自己抗体抗原の網羅的高感度検出によるBSE生前血清診断法の開発

• 研究課題/領域番号: 22580353
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 応用獣医学
• 研究機関: 酪農学園大学
• 研究代表者: 横田 愽 酪農学園大学, 獣医学群, 教授 (90137414)
• 研究分担者: 今岡 進 関西学院大学, 理工学部, 教授 (60145795) ; 鈴木 一由 酪農学園大学, 獣医学部, 准教授 (30339296)
• 研究期間 (年度): 2010 – 2012
• 研究課題ステータス: 完了 (2012年度)
• 配分額: 4,550千円 (直接経費: 3,500千円、間接経費: 1,050千円); 2012年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円); 2011年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円); 2010年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円)
• キーワード: BSE / 生前診断 / GFAP / 血清蛋白質 / 質量分析 / 血清診断 / 自己抗体 / 抗原検出

研究概要

本研究の目的は、BSE 血液中に逸脱する神経蛋白質を高感度に検出し、生前診断の一助にする事である。生体試料には類似する夾雑物が非常に多く存在するので、安定した結果を導きだすには夾雑物を予め出来る限り取り除くことが重要である。しかしながら、網羅的解析を行うためにはなるべく多種類の生体成分を同時に分析することも必要なことである。我々のこれまでの研究により、予め抗体を検出しておくことで ターゲットを絞り込むことが出来る。そのために目的蛋白質に応じて生体試料の前処理法を工夫することが出来る。実際には、当研究室が開発した C8 および C6 固相カラムを用いたペプチド吸着の改良法を用いて、前年度特定された抗原蛋白質それぞれに関して添加回収試験を行い、吸着および溶出溶媒の検討を行い、高回収率で定量的な生体試料前処理法を確立し、LC-MS による高感度検出を可能にした。

研究成果

• [雑誌論文] Accurate Determination of Tissue Steroid Hormones, Precursors and Conjugates in Adult Male Rat (2013)
  • 著者名/発表者名: Maeda Naoyuki, Emi Tanaka, Tomokazu Suzuki, Kanako Okumura, Sachiko Nomura, Taku Miyasho, Satoko Haeno, and Hiroshi Yokota
  • 雑誌名: J. Biochem. 巻: １５３ ページ: 63-71
  • 査読あり
• [雑誌論文] Nakade T.Proteome Analysis of Cerebrospinal Fluid in Healthy Beagle Dogs and Canine Encephalitis (2012)
  • 著者名/発表者名: Nakamura K, Miyasho T, Nomura S, Yokota H
  • 雑誌名: J Vet Med Sci 巻: 74 ページ: 751-756
  • 査読あり
• [雑誌論文] Particle-Induced X-ray Emission Analysis of Elements in Plasma from Wild and Captive Sea Turtles(Eretmochelys imbricata, Chelonia mydas, and Caretta caretta) in Okinawa (2012)
  • 著者名/発表者名: Kazuyuki Suzuki & Jun Noda & Makio Yanagisawa & Isao Kawazu & Kouichiro Sera & Daisuke Fukui & Mitsuhiko Asakawa & Hiroshi Yokota
  • 雑誌名: Japan Biol Trace Elem Res
  • 査読あり
• [雑誌論文] Relationships between Curved Carapace Sizes and Plasma Major and Trace Element Status in Captive Hawksbill Sea Turtle (Eretmochelys imbricata) (2012)
  • 著者名/発表者名: Suzuki K, Noda J, Yanagisawa M, Kawazu I, Sera K, Fukui D, Asakawa M, Yokota H
  • 雑誌名: J Vet Med Sci 巻: (In press)
  • 査読あり
• [雑誌論文] Relationships between Carapace Sizes and Plasma Major and Trace Element Status in Captive Hawksbill Sea Turtles (<i>Eretmochelys imbricata</i>) (2012)
  • 著者名/発表者名: Kazuyuki SUZUKI*, Jun NODA, Makio YANAGISAWA, Isao KAWAZU, Kouichiro SERA, Daisuke FUKUI, Mitsuhiko ASAKAWA and Hiroshi YOKOTA.
  • 雑誌名: Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ 巻: 74 号: 12 ページ: 1677-1680
  • DOI: 10.1292/jvms.12-0099
  • NAID: 130001879676
  • ISSN: 0916-7250, 1347-7439
  • 査読あり
• [雑誌論文] Proteome Analysis of Cerebrospinal Fluid in Healthy Beagles and Canine Encephalitis (2012)
  • 著者名/発表者名: Nakamura K, Miyasho T, Nomura S, Yokota H, Nakade T
  • 雑誌名: Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｖｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ 巻: 74 号: 6 ページ: 751-756
  • DOI: 10.1292/jvms.11-0474
  • NAID: 130002090077
  • ISSN: 0916-7250, 1347-7439
  • 査読あり
• [雑誌論文] Oxidatively Damaged Proteins in the Early Stage of Testicular Toxicities in Male Rats by Orally Administered with a Synthetic Oestrogen (2011)
  • 著者名/発表者名: Yunlan Li, Kanako Okumura, Sachiko Nomura, Naoyuki Maeda, Taku Miyasho, Hiroshi Yokota
  • 雑誌名: Diethylstilbestrol Reproductive Toxicol 巻: 31 ページ: 26-34
  • 査読あり
• [雑誌論文] High Mobility Group Box 1 (HMGB1) Protein Is Present in the Cerebrospinal Fluid of Dogs with Encephalitis (2011)
  • 著者名/発表者名: Miyasho T, Nakamura K, Nomura S, Kawasako K, Nakade T, Yamada S, Yokota H
  • 雑誌名: J Vet Med Sci 巻: 73(7) ページ: 917-922
  • NAID: 130000676922
  • 査読あり
• [雑誌論文] Simplified PCR Assay for Fast and Easy Mycoplasma Mastitis Screening in Dairy Cattle (2011)
  • 著者名/発表者名: Higuchi H., Iwano H., Kawai K., Ohta T., Obayashi T., Hirose K., Ito N., Yokota H., Tamura Y. and Nagahata H. A
  • 雑誌名: J. Vet Science 巻: 12,(2) ページ: 191-193
  • NAID: 120005761687
  • 査読あり
• [雑誌論文] ATP-binding cassette transporter isoform C2 localizes to the apical plasma membrane via interactions with scaffolding protein (2011)
  • 著者名/発表者名: Emi Y , Nomura S, Yokota H, Sakaguchi M
  • 雑誌名: J Biochem 巻: 149:177-189
  • NAID: 10030583422
  • 査読あり
• [雑誌論文] Oxidatively Damaged Proteins in the Early Stage of Testicular Toxicities in Male Rats by Orally Administered with a Synthetic Oestrogen, Diethylstilbestrol (2011)
  • 著者名/発表者名: Yunlan Li, Kanako Okumura, Sachiko Nomura, Naoyuki Maeda, Taku Miyasho, Hiroshi Yokota
  • 雑誌名: Reproductive Toxicol 巻: 31 ページ: 26-34
  • 査読あり
• [雑誌論文] ATP-binding cassette transporter isoform C2 (ABCC2) localizes to the apical plasma membrane via interactions with PDZK1 scaffolding protein (2011)
  • 著者名/発表者名: Emi, Y., Nomura, S., Yokota, H., Sakaguchi, M.
  • 雑誌名: Journal of Biochemistry 巻: 149 号: 2 ページ: 177-189
  • DOI: 10.1093/jb/mvq131
  • 査読あり
• [雑誌論文] A Simplified PCR Assay for Fast and Easy Mycoplasma Mastitis Screening in Dairy Cattle (2011)
  • 著者名/発表者名: Higuchi H., Iwano H., Kawai K., Ohta T., Obayashi T., Hirose K., Ito N., Yokota H., Tamura Y., Nagahata H.
  • 雑誌名: J.Vet Scienc 巻: 12 号: 1 ページ: 191-193
  • DOI: 10.1016/j.reprotox.2010.09.007
  • NAID: 120005761687
  • 査読あり
• [雑誌論文] Biochemical and immunohistochemical characterization of the amyloid in canine amyloid-producing odontogenic tumor (2010)
  • 著者名/発表者名: Hirayama K, Miyasho T, Ohmachi T, Watanabe T, Yokota H, Taniyama H
  • 雑誌名: Vet Pathol 巻: 47 ページ: 915-922
  • 査読あり
• [雑誌論文] Placental Transfer of Conjugated Bisphenol A and Subsequent Reactivation in the Rat fetus (2010)
  • 著者名/発表者名: Miyu Nishikawa, Hidetomo Iwano, Risa Yanagisawa, Nanako Koike, Hiroki Inoue and Hiroshi Yokota
  • 雑誌名: Environ. Health Perspect 巻: 118 ページ: 1196-1203
  • NAID: 120005761579
  • 査読あり
• [雑誌論文] Neutrophil elastase inhibitor improves survival of rats with clinically relevant sepsis (2010)
  • 著者名/発表者名: Suda K, Takeuchi H, Hagiwara T, Miyasho T, Okamoto M, Kawasako K, Yamada S, Suganuma K, Wada N, Saikawa Y, Fukunaga K, Funakoshi Y, Hashimoto S, Yokota H, Maruyama I, Ishizaka A,Kitagawa Y
  • 雑誌名: Shock. May 巻: 33(5):526-531
  • 査読あり
• [雑誌論文] Placental Transfer of Conjugated Bisphenol A and Subsequent Reactivation in the Rat fetus (2010)
  • 著者名/発表者名: Miyu Nishikawa, Hidetomo Iwano, Risa Yanagisawa, Nanako Koike, Hiroki Inoue, Hiroshi Yokota
  • 雑誌名: Environ.Health Perspect. 巻: 118 ページ: 1196-1203
  • NAID: 120005761579
  • 査読あり
• [雑誌論文] Protective Effect of High-Mobility Group Box 1 Blockade on Acute Liver Failure in Rats :(HMGB 1 Blockade for Rat Acute Liver Failure).Y. (2010)
  • 著者名/発表者名: Takano K, Shinoda M, Tanabe M, Miyasho T, Yamada S, Ono S, Masugi Y, Suda K, Fukunaga K, Hayashida T, Hibi T, Obara H, Takeuchi H, Kawachi S, Kawasako K, Okamoto M, Yokota H, Maruyama I, Kitagawa
  • 雑誌名: Shock 巻: 34 ページ: 573-579
  • 査読あり
• [雑誌論文] Biochemical and immunohistochemical characterization of the amyloid in canine amyloid-producing odontogenic tumor (2010)
  • 著者名/発表者名: Hirayama K, Miyasho T, Ohmachi T, Watanabe T, Yokota H, Taniyama H
  • 雑誌名: Vet Pathol. 巻: 47 ページ: 915-922
  • 査読あり
• [雑誌論文] Spherical sulfated cellulose adsorbs high-mobility-group box chromosomal protein 1 in vitro and in vivo. (2010)
  • 著者名/発表者名: Suda K, Takeuchi H, Hagiwara T, Miyasho T, Yamada S, Inoue T, Okamoto M, Wada N, Saikawa Y, Fukunaga K, Hashimoto S, Yokota H, Maruyama I, Kitagawa Y.
  • 雑誌名: ASAIO J. 巻: 56 ページ: 210-214
  • 査読あり
• [雑誌論文] Neutrophil elastase inhibitor improves survival of rats with clinically relevant sepsis. (2010)
  • 著者名/発表者名: Suda K, Takeuchi H, Hagiwara T, Miyasho T, Okamoto M, Kawasako K, Yamada S, Suganuma K, Wada N, Saikawa Y, Fukunaga K, Funakoshi Y, Hashimoto S, Yokota H, Maruyama I, Ishizaka A, Kitagawa Y.
  • 雑誌名: Shock 巻: 33 ページ: 526-531
  • 査読あり
• [学会発表] Selected Reaction Monitoring(SRM)を用いたウシ血中グリア専制生賛成蛋白質の検知 (2011)
  • 著者名/発表者名: 鈴木智和、田中絵美、前田尚之、宮庄拓、横田博
  • 学会等名: 日本質量分析学会
  • 発表場所: 阪急エキスポパーク
  • 年月日: 2011-09-15
• [学会発表] 臓器灌流モデルを用いたビスフェノールA体内動態の解明 (2010)
  • 著者名/発表者名: 井上博紀, 西川美宇, 佐野千枝, 太田有耶, 櫻田泰樹, 岩野英知, 横田博
  • 学会等名: 環境ホルモン学会
  • 発表場所: 東京大学
  • 年月日: 2010-12-17
• [学会発表] メタボローム解析によるビスフェノールAの妊娠期暴露影響の新規探索 (2010)
  • 著者名/発表者名: 岩野英知, 西川美宇, 森田安奈, 柳沢梨沙, 封馬澄人, 井上博紀, 横田博
  • 学会等名: 環境ホルモン学会
  • 発表場所: 東京大学
  • 年月日: 2010-12-17
• [学会発表] Selected ReactionMonitoring (SRM)を用いた牛血中グリア繊維性酸性蛋白質の検知
  • 著者名/発表者名: 鈴木智和1・ 田中絵美1・ 前田尚之1,2・宮庄 拓2・ 横田 博2 (1食肉科研 ・2酪農大獣生化)
  • 学会等名: 第59回日本質量分析学会(大阪)