• 研究課題をさがす
  • 研究者をさがす
  • KAKENの使い方
  1. 前のページに戻る

新規DNA二重鎖切断導入系を用いた染色体不安定化モデルの構築

研究課題

研究課題/領域番号 22651017
研究種目

挑戦的萌芽研究

配分区分補助金
研究分野 放射線・化学物質影響科学
研究機関大阪大学

研究代表者

篠原 美紀  大阪大学, たんぱく質研究所, 准教授 (80335687)

研究期間 (年度) 2010 – 2012
研究課題ステータス 完了 (2011年度)
配分額 *注記
2,400千円 (直接経費: 2,100千円、間接経費: 300千円)
2011年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2010年度: 1,100千円 (直接経費: 1,100千円)
キーワードDNA傷害修復 / ゲノム安定化 / DNA二重鎖切断
研究概要

DNA二重鎖切断(DSB)はDNAの両鎖の遺伝情報が失われることから最も重篤なDNA傷害のひとつである。また、ヒトでDSB修復に関わる蛋白質(Nbs1, Mre11, LigaseIV)が機能しなくなると高発がん性遺伝病となることから、DSBが染色体不安定化の引き金となると考えられる。DSBは組換え修復によって修復されるが、ヒト細胞内における組換え過程を理解する上で、障壁となっているのが、高等真核生物においてDSB修復の素過程の分子メカニズムを解析するための優れた系が存在しないことである。そこで、我々はその問題を解決するために新規のDSB導入・検出法を開発しそれを用いてヒトでの組換え修復の素過程の理解にむけた研究を行う。
今年度は、「制限酵素を用いたDNA切断導入法の確立」を主たる目的として、制限酵素の細胞内への導入方法について条件検討を行った。また、人工的に導入されるDSBの分布をハイスループットDNAシーケンスによって同定するための効率の良いDSB末端の回収方法について条件検討を行った。その結果、全ての染色体由来のDSB断片を効率よく回収することに成功した。今後は回収したDSB断片の塩基配列を決定し、ゲノム上にマッピングを行うことでDSBの導入される頻度を明らかにする。また、制限酵素によって導入されたDSB末端における、既知の修復タンパク質(γH2AX、Rad51など)の会合状態について調べるために間接蛍光抗体法の条件について改良を行った。その結果、界面活性剤と固定剤で細胞を処理することでクロマチン上の修復タンパク質の検出感度を上げることができた。

報告書

(1件)
  • 2010 実績報告書
  • 研究成果

    (10件)

すべて 2011 2010

すべて 雑誌論文 (2件) (うち査読あり 2件) 学会発表 (8件)

  • [雑誌論文] The cyclin-dependent kinase (CDK) promote formation of the synaptonemal complex in yeast meiosis2010

    • 著者名/発表者名
      Zhu, Z., Mori, S., Oshiumi, H., Matsuzaki, K., Shinohara, M., Shinohara, A
    • 雑誌名

      Genes Cells

      巻: 15 ページ: 1036-1050

    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Genetic Analysis of Baker's Yeast Msh4-Msh5 Reveals a Threshold Crossover Level for Meiotic Viability2010

    • 著者名/発表者名
      Nishant, K.T., C.Chen, M.Shinohara, A.Shinohara, E.Alani
    • 雑誌名

      PLoS Genet.

      巻: 6

    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
    • 査読あり
  • [学会発表] DNA損傷応答因子9-1-1複合体の減数分裂期組換えにおける分子機能2011

    • 著者名/発表者名
      篠原美紀
    • 学会等名
      第28回 染色体ワークショップ
    • 発表場所
      加賀温泉、石川
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [学会発表] 細胞周期制御因子による非相同末端結合の新規調節メカニズムの解析2011

    • 著者名/発表者名
      松嵜健一郎, 篠原彰, 篠原美紀
    • 学会等名
      第28回 染色体ワークショップ
    • 発表場所
      加賀温泉、石川
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [学会発表] Cyclin-dependent kinase (CDK) regulates the NHEJ activity during S-G2 phase in budding yeast2010

    • 著者名/発表者名
      Kenichiro Matsuzaki, Akira Shinohara, Miki Shinohara
    • 学会等名
      EMBO Work Shop "Recombination & connections to SUMO and Ubiquitin modifications"
    • 発表場所
      Il Ciocco, Italy
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [学会発表] Cyclin-dependent kinase (CDK) regulates the NHEJ activity during S-G2 phase in budding yeast サイクリン依存的キナーゼによるLif1タンパク質のS-G2期におけるリン酸化とその機能2010

    • 著者名/発表者名
      Kenichiro Matsuzaki, Akira Shinohara, Miki Shinohara
    • 学会等名
      日本遺伝学会 第82回大会
    • 発表場所
      北海道大学
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [学会発表] Cyclin-dependent protein kinase regulates the repair mode of non-homologous end joining through the phosphorylation of Lif1 protein in budding yeast2010

    • 著者名/発表者名
      Kenichiro Matsuzaki, Akira Shinohara, Miki Shinohara
    • 学会等名
      The 7^<th> 3R Symposium
    • 発表場所
      富山国際会議場(招待講演)
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [学会発表] Cyclin-dependent protein kinase regulates the repair mode of non-homologous end joining through the phosphorylation of Lif1 protein in budding yeast2010

    • 著者名/発表者名
      Miki Shinohara
    • 学会等名
      MEXT Priority Research Project "Cell Proliferation Control" International Symposium Cell Cycle and Cell Differentiation
    • 発表場所
      ルブラ王山、名古屋(招待講演)
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [学会発表] Roles of histone modification enzymes, Set1 and Dot1, and the PAF transcription elongation complex during meiosis2010

    • 著者名/発表者名
      Miki Shinohara, Hiroyuki Sasanuma, Mohamad Bani, Akira Shinohara
    • 学会等名
      International Symposium on "Epigenome Network, Development and Reprogramming of Germ Cells"
    • 発表場所
      九州大学
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書
  • [学会発表] CDKによる非相同末端結合の新規制御メカニズムの解析 Cyclin-dependent protein kinase (CDK) regulates the repair mode of non-homologous end joining in budding yeast2010

    • 著者名/発表者名
      松嵜健一郎、篠原彰、篠原美紀
    • 学会等名
      第33回 日本分子生物学会
    • 発表場所
      神戸国際会議場
    • 関連する報告書
      2010 実績報告書

URL: 

公開日: 2010-08-23   更新日: 2016-04-21  

サービス概要 検索マニュアル よくある質問 お知らせ 利用規程 科研費による研究の帰属

Powered by NII kakenhi