神経堤細胞選択的遺伝子発現機構を用いた高効率遺伝子ノックイン法の開発

• 研究課題/領域番号: 22700449
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 実験動物学
• 研究機関: 京都大学
• 研究代表者: 佐藤 崇裕 京都大学, iPS細胞研究所, 特任研究員 (10572000)
• 研究期間 (年度): 2010 – 2011
• 研究課題ステータス: 完了 (2011年度)
• 配分額: 4,030千円 (直接経費: 3,100千円、間接経費: 930千円); 2011年度: 1,560千円 (直接経費: 1,200千円、間接経費: 360千円); 2010年度: 2,470千円 (直接経費: 1,900千円、間接経費: 570千円)
• キーワード: 発生工学

研究概要

神経堤細胞における遺伝子発現の責任となるエンハンサー領域と、そこに結合する転写因子を同定するため、エンドセリンA受容体遺伝子プロモーター領域のルシフェラーゼアッセイを行い、転写開始点近傍で2つの転写因子がタンデムに結合する配列約30塩基の重要性が明らかになった。マウス生体内の神経堤細胞ではこのエンハンサー活性のみでは組織特異的高発現が得られず、他の領域との協調が必要であると考えられた。
Cre発現アデノウィルスとノックインベクターを用いた受精卵での遺伝子導入の検討では、lacZ発現アデノウィルスの感染によって高い発現が受精卵で得られたものの、その後の胚発生率に悪影響を及ぼすため、その克服が重要な課題となった。

研究成果

• [雑誌論文] Identification and developmental analysis of endothelin type-A expressing cells in the mouse kidney (2011)
  • 著者名/発表者名: Kitazawa T, Sato T, Nishiyama K, Asai R, Arima Y, Uchijima Y, Kurihara Y, Kurihara H
  • 雑誌名: Gene Expr Patterns 巻: 11 ページ: 371-7
  • 査読あり
• [雑誌論文] Identification and developmental analysis of endothelin receptor type-A expressing cells in the mouse kidney (2011)
  • 著者名/発表者名: Kitazawa T, Sato T, Nishiyama K, Asai R, Arima Y, Uchijima Y, Kurihara Y, Kurihara H.
  • 雑誌名: Gene Expr. Patterns 巻: 11 号: 7 ページ: 371-377
  • DOI: 10.1016/j.gep.2011.04.001
  • 査読あり
• [雑誌論文] Endothelin receptor type-A expression defines a distinct cardiac subdomain within the heart field, with a later implication of this signaling pathway in chamber myocardium formation (2010)
  • 著者名/発表者名: Asai R, Kurihara Y, Fujisawa K, Sato T, Kawamura Y, Kokubo H, Tonami K, Nishiyama K, Uchijima Y, Miyagawa-Tomita S, Kurihara H.
  • 雑誌名: Development 巻: 137 号: 22 ページ: 3823-3833
  • DOI: 10.1242/dev.054015
  • 査読あり
• [雑誌論文] Endothelin receptor type A expression defines a distinctcardiac subdomain within the heart field and is later implicated in chamber myocardium formation. (2010)
  • 著者名/発表者名: Asai R, Kurihara Y, Fujisawa K, Sato T, Kawamura Y, Kokubo H, Tonami K, Nishiyama K, Uchijima Y, Miyagawa-Tomita S, Kurihara H.
  • 雑誌名: Development 巻: 137 ページ: 3823-3833
  • 査読あり
• [学会発表] Hox gene Function and possible crosstalk with Dlx genes in cranofacial morphogenesis (2011)
  • 著者名/発表者名: Kitazawa T, Fujisawa K, Kurihara Y, Arima Y, Kawamura Y, Sato T, Uchijima Y, Kurihara H
  • 学会等名: The 34th Annual Meeting of the Molecular Biology Society of Japan
  • 発表場所: Yohohama
  • 年月日: 2011-12-13
• [学会発表] Hox gene Function and possible crosstalk with Dlx genes in cranofacial morphogenesis (2011)
  • 著者名/発表者名: Kitazawa T, Fujisawa K, Kurihara Y, Arima Y, Kawamura Y, Sato T, Uchijima Y, Kurihara H
  • 学会等名: The 34th Annual Meeting of the Molecular Biology Society of Japan
  • 発表場所: パシフィコ横浜
  • 年月日: 2011-12-13
• [学会発表] Endothelin-1/Endothelin type-A receptor signaling regulates pharyngeal arch artery development through Dlx5/6-independent pathway (2011)
  • 著者名/発表者名: Kim KS, Arima Y, Asai R, Sato T, Nishiyama K, Kurihara H
  • 学会等名: The 19th Annual Meeting of the Japanese Vascular Biology and Medicine Organization/The 1st Asia-Pscific Vascular Biology Meeting
  • 発表場所: Tokyo
  • 年月日: 2011-12-10
• [学会発表] Endothelin-1/Endothelin type-A receptor signaling regulates pharyngeal arch artery development through Dlx5/6-independent pathway (2011)
  • 著者名/発表者名: Kim KS, Arima Y, Asai R, Sato T, Nishiyama K, Kurihara H
  • 学会等名: The 19th Annual Meeting of the Japanese Vascular Biology and Medicine Organization The 1st Asia-Pscific Vascular Biology Meeting
  • 発表場所: Tokyo Station Conference
  • 年月日: 2011-12-10
• [学会発表] Endothelin type-A receptor expression defines a distinct subpoplation within the first heart field contributing to chamber myocardium (2010)
  • 著者名/発表者名: Asai R, Kurihara Y, Fujisawa K, Sato T, Kawamura Y, Kokubo H, Tonami K, Nishiyama K, Uchijima Y, Miyagawa-Tomita S, Kurihara H
  • 学会等名: BMB2010
  • 発表場所: Kobe
  • 年月日: 2010-12-10
• [学会発表] Endothelin type-A receptor expression defines a distinct subpoplation within the first heart field contributing to chamber myocardium (2010)
  • 著者名/発表者名: Asai R, Kurihara Y, Fujisawa K, Sato T, Kawamura Y, Kokubo H, Tonami K, Nishiyama K, Uchijima Y, Miyagawa-Tomita S, Kurihara H.
  • 学会等名: BMB2010
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2010-12-10
• [学会発表] Involvment of non-coding RNA in the Endothelin signaling in branchal arch development (2010)
  • 著者名/発表者名: Kurihara Y, Uchijima Y, Fujisawa K, Sato T, Kushiyama S, Asai R, Kitazawa T, Nishiyama K, Kurihara H
  • 学会等名: BMB2010
  • 発表場所: Kobe
  • 年月日: 2010-12-08
• [学会発表] Transcription regulation of non-coding RNA Evf-2 in the Endothelin-1/Dlx5/Dlx6 pathway (2010)
  • 著者名/発表者名: Uchijima Y, Kurihara Y, Sato T, Fujisawa K, Kushiyama S, Kurihara H
  • 学会等名: BMB2010
  • 発表場所: Kobe
  • 年月日: 2010-12-08
• [学会発表] Transcription regulation of non-coding RNA Evf-2 in the Endothelin-1/Dlx5/Dlx6 pathway (2010)
  • 著者名/発表者名: Uchijima Y, Kurihara Y, Sato T, Fujisawa K, Kushiyama S, Kurihara H.
  • 学会等名: BMB2010
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2010-12-08
• [学会発表] Involvment of non-coding RNA in the Endothelin signaling in branchal arch development (2010)
  • 著者名/発表者名: Kurihara Y, Uchijima Y, Fujisawa K, Sato T, Kushiyama S, Asai R, Kitazawa T, Nishiyama K, Kurihara H.
  • 学会等名: BMB2010
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2010-12-08
• [学会発表] Involvement of the endothelin-1/endothelin receptor type-A signaling in determination of the mandibular identity in mouse craniofacial development (2010)
  • 著者名/発表者名: Sato T, Kurihara Y, Asai R, Kawamura Y, Tonami K, Uchijima Y, Heude E, Ekker M, Levi G, Kurihara H
  • 学会等名: Gordon Research Conrference : Craniofacial Morphogenesis & Tissue Regeneration
  • 発表場所: Lucca(Barga), Italy
• [学会発表] Non-coding RNA regulation of endothelin signaling in branchal arch development (2010)
  • 著者名/発表者名: Kurihara Y, Uchijima Y, Fujisawa K, Sato T, Kushiyama S, Asai R, Kitazawa T, Nishiyama K, Kurihara H.
  • 学会等名: Gordon Research Conrference : Craniofacial Morphogenesis & Tissue Regeneration
  • 発表場所: Lucca(Barga), Italy
• [学会発表] Involvement of the endothelin-1/endothelin receptortype-A signaling in determination of the mandibular identity in mouse craniofacial development (2010)
  • 著者名/発表者名: Sato T, Kurihara Y, Asai R, Kawamura Y, Tonami K, UchijimaY, Heude E, Ekker M, Levi G, Kurihara H.
  • 学会等名: Gordon Research Conrference : Craniofacial Morphogenesis & Tissue Regeneration
  • 発表場所: Lucca (Barga), Italy
• [学会発表] Non-coding RNA regulation of endothelin signaling in branchal arch development (2010)
  • 著者名/発表者名: Kurihara Y, Uchijima Y, Fujisawa K, Sato T, Kushiyama S, Asai R, Kitazawa T, Nishiyama K, Kurihara H.
  • 学会等名: Gordon Research Conrference : Craniofacial Morphogenesis & Tissue Regeneration
  • 発表場所: Lucca (Barga), Italy
• [備考]
  • URL: http://www.cira.kyoto-u.ac.jp/i/index.html