] A novel phosphate-affinity bead immobilized with Phos-tag for separation and enrichment of phosphopeptides and phosphoproteins (2011)
  • 著者名/発表者名: Emiko Kinoshita-Kikuta
  • 雑誌名: Journal of Integrated Omics 巻: 1 ページ: 157-169
  • 査読あり
• [雑誌論文] The DNA-binding activity of mouse DNA methyltransferase 1 is regulated by phosphorylation with casein kinase 1delta/ epsilon (2010)
  • 著者名/発表者名: Sugiyama Y, Hatano N, Sueyoshi N, Suetake I, Tajima S, Kinoshita E, Kinoshita-Kikuta E, Koike T, and Kameshita I
  • 雑誌名: Biochem J 巻: 427 号: 3 ページ: 489-497
  • DOI: 10.1042/bj20091856
  • 査読あり
• [雑誌論文] A clean-up technology for the simultaneous determination of lysophosphatidic acid and sphingosine-1-phosphate by matrix-assisted laser desorption/ ionization time-of-flight mass spectrometry using a phosphate-capture molecule, Phos-tag (2010)
  • 著者名/発表者名: J. Morishige, M. Urikura, H. Takagi, K. Hirano, T. Koike, T. Tanaka & K.
  • 雑誌名: Satouchi Rapid Commun. Mass Spectrom 巻: 24 号: 7 ページ: 1075-1084
  • DOI: 10.1002/rcm.4484
  • 査読あり
• [雑誌論文] The DNA-binding activity of mouse DNA methyltransferase 1 is ragulated phosphorylation with casein kinase 1σ/ε (2010)
  • 著者名/発表者名: Yasunori Sugiyama
  • 雑誌名: Biochemical Journal 巻: 427 ページ: 489-497
  • 査読あり
• [学会発表] 迅速かつ簡便にリン酸化生体分子を分離精製するためのPhos-tag磁気ビーズの開発 (2013)
  • 著者名/発表者名: 常弘昌弥, 目木勇馬, 木下恵美子, 木下 英司, 小池 透
  • 学会等名: 第64回日本電気泳動学会
  • 発表場所: 仙台
  • 年月日: 2013-11-15
• [学会発表] Phos-tag Biotin as an on-demand tool for study on protein phosphorylome (2013)
  • 著者名/発表者名: E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike
  • 学会等名: 12th HUPO Annual World Congress
  • 発表場所: Yokohama
• [学会発表] 中性 phos-tag PAGEを用いたタンパク質リン酸化反応の解析 (2012)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 小池 透
  • 学会等名: 第85回日本生化学会大会
  • 発表場所: 福岡
  • 年月日: 2012-12-15
• [学会発表] Phos-tag Biotinの開発とリン酸化プロ テオミクスへの応用 (2012)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 小池 透
  • 学会等名: 10th JHUPO
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2012-07-27
• [学会発表] Phos-tag SDS-PAGE systems for protein phosphorylation profiling under neutral pH (2012)
  • 著者名/発表者名: E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike
  • 学会等名: 11th HUPO Annual World Congress
  • 発表場所: Boston, USA
• [学会発表] 改良型Phos-tag Biotinを用いたペプチドマイクロアレイ解析によるリン酸化反応プロファイリング (2011)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 小池 透
  • 学会等名: 9th JHUPO
  • 発表場所: 新潟
  • 年月日: 2011-07-28
• [学会発表] リン酸基結合タグ分子(Phos-tag)を用いたリン酸化生体分子の解析法 (2011)
  • 著者名/発表者名: 小池 透
  • 学会等名: 生体機能関連化学部会 若手の会 第23回サマースクール
  • 発表場所: 廿日市市
  • 年月日: 2011-07-23
• [学会発表] リン酸基結合タグ分子(Phos-tag)を用いたリン酸化生体分子の解析法 (2011)
  • 著者名/発表者名: 小池透
  • 学会等名: 日本化学会生体関連化学部会サマースクール
  • 発表場所: 広島県廿日市市(招待講演)
  • 年月日: 2011-07-23
• [学会発表] Phos-tag-based fluorescence resonance energy transfer system for the analysis of phosphorylated molecules (2010)
  • 著者名/発表者名: Masao Somura
  • 学会等名: 環太平洋国際化学会 PACIFICHEM 2010
  • 発表場所: 米国ハワイ州ホノルル
  • 年月日: 2010-12-16
• [学会発表] Phos-tag fluorescence resonance energy transfer system for the analysis of phosphorylated molecules (2010)
  • 著者名/発表者名: M. Somura, K. Takiyama, T. Nagai, E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, and T. Koike
  • 学会等名: International Chemical Congress of Pacific Basin
  • 発表場所: Honolulu, USA
• [学会発表] 近接Phos-tagゲルを用いたリン酸化タンパク質の電気泳動法
  • 著者名/発表者名: 目木 勇馬，木下 英司，木下 恵美子, 小池 透
  • 学会等名: 日本電気泳動学会
  • 発表場所: 仙台市
• [学会発表] 迅速かつ簡便にリン酸化生体分子を分離精製するためのPhos-tag磁気ビーズの開発
  • 著者名/発表者名: 常弘 昌弥, 目木 勇馬, 木下 恵美子，木下 英司，小池 透
  • 学会等名: 日本電気泳動学会
  • 発表場所: 仙台市
• [学会発表] Quantitative analysis of effects of pH on the stability of His- and Asp-phosphoproteins in bacterial two-component system by using phosphate-affinity SDS-PAGE
  • 著者名/発表者名: Akio Shiba, Keisuke Edahiro, Emiko Kinoshita-Kikuta, Eiji Kinoshita, and Tohru Koike
  • 学会等名: 12th HUPO World Congress
  • 発表場所: 横浜市
• [学会発表] Quantitative analysis of the phosphorylation state of a hybrid histidine kinase in bacterial two-component system by using phosphate-affinity SDS-PAGE
  • 著者名/発表者名: Keisuke Edahiro, Akio Shiba, Emiko Kinoshita-Kikuta, Yuki Inoue, Eiji Kinoshita, and Tohru Koike
  • 学会等名: 12th HUPO World Congress
  • 発表場所: 横浜市
• [学会発表] Phos-tag SDS-PAGE systems for protein phosphorylation profiling under neutral pH conditions
  • 著者名/発表者名: Eiji Kinoshita
  • 学会等名: HUPO2012 conference
  • 発表場所: Boston, USA
• [図書] Phos-tag Affinity Electrophoresis for Protein Kinase Profiling "Protein Kinase Technologies, Neuromethods" (2012)
  • 著者名/発表者名: E. Kinoshita, E. Kinoshita-Kikuta, T. Koike
  • 出版者: Humana Press, Springer
• [図書] Phos-tag ゲルによるリン酸化タンパク質の分離・同定法,臨床プロテオーム(日本 プロテオーム研究会編) (2012)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 小池 透
  • 出版者: 金原出版
• [図書] 蛍光性Phos-tag を用いたタンパク質リ ン酸化反応の解析法,生物物理化学, 日本電気泳動学会編 (2012)
  • 著者名/発表者名: 木下英司, 木下恵美子, 多幾山敬, 宗村雅男, 小池 透
• [図書] 特集リン酸化生体分子解析のためのフォスタグテクノロジー (2012)
  • 著者名/発表者名: 木下英司
  • 総ページ数: 75
  • 出版者: 日本泳動学会
• [備考]
  • URL: http://home.hiroshima-u.ac.jp/tkoike/
• [備考] 医薬分子機能科学研究室
  • URL: http://home.hiroshima-u.ac.jp/tkoike/index.html
• [備考] 医薬分子機能科学研究室
  • URL: http://home.hiroshima-u.ac.jp/tkoike/index.html
• [備考]
  • URL: http://home.hiroshima-u.ac.jp/tkoike/
• [備考]
  • URL: http://home.hiroshima-u.ac.jp/tkoike/