酵素タグと細胞内抗体導入法を組み合わせた細胞ターゲティングシステムの開発

• 研究課題/領域番号: 22680041
• 研究種目: 若手研究(A)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 医用生体工学・生体材料学
• 研究機関: 東京工業大学
• 研究代表者: 三重 正和 東京工業大学, 総合理工学研究科(研究院), 准教授 (40334528)
• 研究期間 (年度): 2010-04-01 – 2013-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2013年度)
• 配分額: 21,320千円 (直接経費: 16,400千円、間接経費: 4,920千円); 2012年度: 5,850千円 (直接経費: 4,500千円、間接経費: 1,350千円); 2011年度: 8,450千円 (直接経費: 6,500千円、間接経費: 1,950千円); 2010年度: 7,020千円 (直接経費: 5,400千円、間接経費: 1,620千円)
• キーワード: SNAP-tag / complementation / タンパク質間相互作用 / ターゲティング / ルシフェラーゼ

研究概要

本研究は酵素タグと細胞内抗体導入法を組み合わせた細胞ターゲティングシステムの開発を目的とした。ここでは酵素タグとして利用するSNAP-tagを分割したsplit SNAP-tagが、融合したタンパク質の分子間相互作用に応じて活性を回復することを見出し、分子間相互作用検出の新たな手法となることを示した。また、分子認識素子としてDNAアプタマーを利用する可能性を考慮し、ファージ由来Gene A*タンパク質を利用したDNA-タンパク質ハイブリッド分子作製法を構築した。

研究成果

• [雑誌論文] Targeting of EGF-displayed protein nanoparticles with anticancer drugs (2014)
  • 著者名/発表者名: Matsumoto R, Hara R, Andou T, Mie M, Kobatake E
  • 雑誌名: J Biomed Mater Res B Appl Biomater 巻: (in press) 号: 8 ページ: 1792-1798
  • DOI: 10.1002/jbm.b.33162
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of a specific siRNA delivery system into HeLa cells using an IgG-binding fusion protein (2013)
  • 著者名/発表者名: Bae J, Mie M, Kobatake E
  • 雑誌名: Biotechnol Lett. 巻: 35(12) 号: 12 ページ: 2081-2089
  • DOI: 10.1007/s10529-013-1299-y
  • 査読あり
• [雑誌論文] Selection of DNA aptamers with affinity for pro-gastrin-releasing peptide (proGRP), a tumor marker for small cell lung cancer (2013)
  • 著者名/発表者名: Mie M, Kai T, Le T, Cass AE, Kobatake E
  • 雑誌名: Appl Biochem Biotechnol 巻: 169(1) 号: 1 ページ: 250-255
  • DOI: 10.1007/s12010-012-9956-5
  • 査読あり
• [雑誌論文] Selection of DNA aptamers with affinity for pro-gastrin-releasing peptide (proGRP), a tumor marker for small cell lung cancer (2013)
  • 著者名/発表者名: Mie M, Kai T, Le T, Cass AE, Kobatake E
  • 雑誌名: Appl Biochem Biotechnol. 巻: 169 号: 8 ページ: 250-255
  • DOI: 10.1007/s12010-012-9928-9
  • 査読あり
• [雑誌論文] Construction of semisynthetic DNA-protein conjugates with Phi X174 Gene-A* protein (2012)
  • 著者名/発表者名: Mashimo Y, Maeda H, Mie M, Kobatake E
  • 雑誌名: Bioconjug Chem. 巻: 23(6) 号: 6 ページ: 1349-1355
  • DOI: 10.1021/bc300118m
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of a split SNAP-tag protein complementation assay for visualization of protein-protein interactions in living cells (2012)
  • 著者名/発表者名: Mie M, Naoki T, Uchida K, Kobatake E
  • 雑誌名: Analyst 巻: 137(20) 号: 20 ページ: 4760-4765
  • DOI: 10.1039/c2an35762c
  • 査読あり
• [雑誌論文] Detection of antigens using a protein-DNA chimera developed by enzymatic covalent bonding with phiX gene A* (2012)
  • 著者名/発表者名: Akter F, Mie M, Grimm S, Nygren PA, Kobatake E
  • 雑誌名: Anal Chem. 巻: 84(11) 号: 11 ページ: 5040-5046
  • DOI: 10.1021/ac300708r
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of a homogeneous immunoassay system using protein A fusion fragmented Renilla luciferaseDevelopment of a homogeneous immunoassay system using protein A fusion fragmented Renilla luciferase (2012)
  • 著者名/発表者名: Mie M, Thuy NP, Kobatake E
  • 雑誌名: Analyst 巻: 137(5) 号: 5 ページ: 1085-1089
  • DOI: 10.1039/c2an15976g
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of a homogeneous immunoassay system using protein A fusion fragmented Renilla luciferase (2012)
  • 著者名/発表者名: Mie M, Bich Thuy NP, Kobatake E
  • 雑誌名: Analyst 巻: 137 ページ: 1085-1089
  • 査読あり
• [雑誌論文] Direct detection of RNAs in living cells using peptide-inserted Renilla luciferase (2011)
  • 著者名/発表者名: Takashi Andou
  • 雑誌名: Analyst 巻: 136 号: 12 ページ: 2446-2449
  • DOI: 10.1039/c1an15130d
  • 査読あり
• [雑誌論文] Direct detection of RNAs in living cells using peptide-inserted Renilla luciferase (2011)
  • 著者名/発表者名: Andou T, Endoh T, Mie M, Kobatake E
  • 雑誌名: Analyst 巻: 136 ページ: 2446-2449
  • 査読あり
• [学会発表] 分子刺激応答により自己組織化するDNA-タンパク質ハイブリッド分子の構築 (2014)
  • 著者名/発表者名: 豊永恭平・三重正和・小畠英理
  • 学会等名: 日本化学会第94春季年会
  • 発表場所: 名古屋大学
• [学会発表] 分子刺激応答により自己組織化するDNA-タンパク質ハイブリッド分子の構築 (2014)
  • 著者名/発表者名: 豊永恭平、三重正和、小畠英理
  • 学会等名: 日本化学会第94春季年会
  • 発表場所: 名古屋大学（愛知県）
• [学会発表] Split SNAP-tag を利用したタンパク質間相互作用の蛍光イメージング法の開発 (2013)
  • 著者名/発表者名: 直木達彦・三重正和・小畠英理
  • 学会等名: 2013年電気化学会秋季大会
  • 発表場所: 東京工業大学
• [学会発表] PhiX174GeneA*タンパク質を利用したDNA の細胞表面提示法の開発 (2013)
  • 著者名/発表者名: 依田毅・三重正和・小畠英理
  • 学会等名: 日本化学会第93春季年会
  • 発表場所: 立命館大学
• [学会発表] Split SNAP-tagを利用したタンパク質間相互作用の蛍光イメージング法の開発 (2013)
  • 著者名/発表者名: 直木達彦、三重正和、小畠英理
  • 学会等名: 2013年 電気化学会秋季大会
  • 発表場所: 東京工業大学 （東京都）
• [学会発表] Phix174GeneA*タンパク質を利用したDNAの細胞表面提示法の開発 (2013)
  • 著者名/発表者名: 依田毅、三重正和、小畠英理
  • 学会等名: 日本化学会第93春季年会
  • 発表場所: 立命館大学（滋賀県）
• [学会発表] PhiX174 Gene A*タンパク質を用いたDNA-タンパク質融合分子作製法の開発とその応用 (2012)
  • 著者名/発表者名: 真下泰正・鈴木繁哉・三重正和・小畠英理
  • 学会等名: 第6回バイオ関連化学シンポジウム
  • 発表場所: 北海道大学
• [学会発表] Phi X174 Gene A*タンパク 質を用いたDNA-タンパク質融合分子作製法の開発とその応用 (2012)
  • 著者名/発表者名: 真下泰正、鈴木繁哉、三重正和、小畠英理
  • 学会等名: 第6回バイオ関連化学シンポジウム
  • 発表場所: 北海道大学高等教育推進機構（札幌市）
• [学会発表] Protein Labeling with Split SNAP-Tag by Protein Interaction Dependent Reconstitution in Living Cells (2012)
  • 著者名/発表者名: 直木達彦、三重正和、小畠英理
  • 学会等名: The First International Symposium on Biofunctional Chemistry (ISBC2012)
  • 発表場所: 東京工業大学（東京都目黒区）
• [学会発表] Split-SNAP tag を利用した新規分子イメージング法の開発 (2011)
  • 著者名/発表者名: 三重正和・直木達彦・小畠英理
  • 学会等名: 第5回バイオ関連化学シンポジウム
  • 発表場所: つくば国際会議場
  • 年月日: 2011-09-13
• [学会発表] Split-SNAP tagを利用した新規分子イメージング法の開発 (2011)
  • 著者名/発表者名: 三重正和・直木達彦・小畠英理
  • 学会等名: 第5回バイオ関連化学シンポジウム
  • 発表場所: つくば市・つくば国際会議場
  • 年月日: 2011-09-13
• [学会発表] Protein Labeling with Split SNAP-Tag by Protein Interaction Dependent Reconstitution in Living Cells (2011)
  • 著者名/発表者名: 直木達彦・三重正和・小畠英理
  • 学会等名: The First International Symposium on Biofunctional Chemistry
  • 発表場所: 東京工業大学