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ラマン光学活性分光を基盤とした色素タンパク質の活性部位構造を解析する新技術の確立

研究課題

研究課題/領域番号 22K05037
研究種目

基盤研究(C)

配分区分基金
応募区分一般
審査区分 小区分32010:基礎物理化学関連
研究機関佐賀大学

研究代表者

海野 雅司  佐賀大学, 理工学部, 教授 (50255428)

研究期間 (年度) 2022-04-01 – 2025-03-31
研究課題ステータス 交付 (2023年度)
配分額 *注記
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2024年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2023年度: 1,170千円 (直接経費: 900千円、間接経費: 270千円)
2022年度: 1,820千円 (直接経費: 1,400千円、間接経費: 420千円)
キーワード分子分光学 / 生物物理学 / 振動分光 / 光受容タンパク質 / 量子化学計算 / キラリティー
研究開始時の研究の概要

ラマン光学活性分光はラマン散乱光の左右円偏光成分の差を検出する手法であり、キラルな分子を区別できる振動光学活性分光の一つである。我々は色素タンパク質のラマン光学活性スペクトルを前期共鳴条件下で観測することで、活性中心である発色団の歪みなどの立体構造情報を得ることができることを示してきた。本研究では本手法をさらに発展させ、従来では適用できなかった視物質ロドプシンや光反応中間体の構造決定を行う。

研究実績の概要

申請者らはラマン光学活性分光(Raman optical activity、ROA)と呼ばれる分光法を光受容タンパク質のような色素タンパク質に応用してきた。本手法は活性中心である補欠分子の歪んだ構造など、他では得られない活性部位の立体構造情報を得ることができる。我々は、この独自開発してきた研究手法を生体分子科学の分野において広く使われる計測法として発展・確立させたいと考えている。この目的の達成のため、本研究では今まで適用することができなかった視物質ロドプシンや植物やシアノバクテリアの光センサーであるフィトクロム類への応用を可能にする1064nm励起のラマン光学活性分光装置、光反応中間体などへの応用を可能にする低温ラマン光学活性分光装置の開発ならびにその応用研究を実施する。
2023年度には、上記の1064nm励起のラマン光学活性分光装置および低温ラマン光学活性分光装置の開発に取り組んだ。1064nm励起のラマン光学活性分光装置の開発は終了し、標準試料のα-ピネンなどのラマン光学活性スペクトルの測定に成功した。本装置は1064nmの連続発振レーザーと自作の光学系、小型分光器ならびにInGaAs検出器から構成され、散乱円偏光方式を採用した光学系から構成される。今後は光受容タンパク質への応用研究を実施する計画である。
一方、低温ラマン光学活性分光装置では785nmの連続発振レーザーと自作の光学系、小型分光器ならびにCCD検出器からなる装置を組み立て、クライオスタットに取り付けた標準試料のラマン光学活性スペクトルを測定できることを確認した。

現在までの達成度 (区分)
現在までの達成度 (区分)

2: おおむね順調に進展している

理由

本年度は申請者らが開発してきたラマン光学活性分光法をさらに発展させるため、2つの装置開発に取り組んだ。
1064nm励起のラマン光学活性分光装置については、1064nmの連続発振レーザーと自作の光学系、小型分光器ならびにInGaAs検出器から構成されるラマン分光装置を拡張し、散乱円偏光方式を採用した光学系から構成されるラマン光学活性分光装置を製作した。標準試料のα-ピネンについて、ラマン光学活性が観測されることを確認した。
2つ目の装置開発は低温ラマン光学活性分光装置の開発である。本装置は785nmの連続発振レーザーと自作の光学系、小型分光器ならびにCCD検出器からなる装置を組み立て、クライオスタットに対応する光学系となっている。既にクライオスタットに取り付けた標準試料のラマン光学活性スペクトルを測定できることを確認した。今後は低温下におけるラマン光学活性スペクトル測定を試みる計画である。

今後の研究の推進方策

研究3年目(最終年度)である2024年度は開発した装置を活用した応用研究を実施することを目的とする。1064nm励起のラマン光学活性分光については、シアノバクテリアが示す補色順化のための光スイッチタンパク質であるシアの爆テリオクロムRcaEや、シアノバクテリアがもつ光センサータンパク質のフィトクロム(Cph1)、視物質ロドプシンを対象に、ラマン光学活性スペクトルの測定を目指す。またラマン光学活性スペクトルの測定後は分子動力学計算や量子化学計算によるスペクトル予測を行い、活性部位構造の精密構造解析を行う。
一方、低温ラマン光学活性分光装置では、低温でのラマン光学活性スペクトルの測定を試みる。
以上の研究から、日本発の新規分光技術の開発研究を推進する。

報告書

(2件)
  • 2023 実施状況報告書
  • 2022 実施状況報告書
  • 研究成果

    (35件)

すべて 2024 2023 2022 その他

すべて 国際共同研究 (3件) 雑誌論文 (10件) (うち国際共著 2件、 査読あり 9件、 オープンアクセス 3件) 学会発表 (20件) (うち国際学会 6件、 招待講演 6件) 備考 (1件) 学会・シンポジウム開催 (1件)

  • [国際共同研究] Czech Academy of Sciences(チェコ)

    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [国際共同研究] Oklahoma State University(米国)

    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [国際共同研究] Czech Academy of Sciences(チェコ)

    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [雑誌論文] Configurational Changes of Retinal Schiff Base during Membrane Na<sup>+</sup> Transport by a Sodium Pumping Rhodopsin2024

    • 著者名/発表者名
      Fujisawa Tomotsumi、Kinoue Kouta、Seike Ryouhei、Kikukawa Takashi、Unno Masashi
    • 雑誌名

      The Journal of Physical Chemistry Letters

      巻: 15 号: 7 ページ: 1993-1998

    • DOI

      10.1021/acs.jpclett.3c03435

    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Near-Infrared Excited Raman Optical Activity as a Tool to Uncover Active Sites of Photoreceptor Proteins2024

    • 著者名/発表者名
      Fujisawa Tomotsumi、Unno Masashi
    • 雑誌名

      The Journal of Physical Chemistry B

      巻: 128 号: 10 ページ: 2228-2235

    • DOI

      10.1021/acs.jpcb.4c00094

    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Structure and Heterogeneity of Retinal Chromophore in Chloride Pump Rhodopsins Revealed by Raman Optical Activity2023

    • 著者名/発表者名
      Ohya Masaiku、Kikukawa Takashi、Matsuo Junpei、Tsukamoto Takashi、Nagaura Ryota、Fujisawa Tomotsumi、Unno Masashi
    • 雑誌名

      The Journal of Physical Chemistry B

      巻: 127 号: 21 ページ: 4775-4782

    • DOI

      10.1021/acs.jpcb.3c01801

    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Raman Optical Activity of Retinal Chromophore in Sensory Rhodopsin II2023

    • 著者名/発表者名
      Nishikawa Kouhei、Kuroiwa Ryosuke、Tamogami Jun、Unno Masashi、Fujisawa Tomotsumi
    • 雑誌名

      The Journal of Physical Chemistry B

      巻: 127 号: 33 ページ: 7244-7250

    • DOI

      10.1021/acs.jpcb.3c02391

    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] Spectroscopic Validation of Crystallographic Structures of a Protein Active Site by Chiroptical Spectroscopy2023

    • 著者名/発表者名
      Fujisawa Tomotsumi、Shingae Takahito、Ren Jie、Haraguchi Shojiro、Hanamoto Takeshi、Hoff Wouter D.、Unno Masashi
    • 雑誌名

      The Journal of Physical Chemistry Letters

      巻: 14 号: 41 ページ: 9304-9309

    • DOI

      10.1021/acs.jpclett.3c01954

    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
    • 査読あり / 国際共著
  • [雑誌論文] Molecular Vibrations in Chiral Europium Complexes Revealed by Near‐Infrared Raman Optical Activity2023

    • 著者名/発表者名
      Wu Tao、Bour Petr、Fujisawa Tomotsumi、Unno Masashi
    • 雑誌名

      Advanced Science

      巻: 11 号: 1 ページ: 2305521-2305521

    • DOI

      10.1002/advs.202305521

    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス / 国際共著
  • [雑誌論文] Reisomerization of retinal represents a molecular switch mediating Na+ uptake and release by a bacterial sodium-pumping rhodopsin2022

    • 著者名/発表者名
      Fujisawa, T., Kinoue, K. Seike, R., Kikukawa, T., Unno, M.
    • 雑誌名

      Journal of biological chemistry

      巻: 298 号: 9 ページ: 102366-102366

    • DOI

      10.1016/j.jbc.2022.102366

    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [雑誌論文] Advanced spectral analysis of complex molecular system2022

    • 著者名/発表者名
      Fujisawa Tomotsumi、Unno Masashi
    • 雑誌名

      Molecular and Laser Spectroscopy Advances and Applications

      巻: 3 ページ: 25-54

    • DOI

      10.1016/b978-0-323-91249-5.00002-8

    • ISBN
      9780323912495
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [雑誌論文] 近赤外ラマン分光法の色素タンパク質への応用2022

    • 著者名/発表者名
      藤澤知績、海野雅司
    • 雑誌名

      分光研究

      巻: 71 ページ: 105-107

    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
    • 査読あり
  • [雑誌論文] ラマン光学活性によるプロテオロドプシン中のレチナール色素の構造解析2022

    • 著者名/発表者名
      藤澤知績、海野雅司
    • 雑誌名

      生物物理

      巻: 62 号: 6 ページ: 331-333

    • DOI

      10.2142/biophys.62.331

    • ISSN
      0582-4052, 1347-4219
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
    • 査読あり / オープンアクセス
  • [学会発表] Near-Infrared Raman Spectroscopy of a Bilin Chromophore in Cyanobacteriochrome RcaE2023

    • 著者名/発表者名
      Masashi Unno, Yuji Okuda, Risako Miyoshi, Takanari Kamo, Tomotsumi Fujisawa, Takayuki Nagae, Masaki Mishima, Toshihiko Eki, Yuu Hirose
    • 学会等名
      8th Asian Spectroscopy Conference
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
    • 国際学会 / 招待講演
  • [学会発表] Near-Infrared Raman Spectroscopy of a Bilin Chromophore in Cyanobacteriochrome RcaE2023

    • 著者名/発表者名
      Tomotsumi Fujisawa, Daisuke Shiga, Akihiro BaBa, Wouter D. Hoff, Masashi Unno
    • 学会等名
      8th Asian Spectroscopy Conference
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
    • 国際学会 / 招待講演
  • [学会発表] ラマン光学活性分光を用いてタンパク質の活性部位を“見る”2023

    • 著者名/発表者名
      海野 雅司
    • 学会等名
      第17回分子科学討論会2023
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
    • 国際学会 / 招待講演
  • [学会発表] クライオ時間分解ラマン分光法によるナトリウムポンプロドプシンの研究:O中間体における発色団構造変化2023

    • 著者名/発表者名
      藤澤 知績,木ノ上 晃汰,清家 陵平,菊川 峰志,海野 雅司
    • 学会等名
      第17回分子科学討論会2023
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] Structure and Heterogeneity of Retinal Chromophore in Chloride Pump Rhodopsins Revealed by Raman Optical Activity2023

    • 著者名/発表者名
      Masaiku Ohya, Takashi Kikukawa, Takashi Tsukamoto, Tomotsumi Fujisawa, Masashi Unno
    • 学会等名
      19th International Conference on Chiroptical Spectroscopy (CD2023)
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
    • 国際学会
  • [学会発表] 低温ラマン分光法によるシアノバクテリオクロム RcaE の緑色吸収型から赤色吸収型への光変 換過程の研究2023

    • 著者名/発表者名
      Yasuhiro Jyojima, Masako Hamada, Yuu Hirose, Masashi Unno, Tomotsumi Fujisawa
    • 学会等名
      第61回日本生物物理学会年会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] ラマン光学活性分光を用いたクロライドポンプ微生物型ロドプシンの活性部位構造に関する研究2023

    • 著者名/発表者名
      Masashi Unno, Masaiku Ohya, Takashi Kikukawa, Junpei Matsuo, Takashi Tsukamoto, Ryota Nagaura, Tomotsumi Fujisawa
    • 学会等名
      第61回日本生物物理学会年会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] ナトリウムポンプロドプシンにおけるレチナールシッフ塩基の配座変化2023

    • 著者名/発表者名
      Tomotsumi Fujisawa, Kouta Kinoue, Ryouhei Seike, Takashi Kikukawa, Masashi Unno
    • 学会等名
      第61回日本生物物理学会年会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] ラマン分光法による青/橙色シアノバクテリオクロムの青色吸収型の構造解析2023

    • 著者名/発表者名
      Ryoka Seto, Masako Hamada, Yuu Hirose, Tomotsumi Fujisawa, Masashi Unno
    • 学会等名
      第61回日本生物物理学会年会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] ラマン分光法による青/橙色シアノバクテリオクロムの青色吸収型の構造解析ラマン分光法およびアミノ酸置換体を用いたシアノバクテリオクロム RcaE における Lys261 の 役割の解明2023

    • 著者名/発表者名
      Taisei Koga, Masako Hamada, Yuu Hirose, Tomotsumi Fujisawa, Masashi Unno
    • 学会等名
      第61回日本生物物理学会年会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] Rhodospirillum centenum 由来の photoactive yellow protein の低温分光分析2023

    • 著者名/発表者名
      Kirari Ogata, Tomotsumi Fujisawa, Wouter D Hoff, Masashi Unno
    • 学会等名
      第61回日本生物物理学会年会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] Cryogenic Raman study of early photointermediates of photoactive yellow protein2023

    • 著者名/発表者名
      Shota Kawasaki, Tomotsumi Fujisawa, Wouter D Hoff, Masasi Unno
    • 学会等名
      第61回日本生物物理学会年会
    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書
  • [学会発表] New probe for porcelain glazes by luminescence at near-infrared excitation2022

    • 著者名/発表者名
      Masashi Unno
    • 学会等名
      The 12th International Conference on High-Performance Ceramics
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
    • 国際学会 / 招待講演
  • [学会発表] ラマン光学活性分光を用いてタンパク質の活性部位を “見る”2022

    • 著者名/発表者名
      海野 雅司
    • 学会等名
      原子衝突学会 第 47 回年会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
    • 招待講演
  • [学会発表] ラマン光学活性分光および計算化学を用いたビタミン B12 の溶液構造 解析と光センサータンパク質 CarH への応用2022

    • 著者名/発表者名
      谷 拓巳, 村木 則文, 藤澤 知績, 青野 重利, 海野 雅司
    • 学会等名
      第48回生体分子科学討論会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] シアノバクテリオクロム RcaE におけるユニークな C15‐E,syn 型ビリン発色団のラマン分光法2022

    • 著者名/発表者名
      Yuji Okuda, Risako Miyoshi, Takanari Kamo, Tomotsumi Fujisawa, Takayuki Nagae, Masaki Mishima, Toshihiko Eki, Yuu Hirose, Masashi Unno
    • 学会等名
      第60回日本生物物理学会年会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] Time-resolved cryo-Raman study of Na+ uptake and release by a sodium pumping rhodopsin from Indibacter alkaliphilus2022

    • 著者名/発表者名
      Tomotsumi Fujisawa, Kouta Kinoue, Ryouhei Seike, Takashi Kikukawa, Masashi Unno
    • 学会等名
      第60回日本生物物理学会年会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] 低温ラマン分光法による photoactive yellow protein の L 中間体の構造解析2022

    • 著者名/発表者名
      Shota Kawasaki, Tomotsumi Fujisawa, D. Hoff Wotuer, Masashi Unno
    • 学会等名
      第60回日本生物物理学会年会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] 低温ラマン分光法による光駆動 Cl-ポンプ NMR3 の発色団構造変化の研究2022

    • 著者名/発表者名
      Natsuki Ejima, Tomotsumi Fujisawa, Takashi Kikukawa, Masashi Unno
    • 学会等名
      第60回日本生物物理学会年会
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
  • [学会発表] Retinal conformations in microbial rhodopsins probed by Raman optical activity2022

    • 著者名/発表者名
      Masashi Unno, Tomotsumi Fujisawa, Takashi Kikukawa
    • 学会等名
      19th International Conference on Retinal Proteins
    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書
    • 国際学会 / 招待講演
  • [備考] 佐賀大学 海野-藤澤研究室ホームページ

    • URL

      http://biophysics.chem.saga-u.ac.jp/unno-lab/homu.html

    • 関連する報告書
      2023 実施状況報告書 2022 実施状況報告書
  • [学会・シンポジウム開催] 分子分光学に関する研究会2022

    • 関連する報告書
      2022 実施状況報告書

URL: 

公開日: 2022-04-19   更新日: 2024-12-25  

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