| 研究課題/領域番号 |
22790978
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| 研究種目 |
若手研究(B)
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| 配分区分 | 補助金 |
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| 研究分野 |
小児科学
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| 研究機関 | 京都大学 |
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研究代表者 |
鷄内 伸二 京都大学, 医学研究科, 助教 (20553192)
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| 研究期間 (年度) |
2010 – 2011
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| 研究課題ステータス |
完了 (2011年度)
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| 配分額 *注記 |
3,900千円 (直接経費: 3,000千円、間接経費: 900千円)
2011年度: 2,210千円 (直接経費: 1,700千円、間接経費: 510千円)
2010年度: 1,690千円 (直接経費: 1,300千円、間接経費: 390千円)
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| キーワード | iPS細胞 / Cdk9 / GATA4 / trichostatin A / Duchenne / muscular dystrophy / QT延長 / p300 |
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| 研究概要 |
1.我々が同定した73個のGATA4結合パートナーの中で転写伸長因子であるcyclin dependent kinase 9(Cdk9)に着目した。マウスES細胞を用いた心筋分化系においてCdk9はGATA4、RNA pol II、p300と複合体を形成し心筋特異的遺伝子の転写伸長反応に関与した。Cdk9によるp300リン酸化、活性化p300によるGATA4のアセチル化、アセチル化GATA4のDNA結合能の上昇が心筋分化を促進することが明らかとなった。次に多種マウスiPS細胞株とES細胞株を用いて、その心筋分化効率を比較し、心筋の初期分化に関わる重要な因子をスクリーニングし、さらにHDAC阻害剤トリコスタチンA(TSA)の心筋分化に与える影響を検討した。その結果、心筋分化初期においてOct3/4の発現レベルや核内HDAC4発現レベルが心筋の初期分化を制御する事が明らかとなった。またTSAはすべての細胞株で心筋分化を促進させた。そのメカニズムの一つとしてHDAC4を核外輸送しHDAC4による心筋特異的転写因子の抑制を解除することを明らかにした。
2.ヒトiPS細胞については、Duchenne型筋ジストロフィー患者より5株、コントロールとして父親から3株、母親から2株のiPS細胞を作成した。作成方法は高橋、山中らが2007年のCellに発表した方法を用いた。いずれのiPS細胞株もマイトマイシンC処理したFeeder細胞状で未分化な形態を保持し、増殖培養が可能であった。また、qPCRを用いた結果ではいずれの細胞株においてもExogenous GeneのSilencingが見られた。現在これらのiPS細胞株に対して染色体異常の有無、未分化マーカーの発現レベル、in vitroでの三胚葉分化、in vivoでのテラトーマ形成について評価中である。これらの評価終了後に今後の研究使用に適した細胞株を選別し、マウスES細胞で行なったTSAを用いた心筋分化方法を試す予定である。QT延長症候群患者のiPS細胞については現在適した患者のリクルート中である。
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