| 研究課題/領域番号 |
22K05444
|
|---|
| 研究種目 |
基盤研究(C)
|
| 配分区分 | 基金 |
|---|
| 応募区分 | 一般 |
|---|
| 審査区分 |
小区分38030:応用生物化学関連
|
|---|
| 研究機関 | 札幌医科大学 |
|---|
研究代表者 |
甲斐 正広 札幌医科大学, 医学部, 講師 (80260777)
|
|---|
| 研究分担者 |
鈴木 拓 札幌医科大学, 医学部, 教授 (20381254)
|
|---|
| 研究期間 (年度) |
2022-04-01 – 2025-03-31
|
| 研究課題ステータス |
交付 (2023年度)
|
| 配分額 *注記 |
4,160千円 (直接経費: 3,200千円、間接経費: 960千円)
2024年度: 1,300千円 (直接経費: 1,000千円、間接経費: 300千円)
2023年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
2022年度: 1,430千円 (直接経費: 1,100千円、間接経費: 330千円)
|
|---|
| キーワード | ジアシルグリセロールキナーゼ / 大腸がん / メラノーマ |
|---|
| 研究開始時の研究の概要 |
脂質代謝酵素であるジアシルグリセロールキナーゼ(DGK)は、細胞内シグナル伝達で重要な役割を担っている。近年DGKとがんとの関連が明らかになりつつあり、DGKαやDGKζはがん遺伝子として機能することが報告された。一方我々は、DGKγが大腸がんにおいてエピジェネティックに発現抑制されるがん抑制遺伝子候補であることを見いだした。しかしこれらDGKが細胞内でどのように機能し、がんの進展とどのように関与しているのか、そのメカニズムは未だ不明である。本研究は分子腫瘍学的解析と生化学的解析を統合することで、細胞内情報伝達系におけるDGKの位置付けを解明し、新たながん治療の道筋を探ることを目的とする。
|
| 研究実績の概要 |
ジアシルグリセロールキナーゼζ(DGKZ)に関するプロジェクトでは腫瘍の悪性度と関連するDGKZの新たな生理機能について探索している。昨年度の研究で、大腸がんの進展に関与する可能性のあるアイソフォームとして２つのアイソフォームを同定した(DGKZ-V4およびDGKZ-V5)。この２アイソフォームのcDNAクローンを用いてフェノタイプの違いを検討する予定であったが、得られたクローンに不備があったことが判明したためにDGK-V４アイソフォームのクローニングを再び試みることとなった。いろいろと条件を検討しながらクローニングを行ったが、どれも成功に至らなかったので、最終的に合成DNAを外注することにした。
メラノーマにおけるジアシルグリセロールキナーゼγ(DGKG)の生理機能探索プロジェクトでは、DGKGと結合する新規タンパク質を同定することを目的としている。初期の計画にしたがって、細胞抽出物から免疫沈降法によってDGKGを単離し、電気泳動解析から得られたDGKGと結合する可能性をもつタンパク質群について、質量分析法を用いて候補タンパク質の同定を行った。しかしこれまでのところ非特異的結合によるであろうタンパク質しか検出されておらず、現在実験法の見直しを行っている。
|
| 現在までの達成度 (区分) |
現在までの達成度 (区分)
4: 遅れている
理由
計画よりもかなり遅れている。残り１年で少しでも実績を上げるために工夫したい。
|
| 今後の研究の推進方策 |
DGKZプロジェクトについてはV４の発現ベクターが完成したところで、予定通りにアイソフォームの発現が細胞のフェノタイプに及ぼす違いについて検討する。増殖、遊走、浸潤、アポトーシスなどの影響について違いがあるかどうか確認したい。そして異なる結果を生じる細胞応答から逆算してDGKZが関与するシグナリング経路の同定を目指す。
DGKGプロジェクトではDGKGと結合するタンパク質の探索は引き続き行いたい。ただし従来の免疫沈降法ではうまくいかないので、現在近接ラベリング法を合わせた免疫沈降法を検討している。相互作用の弱いタンパク質の結合の同定を期待している。
|
