動的なオリゴマー形成因子による新規シグナル伝達制御の構造基盤

• 研究課題/領域番号: 22770112
• 研究種目: 若手研究(B)
• 配分区分: 補助金
• 研究分野: 構造生物化学
• 研究機関: 群馬大学 (2011); 兵庫県立大学 (2010)
• 研究代表者: 寺脇 慎一 群馬大学, 大学院・工学研究科, 助教 (10452533)
• 研究期間 (年度): 2010 – 2011
• 研究課題ステータス: 完了 (2011年度)
• 配分額: 4,290千円 (直接経費: 3,300千円、間接経費: 990千円); 2011年度: 2,080千円 (直接経費: 1,600千円、間接経費: 480千円); 2010年度: 2,210千円 (直接経費: 1,700千円、間接経費: 510千円)
• キーワード: 動的オリゴマー形成 / Wntシグナル伝達 / DIXドメイン / CCD1 / Axin / Wntシグナル / X線結晶構造解析 / 構造生物学 / タンパク質複合体 / オリゴマー化

研究概要

本研究は、高等生物の細胞増殖、分化の制御にはたらくWntシグナル伝達において、動的なオリゴマーを形成して機能するCoiled-Coil DIX1(CCD1)とAxinの間でつくられる複合体の調製と結晶化、および大型放射光施設SPring-8を使用したX線結晶構造解析の研究を進めた。CCD1とAxinのオリゴマー形成と分子間相互作用の両方に必要とされるDIXドメインについて、発現系の構築と精製方法を検討した。また、AxinのCCD1結合領域を最適化して、動的光散乱測定による複合体試料の分析をおこなった。さらに、CCD1-Axin複合体の結晶化条件を探索し、得られた結晶について、X線回折実験をおこない結晶品質の評価をおこなった。その結果、分解能20Å程度の低分解能の回折点の観測に成功した。今後、結晶品質の改善に向けた研究を進める必要がある。

研究成果

• [雑誌論文] Crystallographic characterization of the DIX domain of the Wnt signalling positive regulator Ccd1. (2011)
  • 著者名/発表者名: Terawaki, S., Yano, K., Katsutani, T., Shiomi, K., Keino-Masu, K., Masu, M., Shomura, Y., Komori, H., Shibata, N. Higuchi Y.
  • 雑誌名: Acta Crystallogr. Sect F Struct. Biol. Cryst. Commun. 巻: 67 ページ: 758-761
  • 査読あり
• [雑誌論文] Crystallographic characterization of the DIX domain of the Wnt signalling positive regulator Ccd1 (2011)
  • 著者名/発表者名: Terawaki S, Yano K, Katsutani T, Shiomi K, Keino-Masu K, Masu M, Shomura Y, Komori H, Shibata N, Higuchi Y
  • 雑誌名: Acta Crystallogr Sect F Struct Biol Cryst Commun 巻: 67 ページ: 758-761
  • 査読あり
• [学会発表] 微小管依存的な物質輸送を制御するBICDの構造生物学的研究 (2011)
  • 著者名/発表者名: 寺脇慎一
  • 学会等名: 超異分野学会
  • 発表場所: 東京
  • 年月日: 2011-03-19
• [学会発表] Wntシグナル伝達で機能するCCD1 DIXドメインのX線結晶構造解析 (2010)
  • 著者名/発表者名: 寺脇慎一, 塩見健輔, 桝正幸, 柴田直樹, 樋口芳樹
  • 学会等名: 日本分子生物学会第33回年会
  • 発表場所: 神戸
  • 年月日: 2010-12-07
• [学会発表] Wntシグナル伝達で機能するCCD1 DIXドメインのX線結晶構造解析 (2010)
  • 著者名/発表者名: 寺脇慎一、塩見健輔、桝正幸、柴田直樹、樋口芳樹
  • 学会等名: 日本分子生物学会第33回年会
  • 発表場所: 神戸ポートピア(兵庫県)
  • 年月日: 2010-12-07
• [学会発表] Wntシグナル伝達で機能するCCD1のオリゴマー形成機構に関する構造学的研究 (2010)
  • 著者名/発表者名: 寺脇慎一, 塩見健輔, 桝正幸, 柴田直樹, 樋口芳樹
  • 学会等名: 日本結晶学会60周年記念年会
  • 発表場所: 大阪
  • 年月日: 2010-12-03
• [学会発表] Wntシグナル伝達で機能するCCD1のオリゴマー形成機構に関する構造学的研究 (2010)
  • 著者名/発表者名: 寺脇慎一、塩見健輔、桝正幸、柴田直樹、樋口芳樹
  • 学会等名: 日本結晶学会 60周年記念年会
  • 発表場所: 大阪大学コンベンションセンター(大阪府)
  • 年月日: 2010-12-03
• [学会発表] Wntシグナル制御因子Dishevelled-DIXドメインのX線構造解析 (2010)
  • 著者名/発表者名: 柴田直樹, 寺脇慎一, 小森博文, 庄村康人, Fiedler Marc, Bienz Mariann, 樋口芳樹
  • 学会等名: 第10回日本蛋白質学会年会
  • 発表場所: 札幌
  • 年月日: 2010-06-17
• [学会発表] Wntシグナル伝達ではたらくCCD1の構造化学的研究 (2010)
  • 著者名/発表者名: 寺脇慎一, 塩見健輔, 桝正幸, 柴田直樹, 樋口芳樹
  • 学会等名: 第10回日本蛋白質学会年会
  • 発表場所: 札幌
  • 年月日: 2010-06-17
• [学会発表] Wntシグナル伝達ではたらくCCD1の構造化学的研究 (2010)
  • 著者名/発表者名: 寺脇慎一、塩見健輔、桝正幸、柴田直樹、樋口芳樹
  • 学会等名: 日本結晶学会第10回年会
  • 発表場所: 札幌コンベンションセンター(北海道)
  • 年月日: 2010-06-17
• [学会発表] Wntシグナル制御因子Dishevelled-DIXドメインのX線構造解析 (2010)
  • 著者名/発表者名: 柴田直樹、寺脇慎一、小森博文、庄村康人、Fiedler Marc、Bienz Mariann、樋口芳樹
  • 学会等名: 日本結晶学会第10回年会
  • 発表場所: 札幌コンベンションセンター(北海道)
  • 年月日: 2010-06-17