組織切片上の微量ｍＲＮＡ検出を可能にするｉｎ ｓｉｔｕ ＲＴ－ＰＣＲ法の樹立

• 研究課題/領域番号: 22590634
• 研究種目: 基盤研究(C)
• 配分区分: 補助金
• 応募区分: 一般
• 研究分野: 法医学
• 研究機関: 島根大学
• 研究代表者: 栂 とも子 島根大学, 医学部, 技術専門職員 (20403462)
• 研究分担者: 竹下 治男 島根大学, 医学部, 教授 (90292599)
• 研究期間 (年度): 2010-04-01 – 2013-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2013年度)
• 配分額: 3,900千円 (直接経費: 3,000千円、間接経費: 900千円); 2012年度: 910千円 (直接経費: 700千円、間接経費: 210千円); 2011年度: 650千円 (直接経費: 500千円、間接経費: 150千円); 2010年度: 2,340千円 (直接経費: 1,800千円、間接経費: 540千円)
• キーワード: in-situ RT-PCR / mRNA / in situ Hybridization / 川本法 / in situ RT-PCR

研究概要

組織切片上の微量ｍRNAを検出するために逆転写PCRを行いcDNAを作成し、次にPCRで増幅し、それをラベルして、標的ｍRNAの局在を確認する条件検討を試みたが、増幅の確認ができず、in situ RT-PCRの手技実験を中止した。次にRNAを効率よく保存できると推測し、粘着フィルム（川本法）を利用した凍結切片を用いて、in situ Hybridizationを行った。粘着フィルムはin situ Hybridizationのプロトコルに強度的に耐えうるが、洗浄の際に組織が剥がれ落ちることが多く、またフィルムに染色残渣が残り、明確な標的ｍRNAの局在を確認ができなかった。

研究成果

• [雑誌論文] Distribution and haplotype analysis of all the non-synonymous and autoimmunity-related single nucleotide polymorphisms in the human deoxyribonuclease II gene using worldwide populations (2013)
  • 著者名/発表者名: Kaori Kimura
  • 雑誌名: Legal Medicine 巻: 15 号: 3 ページ: 157-160
  • DOI: 10.1016/j.legalmed.2012.10.002
  • 査読あり
• [雑誌論文] Determination of ABO genotypes by real-time PCR using allele-specific primers (2012)
  • 著者名/発表者名: Muro T, Fujihara J, Imamura S, Nakayama H, Kimura-Kataoka K, Toga T, Iida R, Yasuda T, Takeshita H
  • 雑誌名: Legal Medcine 巻: 14(1) ページ: 47-50
  • 査読あり
• [雑誌論文] Genetic and expression analysis of SNPs in the human deoxyribonuclease II: SNPs in the promoter region of the gene reduce its in vivo activity through decreased promoter activity (2012)
  • 著者名/発表者名: Kaori Kimura
  • 雑誌名: Electrophoresis 巻: 33 号: 18 ページ: 2852-2858
  • DOI: 10.1002/elps.201200260
  • 査読あり
• [雑誌論文] Determination of ABO genotypes by real-time PCR using allele-specific primers (2012)
  • 著者名/発表者名: Muro T, Fujihara J, Imamura S, Nakamura H, Kimura-Kataoka K, Toga T, Iida R, Yasuda T, Takeshita H
  • 雑誌名: Leg Med (Tokyo) 巻: 14(1) ページ: 47-50
  • 査読あり
• [雑誌論文] Expression of the prolactin receptor in Japanese breast cancer (2011)
  • 著者名/発表者名: Nio Y, Iguchi C, Tsuboi K, Itakura M, Nishi T, Hashimoto K, Takamura M, Takeda H, Omori H, Koike M, Sato Y, Endo S, Ogo K, Yamaguchi K, Tsuji M, Toga T, Takeshita H
  • 雑誌名: Shimane Journal of Medidal Science 巻: 28(1) ページ: 1-6
  • NAID: 120005586218
  • 査読あり
• [雑誌論文] Simultaneous determination of seven informative Y chromosome SNPs to differentiate East Asian, European, and African populations. (2011)
  • 著者名/発表者名: Muro T, Iida R, Fujihara J, Yasuda T, Watanabe Y, Imamura S, Nakamura H, Kimura-Kataoka K, Yuasa I, Toga T, Takeshita H.
  • 雑誌名: Leg Med 巻: 13 ページ: 134-141
  • 査読あり
• [学会発表] 熱湯およびズダンブラックB処理法を応用した多重蛍光免疫染色の一例 (2013)
  • 著者名/発表者名: 栂とも子, 林芳弘, 山根史嗣
  • 学会等名: 第24回生物学技術研究会
  • 発表場所: 岡崎コンファレンスセンター(岡崎市）
• [学会発表] Development of functional Zinc Oxide nanoparticles for biomedical applications (2013)
  • 著者名/発表者名: Y.Fujita, H.Hashimoto, M. Tongu, T.Yamada, K.Nishimura, K. Yoshikiyo, H. Akiyoshi, T. Yamamoto, A. Matsumoto, M. Fujii, J. Fujihara, T. Toga, H. Takeshita, T. Isobe
  • 学会等名: The China-Japan Symposium on Nanomedicine
  • 発表場所: Nanjin, China
• [学会発表] Investigation of Functional Zinc Oxide Nanoparticles for Biomedical Applications (2013)
  • 著者名/発表者名: Y. Fujita, H. Hashimoto, M. Tongu, T. Yamada, K. Nishimura, K. Yoshikiyo, H. Akiyoshi, T.Yamamoto, A. Matsumoto, M. Fujii, J. Fujihara, T. Toga, H. Takeshita, T. Isobe
  • 学会等名: 7th International Symposiumu on Nanomedicine
  • 発表場所: 九州工業大学(北九州市）
• [学会発表] ヒト石灰化病変の川本法を応用した非脱灰凍結切片の組織染色 (2012)
  • 著者名/発表者名: 栂とも子
  • 学会等名: 第23回生物学技術研究会
  • 発表場所: 岡崎コンファレンスセンター(岡崎市)
  • 年月日: 2012-02-17
• [学会発表] The Basic Properties of Fluorescence ZnO Nanoparticles for Medical Usage (2012)
  • 著者名/発表者名: M.Fujii,T.Toga,H.Hashimoto,H.Akiyoshi,H.Takeshita,Y.Fujita
  • 学会等名: 6th International Symposiumu on Nanomedicine
  • 発表場所: くにびきメッセ（松江市）
• [学会発表] ヒト石灰化大動脈弁の川本法を応用した非脱灰凍結切片の組織染色 (2011)
  • 著者名/発表者名: 栂とも子, 木村かおり, 藤原純子, 高橋節典, 高山公子, 大塚洋輔, 安田年博, 竹下治男
  • 学会等名: 第28回日本法医学会学術中四国地方集会
  • 発表場所: 川崎医科大学(倉敷)
  • 年月日: 2011-10-15
• [学会発表] しじみ貝の殻を含む全体組織染色-非脱灰凍結標本作成技術(川本法)を応用して (2011)
  • 著者名/発表者名: 栂とも子他
  • 学会等名: 第22回生物学技術研究会
  • 発表場所: 岡崎コンファレンスセンター(岡崎市)
• [学会発表] しじみ貝の殻を含む全体組織染色-非脱灰硬組織凍結標本作製技術(川本法)を応用して (2011)
  • 著者名/発表者名: 栂とも子, 木村かおり, 藤原純子, 高橋節典, 高山公子, 阿草哲郎, 大塚洋輔, 竹下治男
  • 学会等名: 第22回生物学技術研究会
  • 発表場所: 岡崎コンファレンスセンター(岡崎市)
• [学会発表] 硬組織における遺伝子発現解析研究への非脱灰凍結切片作成技術(川本法)の応用 (2010)
  • 著者名/発表者名: 栂とも子他
  • 学会等名: 第57回日本法医学会学術近畿地方集会
  • 発表場所: 関西医科大学附属病院(枚方市)
  • 年月日: 2010-11-13
• [学会発表] 硬組織における遺伝子発現解析研究への非脱灰凍結切片標本作製技術(川本法)の応用 (2010)
  • 著者名/発表者名: 栂とも子, 丸山理留敬, 宇田川潤, 高橋節典, 高山公子, 木村かおり, 藤原純子, 大塚洋輔, 竹下治男
  • 学会等名: 第57回日本法医学会近畿地方会
  • 発表場所: 関西医科大学附属病院(枚方市)
  • 年月日: 2010-11-13
• [学会発表] 大動脈瘤におけるテネイシンXの高発現と高糖鎖修飾 (2010)
  • 著者名/発表者名: 松本健一, 織田禎二, 佐藤和美, 塚本万里枝, 荒内ひとみ, 栂とも子, 進藤正信, 戸塚靖則
  • 学会等名: 第42回日本結合組織学会学術大会 第57回マトリックス研究会大会 合同学術集会
  • 発表場所: 秋田拠点センター・アルヴェ(秋田市)