| 研究概要 |
Rax(retina and anterior neural fold homeobox) promotor下にDsRed-neo casseteを挿入したプラスミドを作成した。続いて相同組み換えを用いてBACクローンにリコンビナントプラスミドを導入した。同BACクローンをelectroporationを用いてmiPS細胞に導入した。(以後RxDsRed-miPSとする)。RxDsRed-miPSをOsakada(Osakada F, Ikeda H, Sasai Y, Takahashi M. Nat Protoc. 2009 ; 4(6): 811-24.)らの方法(serum free embryoid body+Dkk-1/LeftyA/FBS/activin)を用いて網膜前駆細胞へと分化誘導をおこなった。既報どおりにday9にて、蛍光の弱いものを含めれば20ライン中、全ラインでDsRed陽性細胞を検出することができた。続いて、フローサイトメトリーにてRxDsRed陽性細胞のソートを行った。ソートによりRaxDsRed陽性細胞集団を得ることができた。
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