フリーズドライ体細胞を用いた家畜の遺伝資源保存・再生技術の開発

• 研究課題/領域番号: 22681035
• 研究種目: 若手研究(A)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 資源保全学
• 研究機関: 高知大学
• 研究代表者: 松川 和嗣 高知大学, 教育研究部総合科学系, 准教授 (00532160)
• 研究期間 (年度): 2010-04-01 – 2014-03-31
• 研究課題ステータス: 完了 (2013年度)
• 配分額: 15,210千円 (直接経費: 11,700千円、間接経費: 3,510千円); 2013年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円); 2012年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円); 2011年度: 3,770千円 (直接経費: 2,900千円、間接経費: 870千円); 2010年度: 8,840千円 (直接経費: 6,800千円、間接経費: 2,040千円)
• キーワード: 遺伝子資源保全 / 凍結乾燥 / 牛 / 核移植 / 家畜 / 遺伝資源保存・再生 / 哺乳動物体細胞の保存 / 遺伝資源保存 / ウシ

研究概要

我々は、絶滅が危惧されている家畜のクローン技術と凍結乾燥技術を組み合わせた保存・再生を試みている。本研究では、ウシ線維芽細胞の凍結乾燥後におけるDNA損傷細胞数を計測し、凍結乾燥後の保存温度が核移植胚の発生に与える影響を検討した。凍結乾燥後1週間のDNA損傷細胞の割合は、－30℃保存では22％、＋20℃では100％となり有意な差が認められた（P＜0.05）。培養細胞、－30℃保存および＋20℃保存凍結乾燥細胞を核移植したときの卵割率は67、50および0%，胚盤胞発生率は37、28および25%となり、培養細胞と－30℃で保存した凍結乾燥細胞の間に有意な差は認められなかった（P>0.05）。

研究成果

• [雑誌論文] Differentiation potential and GFP labeling of sheep bone marrow-derived mesenchymal stem cells (2013)
  • 著者名/発表者名: Czernik M, Fidanza A, Sardi M, Galli C, Brunetti D, Malatesta D, Della Salda L, Matsukawa K, Ptak GE, Loi P
  • 雑誌名: J Cell Biochem 巻: 114 ページ: 134-143
  • 査読あり
• [雑誌論文] Differentiation potential and GFP labeling of sheep bone marrow-derived mesenchymal stem cells (2013)
  • 著者名/発表者名: Czernik M
  • 雑誌名: Journal of Cell Biochemistry 巻: 114 ページ: 134-143
  • 査読あり
• [雑誌論文] Influence of intergeneric/interspecies mitochondrial injection; parthenogenetic development of bovine oocytes after injection of mitochondria derived from somatic cells (2012)
  • 著者名/発表者名: Takeda K, Srirattana K, Matsukawa K, Akagi S, Kaneda M, Tasai M, Nirasawa K, Pinkert CA, Parnpai R, Nagai T
  • 雑誌名: J Reprod Dev 巻: 58 ページ: 323-329
  • NAID: 10030821280
  • 査読あり
• [雑誌論文] Influence of intergeneric/interspecies mitochondrial injection; parthenogenetic development of bovine oocytes after injection of mitochondria derived from somatic cells (2012)
  • 著者名/発表者名: Takeda K
  • 雑誌名: Journal of Reproduction and Development 巻: 58 ページ: 323-329
  • 査読あり
• [雑誌論文] Influence of intergeneric/interspecies mitochondrial injection ; part henogenetic development of bovine oocytes after injection of mitochondria derived from somatic cells (2012)
  • 著者名/発表者名: Takeda K, Srirattana K, Matsukawa K
  • 雑誌名: Journal of Reproduction and Development 巻: (投稿中)(掲載確定)
  • NAID: 10030821280
  • 査読あり
• [雑誌論文] Constant transmission of mitochondrial DNA in intergeneric cloned embryos reconstructed from swamp buffalo fibroblasts and bovine ooplasm (2011)
  • 著者名/発表者名: Srirattana K, Matsukawa K, Akagi S, Tasai M, Tagami T, Nirasawa K, Nagai T, Kanai Y, Parnpai R, Takeda K
  • 雑誌名: Anim Sci J 巻: 82 ページ: 236-243
  • NAID: 10030376198
  • 査読あり
• [雑誌論文] Treatment with a Histone Deacetylase Inhibitor After Nuclear Transfer Improves the Preimplantation Development of Cloned Bovine Embryos (2011)
  • 著者名/発表者名: Satoshi Akagi, Kazutsugu Matsukawa, Eiji Mizutani, Kazuhiro Fukunari, Masahiro Kaneda, Shinya Watanabe, Seiya Takahashi
  • 雑誌名: Journal of Reproduction and Development 巻: 57 ページ: 120-126
  • NAID: 10027901389
  • 査読あり
• [雑誌論文] Developmental ability of somatic cell nuclear transferred embryos aggregated at the 8-cell stage or 16- to 32-cell stage in cattle (2011)
  • 著者名/発表者名: Akagi S, Yamaguchi D, Matsukawa K, Mizutani E, Hosoe M, Adachi N, Kubo M, Takahashi S
  • 雑誌名: Journal of Reproduction and Development 巻: 57 ページ: 500-506
  • NAID: 10029593280
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of single blastomeres derived from two-cell embryos produced in vitro in pigs (2011)
  • 著者名/発表者名: Dang-Nguyen TQ, Kaneda M, Somfai T, Haraguchi S, Matsukawa K, Akagi S, Kikuchi K, Nakai M, Nguyen BX, Tajima A, Kanai Y, Nagai T
  • 雑誌名: Theriogenology 巻: 76 ページ: 88-96
  • 査読あり
• [雑誌論文] Development of single blastomeres derived from two-cell embryos produced in vitro in pigs (2011)
  • 著者名/発表者名: Dang-Nguyen TQ, Kaneda M, Somfai T, Haraguchi S, Matsukawa K
  • 雑誌名: Theriogenology 巻: 76(1) ページ: 88-96
  • 査読あり
• [雑誌論文] Developmental ability of somatic cell nuclear transferred embryos aggregated at the 8-cell stage or 16- to 32-cell stage in cattle (2011)
  • 著者名/発表者名: Akagi S, Yamaguchi D, Matsukawa K
  • 雑誌名: Journal of Reproduction and Development 巻: 57(4) ページ: 500-506
  • NAID: 10029593280
  • 査読あり
• [雑誌論文] Culture of bovine embryos on a polydimethylsiloxane (PDMS) microwell plate (2010)
  • 著者名/発表者名: Satoshi Akagi, Misa Hosoe, Kazutsugu Matsukawa, Akihiko Ichikawa, Tamio Tanikawa, Seiya Takahashi
  • 雑誌名: Journal of Reproduction and Development 巻: 56 ページ: 475-479
  • NAID: 10026622013
  • 査読あり
• [雑誌論文] Pinkert, Microinjection of serum-starved mitochondria derived from somatic cells affects parthenogetic development of bovine and murine oocytes (2010)
  • 著者名/発表者名: Kumiko Takeda, Mariko Tasai, Satoshi Akagi, Kazutsugu Matsukawa, Seiya Takahashi, Masaki Iwamoto, Kanokwan Srirattana, Akira Onishi, Takahiro Tagami, Keijiro Nirasawa, Hirofumi Hanada, Carl A
  • 雑誌名: Mitochondrion 巻: 10 ページ: 137-142
  • 査読あり
• [雑誌論文] Design and fabrication of all-in-one unified microfluidic chip for automation of embryonic cell manipulation (2010)
  • 著者名/発表者名: Yoko Yamanishi, Shinya Sakuma, Tomohiro Iyanagi, Fumihito Arai, Tatsuo Arai, Akiyuki Hasegawa, Tamio Tanikawa, Akihiko Ichikawa, Osamu Sato, Akihiro Nakayama, Hiroshi Aso, Mitsuhiro Goto, Seiya Takahashi, Kazutsugu Matsukawa
  • 雑誌名: Journal of Robotics and Mechatronics 巻: 21 ページ: 371-379
  • 査読あり
• [雑誌論文] Microinjection of serum-starved mitochondria derived from somatic cells affects parthenogetic development of bovine and murine oocytes (2010)
  • 著者名/発表者名: Kumiko Takeda, Mariko Tasai, Satoshi Akagi, Kazutsugu Matsukawa, et al.
  • 雑誌名: Mitochondrion 巻: 10巻 ページ: 137-142
  • 査読あり
• [雑誌論文] Design and fabrication of all-in-one unified microfluidic chip for automation of embryonic cell manipulation (2010)
  • 著者名/発表者名: Yoko Yamanishi, et al.
  • 雑誌名: Journal of Robotics and Mechatronics 巻: 22巻 ページ: 371-379
  • 査読あり
• [雑誌論文] Culture of bovine embryos on a polydimethylsiloxane (PDMS) microwell plate (2010)
  • 著者名/発表者名: Satoshi Akagi, Misa Hosoe, Kazutsugu Matsukawa, et al.
  • 雑誌名: Journal of Reproduction and Development 巻: 56巻 ページ: 475-479
  • NAID: 10026622013
  • 査読あり
• [雑誌論文] Treatment with a histone deacetylase inhibitor after nuclear transfer improves the preimplantation development of cloned bovine embryos (2010)
  • 著者名/発表者名: Satoshi Akagi, Kazutsugu Matsukawa, et al.
  • 雑誌名: Journal of Reproduction and Development 巻: 57巻 ページ: 120-126
  • NAID: 10027901389
  • 査読あり
• [学会発表] ウシ線維芽細胞の培養時期が細胞周期および凍結乾燥後のDNA 損傷に与える影響 (2013)
  • 著者名/発表者名: 郡七海, 枝重圭祐, 葛西孫三郎, 赤木悟史, 保地眞一, 松川和嗣
  • 学会等名: 第117回日本畜産学会大会
  • 発表場所: 新潟大学五十嵐キャンパス, 新潟市
• [学会発表] Pasqualino LoiProduction of bovine blastocysts by nuclear transfer using freeze-dried fibroblast cells (2013)
  • 著者名/発表者名: Kazutsugu Matsukawa, Nanami Kori, Shinichi Hochi, Satoshi Akagi, Keisuke Edashige, Magosaburo Kasai
  • 学会等名: Society for the Study of Reproduction 46th Annual Meeting
  • 発表場所: Montreal (Canada)
• [学会発表] アスコルビン酸2 リン酸の発生培地への添加がウシ体外受精胚の発生に及ぼす影響 (2013)
  • 著者名/発表者名: 竹中由布, 枝重圭祐, 葛西孫三郎, 松川和嗣
  • 学会等名: 第116回日本畜産学会大会
  • 発表場所: 広島市
• [学会発表] Production of bovine blastocysts by nuclear transfer using freeze-dried fibroblast cells (2013)
  • 著者名/発表者名: Kazutsugu Matsukawa, Nanami Kori, Shinichi Hochi, Satoshi Akagi, Keisuke Edashige, Magosaburo Kasai, Pasqualino Loi
  • 学会等名: Society for the Study of Reproduction 46th Annual Meeting
  • 発表場所: Palais dea congres de Montreal (カナダ、モントリオール）
• [学会発表] ウシ線維芽細胞の培養時期が細胞周期および凍結乾燥後のDNA損傷に与える影響 (2013)
  • 著者名/発表者名: 郡七海，枝重圭祐，葛西孫三郎，赤木悟史，保地眞一，松川和嗣
  • 学会等名: 第117回日本畜産学会大会
  • 発表場所: 新潟大学(新潟県新潟市）
• [学会発表] アスコルビン酸2リン酸の発生培地への添加がウシ体外受精胚の発生に及ぼす影響 (2013)
  • 著者名/発表者名: 松川 和嗣
  • 学会等名: 第116回日本畜産学会大会
  • 発表場所: 安田女子大学 (広島県広島市)
• [学会発表] L-アスコルビン酸2リン酸の培地への添加がウシ凍結融解胚および切断2分離胚の生存性に及ぼす影響 (2012)
  • 著者名/発表者名: 久々彩香, 田村奈々, 竹中由布, 枝重圭祐, 葛西孫三郎, 松川和嗣
  • 学会等名: 第105回日本繁殖生物学会大会
  • 発表場所: つくば市
• [学会発表] 予備凍結および保存温度が凍結乾燥ウシ体細胞のDNA 損傷および核移植後の発生に及ぼす影響 (2012)
  • 著者名/発表者名: 西本あずさ, 枝重圭祐, 葛西孫三郎, 保地眞一, 松川和嗣
  • 学会等名: 第105回日本繁殖生物学会大会
  • 発表場所: つくば市
• [学会発表] 備凍結および保存温度が凍結乾燥ウシ体細胞のDNA損傷および核移植後の発生に及ぼす影響 (2012)
  • 著者名/発表者名: 松川 和嗣
  • 学会等名: 第105回日本繁殖生物学会大会
  • 発表場所: 筑波大学 (茨城県つくば市)
• [学会発表] L-アスコルビン酸２リン酸の培地への添加がウシ凍結融解胚および切断２分離胚の生存性に及ぼす影響 (2012)
  • 著者名/発表者名: 松川 和嗣
  • 学会等名: 第105回日本繁殖生物学会大会
  • 発表場所: 筑波大学 (茨城県つくば市)
• [学会発表] ウシ核移植胚の集合処理によるクローン牛作出 (2011)
  • 著者名/発表者名: 赤木悟史
  • 学会等名: 第104回日本繁殖生物学会
  • 発表場所: いわて県民情報交流センター(岩手)
  • 年月日: 2011-09-16
• [学会発表] 凍結乾燥したウシか顆粒膜細胞の核移植に由来する胚盤胞の作出 (2011)
  • 著者名/発表者名: 長谷川由貴
  • 学会等名: 第104回日本繁殖生物学会
  • 発表場所: いわて県民情報交流センター(岩手)
  • 年月日: 2011-09-16
• [学会発表] ウシ体細胞の凍結乾燥後の保存法がDNA損傷度および核移植後の発生に及ぼす影響 (2011)
  • 著者名/発表者名: 長尾さや子
  • 学会等名: 第114回日本畜産学会
  • 発表場所: 北里大学(青森)
  • 年月日: 2011-08-27
• [学会発表] 凍結乾燥したウシ顆粒膜細胞の核移植に由来する胚盤胞の作出 (2011)
  • 著者名/発表者名: 長谷川由貴, 濱本圭佑, 保地眞一, 長尾さや子, 枝重圭祐, 葛西孫三郎, 松川和嗣
  • 学会等名: 第104回日本繁殖生物学会
  • 発表場所: 盛岡市
• [学会発表] ウシ核移植胚の集合処理によるクローン牛作出 (2011)
  • 著者名/発表者名: 赤木悟史, 山口大輔, 松川和嗣, 水谷英二, Somfai Tamas, 金田正弘, 原口清輝, 渡辺伸也, 足立憲隆, 高橋清也
  • 学会等名: 第104回日本繁殖生物学会
  • 発表場所: 盛岡市
• [学会発表] ウシ体細胞の凍結乾燥後の保存法がDNA 損傷度および核移植後の発生に及ぼす影響 (2011)
  • 著者名/発表者名: 長尾さや子, 濱本圭佑, 枝重圭祐, 葛西孫三郎, 保地眞一, 松川和嗣
  • 学会等名: 第114回日本畜産学会
  • 発表場所: 北里大学 (青森)
• [学会発表] The effects of donor cell cycle and the timing of oocyte activation on development of bovine nuclear transferred embryos in vivo (2011)
  • 著者名/発表者名: K. Matsukawa, S. Akagi, K. Fukunari, Y. Hosokawa, C. Yonezawa, S. Watanebe, and S. Takahashi
  • 学会等名: 37th Annual Conference of the International Embryo Transfer Society
  • 発表場所: Orlando (USA)
• [学会発表] Effect of treatment of bovine donor dells with mouse embryonic stem cell extract on the development of embryos after nuclear transfer (2011)
  • 著者名/発表者名: S. Akagi, E. Mizutani, Y. Inaba, M. Kaneda, T. Somfai, S. Haraguchi, S. Watanabe, Y. Hashiyada, K. Matsukawa
  • 学会等名: 37th Annual Conference of the International Embryo Transfer Society
  • 発表場所: Orlando (USA)
• [学会発表] 凍結乾燥したウシ体細胞による核移植胚作出の試み (2010)
  • 著者名/発表者名: 長尾さや子
  • 学会等名: 第103回日本繁殖生物学会
  • 発表場所: 北里大学(青森県)
  • 年月日: 2010-09-03
• [学会発表] スクレプタイド処理がウシ核移植胚の発生に及ぼす影響 (2010)
  • 著者名/発表者名: 赤木悟史
  • 学会等名: 第103回日本繁殖生物学会
  • 発表場所: 北里大学(青森県)
  • 年月日: 2010-09-03
• [学会発表] Significant improvement of blastocyst yield by production of twin blastosysts derived from two sister blastomeres of 2-cell embryos in pigs (2010)
  • 著者名/発表者名: Thanh Quang Dang-Nguyen
  • 学会等名: 第103回日本繁殖生物学会
  • 発表場所: 北里大学(青森県)
  • 年月日: 2010-09-03
• [学会発表] 凍結乾燥したウシ体細胞による核移植胚作出の試み (2010)
  • 著者名/発表者名: 長尾さや子, 長瀬祐樹, 枝重圭祐, 葛西孫三郎, 保地眞一, 松川和嗣
  • 学会等名: 第103回日本繁殖生物学会
  • 発表場所: 十和田市
• [学会発表] Significant improvement of blastocyst yield by production of twin blastosysts derived from two sister blastomeres of 2-cell embryos in pigs (2010)
  • 著者名/発表者名: Thanh Quang Dang-Nguyen, Masahiro Kaneda, Tamas Somfai, Kazutsugu Matsukawa, Satoshi Akagi, Kazuhiro Kikuchi, Michiko Nakai, Bui Xuan Nguyen, Atsushi Tajima, Yukio Kanai, Takashi Nagai
  • 学会等名: 第103回日本繁殖生物学会
  • 発表場所: 十和田市
• [学会発表] スクレプタイド処理がウシ核移植胚の発生に及ぼす影響 (2010)
  • 著者名/発表者名: 赤木悟史, 山中賢一, 高橋昌志, 金田正弘, 水谷英二, ソムファイ・タマス, 渡辺伸也, 久保正法, 橋谷田豊, 松川和嗣
  • 学会等名: 第103回日本繁殖生物学会
  • 発表場所: 十和田市
• [図書] 新編畜産ハンドブック (2014)
  • 著者名/発表者名: 扇元 敬二, 他
  • 出版者: 講談社
• [図書] Transgenic Animal Technology (2014)
  • 著者名/発表者名: Pinkert CA, 他
  • 出版者: 3rd Edition
• [図書] 畜産ハンドブック (2014)
  • 著者名/発表者名: 扇元敬司、他
  • 出版者: 講談社サイエンティフィック
• [図書] Transgenic Animal Technology 3rd Edition (2014)
  • 著者名/発表者名: Ｐｉｎｋｅｒｔ ＣＡ，他
  • 出版者: ＥＬＳＥＶＩＥＲ